布鲁氏菌PCR鉴定方法的研究与应用

目的:分析采用PCR法对于布鲁氏菌的鉴定诊断价值以及实用价值,同时研究如何快速实现定量荧光PCR检测,以及对组装PCR试剂盒的方法进行分析。方法:对布鲁氏菌进行常规鉴定,提取试验样本DNA,设计引物。结果:柯氏染色实验后,样本呈红色;在PCR分型方面,野毒株与疫苗株以及标准株共为15种,阴性没有表现出扩增片段。菌种包括了猪种、羊附睾种、羊种以及牛种,阴性没有表现出扩增片段;牛Ⅲ型以及羊Ⅱ型无特异性表现,牛Ⅰ型菌为野毒株。结论:PCR可以有效预防实验人员在操作的过程中被菌株感染,安全性良好,具有较高的应用价值。     

RT—PCR技术对BTV群,型特异性鉴定的研究

根据蓝舌病毒（ＢＴＶ）Ｌ２,Ｌ３核苷酸序列,设计,合成引物,建立ＢＴＶ群,型特异性ＲＴ－ＰＣＲ鉴定方法,对我国地方毒株进行群,型鉴定,结果表明;群特异ＲＴ－ＰＣＲ方法能覆盖目前我国已知或可能存在的ＢＴＶ血清型,与相关病毒无交叉反应,ＢＴＶ－１、ＢＴＶ－１６型型特异ＲＴ－ＰＣＲ方法对本型有专一性,用于检测临诊血样和组织样中ＢＴＶ的感染,结果证实该方法快速,敏感,特异。可作为临诊和进出口动物检疫中蓝舌     

牛早期胚胎性别鉴定的PCR方法研究

探讨了ＰＣＲ法鉴定牛早期胚胎性别时所用的引物,反应缓冲液中Ｍｇ＾２＋浓度,循环反应的次数及可能造成污染的各种因素对性别鉴定结果的影响。并对１８个胚胎进行了性别鉴定,移植３８枚性别鉴定后的胚胎,成功产下２头与预测性别一致的牛犊,胚胎性别可鉴率为９４．１％,预测性别符合率为１００％。     

PCR扩增ZFY及ZFX基因对奶牛的性别鉴定

根据人及鼠 ZFY 及 ZFX 基因设计一对引物(ZF_1;ZF_2),利用 PCR 方法对牛的ZFY 及 ZFX 基因进行扩增.将扩增片段用 RStI 酶切,再通过聚丙烯酰胺凝胶电泳后判定牛的性别.公牛 ZFY 基因的 PCR 扩增片段有一个 RStI 酶切位点,ZFX 基因没有 PSTI 酶切位点.所以公牛的 PCR 片段经酶切后出现三个片段(468bp;356bp;112bp).而母牛的 PCR 扩增片段酶切后仍只有一个片段(468bp).据此就可区别雌雄性别.     

应用PCR技术扩增DYZ 3 DNA特异顺序进行人类性别鉴定的研究

本文综合了Kogan等(1987)和Michal等(1989)的研究结果,设计合成了Y染色体α-卫星DNA特异的引物和Alu家族DNA特异的引物用于性别鉴定.该方法克服了原方法的不足,操作简便,成本低廉,能在更短的时间内完成实验.     

浅析RFID技术在奶粉安全监管中的应用

本文浅析RFID技术,并介绍了RFID技术在奶粉供应链中的应用,以及我国政府各食品安全监管部门通过RFID技术在奶粉供应链联合监管模式。     

肝片形吸虫种类鉴定PCR方法的建立

为了建立一种快速鉴定肝片吸虫种类的特异PCR方法,以肝片形吸虫基因组DNA为模板,以前后盘吸虫,胰阔盘吸虫,日本分体吸虫,牛弓首蛔虫、大片吸虫gDNA为对照,用肝片形吸虫特异性引物ITS-1、ITS-2进行PCR扩增,PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪观察;用核酸蛋白测定仪测定肝片形吸虫gDNA的浓度,然后将gDNA原液进行不同倍数的稀释,筛选最佳条件,进行敏感性检测.结果显示只有肝片吸虫样品有特异性条带,对照样品均呈阴性;可以检测到的最低DNA浓度分别为1.17 ng/μL、0.59 ng/μL.     

超临界流体技术在中草药有效成分提取中的应用

超临界流体技术是一项用于提取中草药有效成分的新技术。文中介绍了超临界流体技术在中草药有效成分提取的应用,并对该技术进一步在纳米材料的制备进行了展望。     

超临界萃取技术在中药材有效成分提取中的应用

介绍了超临界流体萃取技术的基本原理及优势,并阐述了超临界CO2萃取技术在中药材有效成分提取方面的应用和局限性。     

一种竹寄生真菌的分离鉴定及其有效成分发酵的初步研究

从乐山峨边县采集了一种竹寄生真菌，经过形态比较、菌丝特征的显微观察、组织切片和孢子的显微观察，以及其有效成分的比较，鉴定为竹黄（shiraiabambusicola）。其菌丝分离纯化后，以大米及马铃薯汁为基础培养基，分别研究了温度，pH值，碳源，氮源，水份等对该菌在固态条件下产Bei醌化合物的影响，并用正交实验选择了固态发酵的最佳培养条件：每kg基础培养基（大米）中添加硝酸铵20g、麦芽糖50g和马铃薯汁1200mL，温度26℃，自然pH值下，每克菌丝Bei醌类化合物的产量可达到2.4色价。     

建立实时荧光PCR快速鉴定鸡制品中鸡伤寒沙门氏菌的方法

建立基于Taqman探针实时荧光PCR检测鸡伤寒沙门氏菌(Salmonella gallinarum)的方法.根据GenBank公布的鸡伤寒沙门氏菌基因序列,设计引物和Taqman探针,采用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验.结果表明:特异性引物和探针可从34株鸡伤寒沙门氏菌菌株、26株其他血清型沙门氏菌和7株非沙门氏菌菌株中检测出全部的34株鸡伤寒沙门氏菌.以鸡伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.999,扩增效率为88.2%,最低检测浓度为5cfu/mL.对已接种鸡伤寒沙门氏菌的模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致.该方法特异性好、灵敏度高,是快速鉴定鸡伤寒沙门氏菌的有效方法.     

野葛特异性PCR检测方法的建立与应用研究

一个物种特有的DNA序列可以开发成能够识别该物种及其加工产品的标记.为寻找野葛(Pueraria lobata)特有的DNA序列,建立野葛特异性PCR检测方法,通过对Gen Bank中野葛基因信息的检索分析,筛选出了同源序列少特异性强的野葛查耳酮合成酶基因作为研究对象.对该基因的特定区域设计引物,建立了野葛特异性定性PCR检测方法.利用该方法对野葛14个不同居群的DNA进行PCR扩增,均能扩增出226 bp的片段.而用相同引物分别对20种其他植物的DNA进行扩增均未出现特异性扩增产物. PCR灵敏度实验结果表明该方法的检测灵敏度达到0.02 ng基因组DNA,对市场上的葛根产品进行检测结果表明该方法可以有效鉴定葛根产品中是否含有野葛成分.该野葛特异性PCR检测方法特异性强、灵敏度高,可用于野葛成分的检测与鉴定.     

红枣中营养、药用有效成分多糖的分离与提纯及其鉴定

对陕北地产红枣中营养、药用有效成分多糖进行了分离与纯化，并做了纸层析和红外光谱鉴定．确证其由D-( )-木糖和D-( )半乳糖所组成。     

利用PCR扩增的核糖体DNAs鉴定禾顶囊壳菌和瓶梗霉

小麦全蚀病是由禾顶囊壳菌引起的小麦根部病害,在全世界范围内普遍发生.用传统的方法鉴别和区分病原菌与非致病菌花费时间长而且有时不准确.本研究利用PCR技术,扩增了15个禾顶囊壳菌和瓶梗霉分离株的核糖体DNAs,并用限制性内切酶Dde I酶切后电泳,结果表明,该法可有效鉴别禾顶囊壳菌和瓶梗霉这2个不同的种.     

翡翠鉴定中红外光谱技术运用分析

为解决翡翠鉴定环节存在的效率低下、精度不足问题,规避由此引发的翡翠鉴定失误困境,保障翡翠鉴定高效性和准确性,该文引入红外光谱技术进行分析应用。首先简要介绍试验样品和仪器,明确样品选取思路和具体特征,然后讨论试验方法、总结试验现象。结果发现：红外光谱技术对翡翠鉴定工作帮助较大,可以用于翡翠A、B货鉴定,翡翠赝品、翡翠结构、透明度的鉴定等。     

超临界CO2萃取技术在中药有效成分提取中的应用新进展

介绍了超临界CO2萃取技术(SFE-CO2)提取中药有效成分的优越性及影响萃取效果的因素,综述了10多年来该技术在中药挥发油、生物碱、黄酮、醌类、皂苷等有效成分提取中的应用,并展望了SFE-CO2技术的应用前景.     

应用PCR技术快速检测妇科样本中的念珠菌分布

目的:传统的念珠菌检测方法存在耗时长、阳性率低的缺点,本研究将PCR技术应用于妇科念珠菌检测中,寻找出一种能够快速、准确、有效检测妇科念珠菌的方法.方法:收集临床妇科阴道分泌物样本100例,科玛嘉显色培养基进行培养,同时应用PCR方法对100例临床样本进行检测鉴定.结果:在100例样本中,传统培养方法的阳性率为41%,PCR方法检测的阳性率为72%.传统的念珠菌检测方法耗时长,尤其是培养法,至少需时48 h;应用PR方法对念珠菌进行检测,只需要5 h,且阳性检出率和准确性较高.结论:相对于念珠菌传统培养方法,PCR方法是一种更加简便理想的检测方法.     

微阵列PCR生物芯片及其检测技术的研究

微阵列技术本身是纳米尺度的分子操作和组装技术,纳米技术和微阵列技术的交叉融合必然会带来科技发展的飞跃。拥有我国自主知识产权的双步放大法纳米探针可视化生物微阵列PCR基因芯片已进入实用阶段。本文针对微阵列生物芯片的发展及其检测技术进行了研究,并分析了目前发展的现状和趋势。     

基于多重长PCR靶向捕获测序技术的高同源SNP鉴定

为建立一种高同源区段的单核苷酸多态性(SNP)基因分型技术,通过构建本地Blast对SNP所在的200和400 bp区段进行同源性评估,并筛选出高同源区段的SNP。利用第一轮多重长PCR(polymerase chain reaction)捕获329个样本的9个高同源区段SNP所在的长片段,使用纯化后的第一轮PCR产物作为模板进行扩增子建库测序,检测样本共得2 928个SNP位点信息,测序成功率高达98.885 6%。利用Hardy-Weinberg(HWE)法则计算试验研究的9个高同源区段SNP位点的基因频率(p值均大于0.05,符合HWE法则),并与NCBI(national center for biotechnology information)中千人基因组数据库中获取的基因频率相比对,发现二者单碱基基因频率一致(误差限<0.15)。研究表明,利用多重长PCR靶向捕获技术结合二代测序技术为高同源区段的SNP分型提供一个准确、快速、大样本检测方案。