醛基化大分子强化介孔泡沫硅中青霉素酰化酶和胰蛋白酶的固定化

为了提高酶的亚基增强固定化酶的稳定性,在介孔泡沫硅中对固定化酶进行共价修饰.以青霉素酰化酶和胰蛋白酶为目标酶,考察醛基化修饰对固定化酶活力、负载率的影响以及在酸性缓冲溶液、亲水有机体系和离子液体中的催化稳定性,并对固定化酶进行电泳分析.结果表明:醛基化修饰的青霉素酰化酶在酸性缓冲液中6h保留95%的残余活力,在疏水离子液体中50℃处理10h保留近80%的残余活力;醛基化胰蛋白酶在20%乙醇中50℃保持活力不变.因此,醛基化修饰能稳定酶的亚基,在创建酶催化的微环境的同时,又能提高酶在极端环境下的稳定性.     

纤维素酶固定化研究

利用固态发酵法从瑞氏木霉QM9414发酵液中提取纤维素粗酶液,然后将其固定在壳聚糖上,测定粗酶液的酶活力,固定化酶与粗酶的最适pH,最适温度和Km值.结果表明,粗酶液的蛋白质含量为33.33 ug/mL,酶活力为120 IU/mL.固定化酶的最适温度为60℃而粗酶液为50℃,粗酶液的最适pH=5,固定化酶的最适pH=4,固定化酶的Km值3.592 01×10-2,粗酶液的Km值为4.076 04×10-2,表明固定化酶的很多性质均优于游离酶液.     

基于整体柱的固定化胰蛋白酶反应器及其在水解β-乳球蛋白中的应用

采用胰蛋白酶水解β-乳球蛋白备受关注。然而,该酶成本高昂,无法在食品工业中得到广泛应用。固定化不仅可提高游离酶的稳定性还可通过重复使用降低其成本。本研究分别采用2.1与6 μm的大孔有机整体柱为载体,通过共价固定制备固定化胰蛋白酶反应器 (monolith based immobilized trypsin reactors, MITRs) ,并比较了不同还原剂对固定化得率及酶比活的影响。相较于氰基硼酸,以2-甲基吡啶硼烷为还原剂的固定化方案虽提高了酶的比活,但导致固载量减少了32—50%。此外,孔径大小对酶的比活无显著影响。MITRs可有效水解β-乳球蛋白,且水解效率随着循环流速的增加而提高。其中使用2.1 μm-MITR的水解产物主要为分子量小于3 KDa的小肽。在18次重复实用过程中,6 μm-MITRs表现出更高的稳定性。     

南美白对虾丝氨酸蛋白酶的分离纯化及性质研究

通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose、Phenyl-Sepharose、Hydroxyapatite、Superdex 75等方法,从南美白对虾消化腺中分离得到一种丝氨酸蛋白酶.SDS-PAGE结果显示,其分子质量约为28 ku,最适pH值与最适温度分别为9.0和40℃,且pH值在7.0~10.0之间以及温度在40℃以下有较高的稳定性.底物特异性实验与抑制剂实验结果表明,该酶属于类胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶.动力学实验显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,Km=0.69μmol/L,Kcat=0.33 S-1,Kcat/Km=4.78×105(mol/L)-1S-1.     

大分子拥挤体系下葡聚糖对SPI的共价修饰

为探讨糖链对蛋白质的共价修饰作用,在大分子拥挤体系中通过Maillard反应制备了大豆分离蛋白(SPI) -葡聚糖共价复合物(SDC),通过十二烷基磺酸钠二聚丙烯酰胺凝胶电泳、荧光光谱、凝胶渗透色谱、圆二色光谱等方法研究了葡聚糖共价键入后对SPI功能和构象的影响.结果表明,大豆分离蛋白和葡聚糖发生共价结合；Mailla...     

表面吸附固定化酶及其应用

研究用无机物载体(活性炭、分子筛、硅胶)表面吸附固定植物酶(菠萝酶,木瓜酶)技术,以及固定化酶的活性寿命及其催化效能。将实验制得的固定化酶多次反复应用于催化胶液水解反应中。反应结果证实表面吸附固定酶在技术上是可行的,经济上是合理的。另外还采用“补酶”的方法,使吸附酶趋向平衡,以减少该固定化酶中酶的脱落。初步探讨了用与水不溶支撑体的共价结合法固定酶技术。     

聚乙二醇衍生物修饰胰蛋白酶的研究

采用各种类型的聚乙二醇衍生物修饰胰蛋白酶,对所修饰酶的酶学性质进行了评价并与原酶比较.结果表明：修饰酶的残存活力受修饰剂的结构、分子量和修饰化度的影响较大,其中分子量为5000-6000的2种聚乙二醇衍生物所修饰的酶活力升高所有修饰酶的热稳定性显著改善,其最适pH值没有发生变化,修饰酶的Km值有所增加．实验表明采用合适的修饰剂对胰蛋白酶进行适度地修饰不会降低酶的活性和改变酶性能.     

固定化胰蛋白酶的制备及其性质研究

以EDTA-Sephadex G-50作载体,戊二醛为交联剂,对胰蛋白酶进行固定化.IR光谱结果显示:该项生化技术使胰蛋白酶得到了有效的固定,并且实现了较好的纯化,同时研究了固定化胰蛋白酶的一些性质,最适温度60℃,最适pH8.0,热稳定性,pH贮存稳定性以及对盐酸胍的稳定性均明显高于天然胰蛋白酶.     

固定化邻单胞杆菌降解高浓度直链烷基苯磺酸钠的研究

邻单胞杆菌(Plesiomonas sp.90-1)经海藻酸钠固定后,忍耐和降解100 ppm的高浓度LAS的能力较同样浓度的游离细胞分别提高4.875倍和0.77倍。我们研究了最佳固定条件和固定化细胞的最佳降解条件。该固定化细胞米氏常数Km和最大反应速度V_m分别为1061μmol和43.5μmol/h。此外,利用多因子正交法确定了降解酶活恢复的最佳培养条件,在此条件下培养的固定化细胞的降解酶活可提高116％。     

胰蛋白酶的固定化及其应用研究

通过γ-（2,3-环氧丙氧）丙基三甲氧基硅烷将胰蛋白酶固定在硅胶载体表面制备固定化胰蛋白酶. 实验测试了pH值,温度,时间等因素对固定胰蛋白酶的影响,利用红外光谱、热失重等方法对固定化胰蛋白酶进行了表征;通过高效液相色谱法考察了在弱碱性条件下固定化胰蛋白酶与16种天然小分子物质的结合情况. 结果表明在25 ℃,pH=8.0,反应18 h的条件下,对胰蛋白酶在硅胶载体上的固定量最大;且固定化胰蛋白酶与黄酮类成分、生物碱类成分、萜类成分有良好的结合,对酸类及嘌呤类小分子物质不结合.