适用于小麦叶片总蛋白分析的双向电泳技术

双向电泳技术越来越成为植物蛋白质组研究中的关键技术,样品制备、固相预制胶条水化、等电聚焦及SDS—PAGE都是影响双向电泳结果的重要步骤,本研究以晋麦47号小麦叶片为研究材料,在样品除盐、预制胶条水化方式、第二向SDS—PAGE电压选择方面进行了探索与优化,通过比较双向电泳图谱,建立适用于小麦叶片总蛋白质分析的双向电泳技术体系．结果表明：样品经多步除盐并加长除盐时间后进行双向电泳,蛋白能较好地被分离,2-DE图谱蛋白点较多,分辨率较高;IPG胶条先后经被动水化与主动水化比仅主动水化的2-DE图谱蛋白点损失少;第二向SDS—PAGE中电压选择120V较200V的2．DE图谱蛋白点拖尾少,纹理现象少．     

金钗石斛DnMSI1-like基因的克隆和表达分析

MSIL(MSI1-like)是一类在真核生物中保守的蛋白质,在动物和植物的发育过程中具有多种的功能.本研究从金钗石斛花芽中分离了一个MSIL蛋白的c DNA序列,长度为1 640 bp,含有一个长度为1 206 bp的开放阅读框;预测其编码的蛋白质在序列、结构域组织和空间结构上均与拟南芥At MSI1蛋白相似,故命名为Dn MSI1-like.Dn MSI1-like基因的表达具有明显的组织差异性,在金钗石斛的根、花和腋芽中表达较高,但在叶和假鳞茎中表达较低;低温处理时,花芽中Dn MSI1-like的表达急剧升高.研究结果为深入探索金钗石斛的生长发育如低温相关的开花调控机制提供基础.     

大型海藻龙须菜蛋白提取及双向电泳体系的优化

本文以龙须菜为材料,比较了尿素/硫脲法,改良丙酮沉淀法,Trizol法3种不同蛋白质提取方法;并从胶条长度及pH范围,上样量,分离胶浓度等因素探讨了双向电泳技术体系的优化.结果表明:采用Trizol法辅以超声破碎提取龙须菜总蛋白效果优于尿素/硫脲法和改良丙酮沉淀法;同时,采用pH 4-7,11 cm胶条,上样量为800μg,分离胶浓度为12%的双向电泳条件可获得背景清晰,分辨率好的二维电泳图谱.该体系也可以为龙须菜属和江蓠属其他海藻的蛋白质双向电泳分析提供参考.     

耐辐射菌Micrococcus luteus SC1204总蛋白双向电泳体系的建立

以耐辐射藤黄微球菌Micrococcus luteus SC1204为研究对象,建立总蛋白双向电泳体系.结果表明,采用液氮研磨-酚/超高速离心法提取总蛋白,裂解液Ⅱ(8 mol/L尿素、2mol/L硫脲、60mmol/L DTT、4%CHAPS、40mmol/L Tris、1%pH 3~10NL IPG buffer、0.002%BPB)溶解蛋白,使用24cm、pH 4~7的IPG胶条,上样量250μg及等电聚焦7h(56000Vh),可获得满意分辨率的双向电泳图谱,适用于后续的质谱及差异蛋白质组分析.     

低温胁迫下棉花子叶蛋白质差异表达的双向电泳分析

采用TCA-丙酮沉淀法,改良优化了棉化蛋白质组研究中的双向电泳技术.通过对根和子叶全细胞蛋白的提取、蛋白的溶解、胶条的选择及电泳等环节的优化,得到了重复性很高、分辨率很好的蛋白质图谱.进一步对5 d苗龄的棉花进行4℃低温处理12 h后,提取子叶的蛋白质,利用双向电泳技术分离全细胞蛋白.并用PDQuest软件分析比较棉花子叶在低温处理下的蛋白表达谱,得到了49个有显著差异的蛋白点.其中,低温处理上调表达的蛋白点有27个,减弱表达的蛋白点有22个,推测这些差异蛋白点可能与低温胁迫相关.     

橡胶草叶片蛋白质提取方法的选择及双向电泳体系的优化

目的为了建立起橡胶草叶片组织的蛋白双向电泳体系。方法采用5种不同方法提取橡胶草叶片蛋白,并通过蛋白提取率和单向SDS-PAGE电泳的比较,筛选出改良TCA-丙酮沉淀法、酚-乙酸铵沉淀法、Tris浸提法3种方法进行2-DE电泳。结果表明选择改良TCA-丙酮法为最合适的蛋白质提取方法。为进一步优化体系,比较了不同染色方法、上样量和固相p H梯度预制胶条(IPG)的p H范围对双向电泳结果的影响,电泳结果表明使用17 cm p H 3-10的IPG胶条、上样量为1200μg、考马斯亮蓝染色法能分离得到更多的蛋白点,是橡胶草叶片双向电泳体系的最优条件。结论本研究初步建立了橡胶草叶片蛋白质双向电泳体系,为深入研究橡胶草蛋白质组学提供依据。     

3种药用石斛多糖的抗氧化活性比较研究

比较了铁皮石斛、大苞鞘石斛和金钗石斛3种石斛茎段粗多糖、精多糖（除蛋白多糖）和多糖组分（过层析柱多糖分离组分）对DPPH、OH和O-2 3种自由基的离体抗氧化活性. 结果表明:随着多糖纯度增强和质量浓度的提高，抗氧化效果均显著增强，在12 g/L时，处理效果最佳，铁皮石斛多糖组分（DOPP-I）、大苞鞘石斛多糖组分（DWPP-I）和金钗石斛多糖组分（DNPP-I）对DPPH自由基的清除率均在75%以上，对OH自由基的清除率在 84%以上，且显著优于Vc (Vitamin c)，但3种多糖组分间差异不显著；3种石斛多糖对O-2自由基的清除能力显著低于Vc，但DWPP-I的清除能力显著高于DOPP-I和DNPP-I. 总之，大苞鞘石斛多糖组分DWPP-I的抗氧化能力略优于铁皮石斛和金钗石斛.     

油菜双向电泳技术体系的优化

为建立一套可以较好地分离油菜不同器官(花蕾、化药、叶片)的双向电泳技术体系,对IPG胶条的pH范围、凝胶染色的方法以及蛋白质的上样量进行优化.结果表明,以pH=4~7,17cm的IPG胶条进行双向电泳,胶体考马斯亮蓝染色,蛋白质上样量为800μg时,油菜的花蕾、化药以及叶片蛋白质均可得到很好的分离,获得的2-DE凝胶图谱清晰.为检验优化后的双向电泳技术体系与质谱的兼容性,选取10个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析,发现这些蛋白质点经质谱分析后均可得到成功鉴定.表明该分离体系与质谱兼容性较好,蛋白质点鉴定成功率较高.     

肝癌细胞株HepG-2的G1期细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

采用双向电泳分离肝癌细胞株 HepG2 的 G1 期细胞的蛋白质,经考马斯亮蓝染色及图像扫描与分析显示:在 pH3-10,13 cm 的 IPG 胶条上,可分离到 227 个重复性及分辨率均较好的蛋白斑点,蛋白斑点的匹配率为 84%.建立了 HepG2 的G1 期细胞蛋白质组双向电泳图谱,为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础.     

小鼠肾脏组织的双向电泳

对小鼠肾组织双向电泳(2-DE)实验中的样品保存、裂解液、胶条泡胀和染色等步骤研究发现：在-73℃，以液态保存的样品仍需尽量以相同的保存时间用于对比，或使用新处理的样品使2-DE图谱反映样品原先的蛋白质组成；优化的裂解液组成是尿素9．8mol／L、Tris 40mmol／L、CHAPS 40g／L、DTT 23mmol／L、CA 5g／L、PMSF 1mmol／L和EDTA 1mmol／L；胶条泡胀采用主动方式有利于大分子量蛋白质的2-DE分离；银染色过程中采用充分的水洗步骤使之获得背景鲜明的2-D图谱。在优化条件下，高分子区及碱性区蛋白质均得到理想分离，获得蛋白质点数达1491个，明显优于已有文献方法。     

生长调节物质对金钗石斛器官分化的影响

在植物的组织培养和快速繁殖过程中,外源激素对植株的器官分化有着非常重要的作用.作者采用了不同种类和浓度的激素对金钗石斛的试管苗进行了对比研究,结果表明:低浓度的6-BA、NAA和IBA均有利于诱导金钗石斛试管苗芽的分化,高浓度激素则起抑制作用;NAA和IBA具有促进试管苗根分化的作用,6-BA则抑制根的分化;6-BA和2,4-D能诱导试管苗开花,NAA和IBA则抑制开花;2,4-D能诱导原球茎的分化,而6-BA却抑制愈伤组织的形成.     

三碘苯甲酸和多效唑诱导黄瓜子叶节花分化临界时间的研究

7d龄黄瓜无菌苗完全切除全部下胚轴、1 / 2子叶和顶芽 ,取子叶节分别培养于诱芽和诱花培养基上 ,进行逐日更换培养基试验 .诱导营养芽培养基中培养 1～ 3 d,转入诱花培养基 ,成花率在 1 4%～ 40 % ;4d后再转入诱花培养基 ,成花率显著降低至 7%左右 .诱花培养基中培养 1～ 2 d后转入诱芽培养基 ,成花率仅 7%～1 4% ,培养 3 d或 3 d以上转入诱芽培养基 ,成花率显著升高至 2 7%以上 ,培养 6～ 7d后转入诱芽培养基 ,直接成花率则可达 60 % .结果表明三碘苯甲酸和多效唑诱导黄瓜子叶节花分化的临界时间是 3 d左右 .     

文冠果花芽分化过程及内源激素动态变化

【目的】研究文冠果花芽分化过程外部形态变化与内部解剖结构的对应关系,并探究内源激素含量与花芽分化的关系,为文冠果花性别相关研究的适时采样与提高雌/雄花比例的调控技术提供参考。【方法】通过外部形态观测,结合石蜡切片技术,分析文冠果花芽分化内外部形态之间的对应关系。并采用高效液相色谱法(HPLC)对花芽分化过程中雌、雄能花的4种内源激素含量进行测定和比较,探究其与内源激素之间的关系。【结果】① 文冠果雌能花和雄能花在性别分化之前均为两性,雌能花的单核花粉粒在有丝分裂期呈液泡化衰败,雄能花大孢子母细胞四分体时期细胞停止分裂,性器官发育异常导致单性花的形成。此外,文冠果花芽分化内部结构与外部形态之间具有时序性对应关系。② 玉米素(zeatin,ZT)含量在花芽未分化期至雌蕊原基分化期逐渐上升,雌雄配子体形成时期,雌能花的ZT含量始终高于雄能花。雌能花雄蕊发育出现异常时的生长素(auxin,IAA)、胞落酸(abscisic acid,ABA)含量显著高于雄能花,赤霉素(gibberellin,GA)含量显著低于雄能花。说明高水平ZT促进花芽分化,利于雌能花的发育; 高水平的IAA和ABA具有促雌作用; 高水平的GA具有促雄效应。③ m(ABA)/m(IAA)、m(ABA)/m(GA)、m(ZT)/m(GA)在花芽未分化期至雌蕊原基分化期均处于较高水平,雄能花雌蕊发育异常时,其m(ABA)/m(IAA)和m(ZT)/m(IAA)显著高于雌能花。说明高水平的m(ABA)/m(IAA)、m(ABA)/m(GA)、m(ZT)/m(GA)有利于花芽分化; 高水平m(ABA)/m(IAA)、m(ZT)/m(IAA)对雄蕊发育有利。【结论】文冠果雌能花和雄能花各自对应另一性器官的败育导致了性别分化。花芽分化过程中,可以根据花芽外部形态判断内部分化时期。高水平的ZT含量、m(ABA)/m(IAA)、m(ABA)/m(GA)、m(ZT)/m(GA)利于花芽分化,高水平的m(ZT)、m(IAA)和m(ABA)利于雌能花发育,高水平的GA含量、m(ABA)/m(IAA)、m(ZT)/m(IAA)利于雄能花发育。     

菊花组织培养植株再生及其后代的变异

通过对微波处理后的菊花花蕾、叶片和茎进行组织培养,获得如下结果:1.菊花花蕾、叶片和茎3种外植体均能通过诱导形成愈伤组织,愈伤组织多以丛生苗的形式再生.其中,花蕾的愈伤组织诱导频率和苗的再生频率最高,花蕾可以作为菊花组织培养的良好起始材料;2.比较不同的培养基激素成分显示,在MS 6-BA3 mg/L NAA 0.5 mg/L的培养基上菊花花蕾再生频率最高;3.从诱变育种的角度考虑,微波处理20 s对菊花花蕾的离体培养是较理想的剂量;4.在获得的再生植株中出现了明显可见的形态变异.形态变异主要有4种类型:1)花序由头状花序转变为唇形花,花、茎、叶等形态特征与唇形科的植物(如:紫苏)非常相似;2)节间比亲本长约0.5 cm左右,叶片变大,枝条分蘖能力降低;3)在同一植株上开出的花朵出现了3种不同深浅的红色,即粉红、玫瑰红、深红色;4)株形出现丛生状.本研究结果为进一步利用组织培养实现菊花育种和利用获得的突变体研究栽培菊花的起源和菊花花发育提供了极好的前提材料.     

彩心建兰花枝茎节离体培养的研究

以彩心建兰的花芽为试验材料,选取幼嫩花枝上部茎节切段,在ＭＳ培养其中直接分化出花芽和营养芽。     

麝香百合、仙客来、瓜叶菊花芽分化的调控

复合生长调节剂处理对麝香百合等花芽的分化有明显的作用。其中A1,A2可促进麝香百合花工芽的分化,A2效果较A1好,经A2处理后,百合开花率达100%,同时使植株的开花数增加了1倍,花径增长1倍;B1,B2明显促进仙客来花芽分化,B2效果较B1好,经B2处理后,处理仙客来较对照植株的花蕾数增加41%;C1,C2明显促进瓜叶菊花芽分化,其中C1处理的瓜 叶菊较对照植株的花蕾数增加52%。     

仙蜜果花成分的研究

仙蜜果属仙人掌科植物,是一种集水果、蔬菜、花卉、药物和环保于一身的纯天然植物.具有很高的经济效益和市场价值,是一种具有巨大开发潜力的植物.本文分析比较仙蜜果花不同部位(花瓣、苞、芯)的营养成分、磷、钙、铜、铁、锌及维生素C含量的差异,以其有利于对该花进行针对性的综合利用和开发.     

金钗石斛种子非共生萌发和种质保存

报道了用金钗石斛(DendrobiumnobileLindl)已开裂果实的种子经无菌处理,播种在改良的KC培养基上培养,研究结果表明:种子萌发成原球茎,原球茎分化成幼苗。同时对原球茎、幼苗和茎芽进行冷冻保存和低温贮藏。最终研究结果为:冷冻保存的原球茎其分化率为51%,幼苗和茎芽存活率分别是35%、43%。低温贮存的原球茎分化率为75%,幼苗和茎芽的存活率分别是95%、97%。     

双向电泳检测技术综述

目前蛋白质组学（proteome）正在成为分析化学的研究热点，双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（2-DE）以其高通量和极高的分辨率成为蛋白质组学的核心技术，本文综述了不同类型的双向电泳检测技术的原理，比较分析了各种技术的优势和不足，并对双向电泳技术在蛋白质组学中今后的发展作了展望．     

一年两收金槐花不同时期的营养成分比较分析

为探讨一年两收金槐花不同时期叶片内营养物质的含量变化规律,以营养期、花芽期、花蕾期、盛花期和果期5个时期的一年两收金槐叶片为试材,对其干物质、粗纤维、粗脂肪、粗蛋白、钙和磷等含量进行测定分析。结果表明：干物质含量在第一季果期阶段含量最高（37.2%）,第二季花蕾期含量最高;第一季和第二季花芽期至花蕾期的干物质含量都呈现上升趋势,说明该阶段需要消耗大量营养物质。第二季采收时各时期粗蛋白含量均低于第一季采收各时期,均在花芽期含量最高,其中第一季采收花芽期为5.99%,第二季花芽期为5.35%。第二季粗脂肪含量除了花芽和盛花期略高于第一季外,其他时期都低于第一季,第二季粗脂肪含量最高为盛花期（1.19%）。第二季采收时金槐在花芽-花蕾-盛花阶段粗纤维、灰分和钙含量明显高于第一季,第二季磷含量在营养期-花芽-花蕾阶段要低于第一季,但在盛花期到果期要显著高于第一季,其中第二季时磷含量最高为盛花期（0.126%）。第二季芦丁含量显著低于第一季,其中第二季花蕾时期芦丁含量为27.5%,但第一季花蕾时期芦丁含量却达到36.7%。因此,可在第一季采收结束及时补充磷肥,以促进二季金槐的花芽分化。