大豆β—淀粉酶的纯化和性质研究

主要介绍大豆β－淀粉酶的分离纯化。首先通过酸抽得到粗提物，再经过乙醇沉淀，百里香草酚吸附和超滤技术进行纯化。纯化的酶用聚丙烯酰凝胶电泳检测为三条带。回收率为３５．８％；酶的比活为３４１ｕ／ｍｇ蛋白，分子量为５．３万，等电点为５．２；最适ｐＨ５－６，最适温度４０－５０℃。     

绿色木霉A10纤维素酶的分离纯化及理化性质研究

绿色木霉Ａ＿（１０）纤维素酶Ａ＿２的Ｃ＿１酶和Ｃｘ酶被分离纯化。Ｃ＿１酶的分子量为５４，４９，４４．５ｋｄ（三个亚基），最适温度为５０℃，最适ｐＨ为５．０；Ｃｘ酶的分子量为１７．５ｋｄ，最适温度为５５℃，最适ｐＨ为４．５。两者均为糖蛋白，富含极性氨基酸，水溶性好。     

绿色乳杆菌α－羟基戊二酸脱氢酶的纯化和特性研究

本文对绿色乳杆菌（Ｌ．Ｖｉｒｉｄｅｓｃｅｎｓ）Ｂ１７５产生的α－羟基戊二酸脱氢酶用硫酸铵盐析；ＤＥＡＥ—纤维素柱层折；超滤浓缩；苯基琼脂糖凝胶（ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ）疏水层析等方法纯化，使酶的纯度提高１１７倍。通过ＨＰＬＣ和等电聚焦测得该酶的分子量约为６６，０００，等电点为４．２。酶催化作用的最适ｐＨ５．５，最适温度为６０℃，对α—酮戊二酸和ＮＡＤＨ的Ｋｍ值分别为０．１４×１０（－３）Ｍ和０．０３×１０（－３）Ｍ。     

马铃薯酪氨酸酶的部分纯化及理化性质的研究

马铃薯酪氨酸经粗提、丙酮沉淀和酸铵分级后，得到了纯化１．８倍，活力回收４２．５％，比活力为４９．７Ｕ／ｍｇ蛋白的部分纯化酶，并对其理化性质进行了研究。结果表明，以多巴为底物，酶的Ｋｍ为５．７ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍ为１６．２μｍｏｌ／Ｌ?ｍｉｎ，最适ＰＨ为８．２，最适温度为４０℃，ＨＳＯ＾－３Ｆ＾－、苯甲酸、叠氮化钠、过氧化氢为其抑制剂，Ｖｃ、苯肼等对该酶的半抑制浓度为μｍｏｌ／Ｌ水平。Ｃｕ＾２＋在低浓     

大熊猫肌肉肌酸激酶的纯化与性质

用改进的Ｋｕｂｙ等人方法从大熊猫骨骼肌中纯化了肌酸激酶，并对此酶的某些性质进行了研究。纯化倍数为 ３５．７；收率１７．３％；比活力为 ５５．３Ｕ／ｍｇ；等电点为 ６．６０。聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为一条带。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为４２ ０００，总分子量为 ８４ ０００，该酶是由两个相同亚基组成的二聚体。酶对肌酸的Ｋｍ 为 ５．２６ｍｍｏｌ／Ｌ；对ＡＴＰ的 Ｋｍ为 ０．７４ｍｍｏｌ／Ｌ，酶的最适温度是 ３０～３６℃；酶的最适ｐＨ大于８．０。     

解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质

通过ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅＰｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析等提纯步骤，对解脂假丝酵母胞外脂肪酶进行了纯化，得到了层析纯样品，比活提高２７．４倍，得率１１％．该酶反应最适温度为４０℃；最适ＰＨ为７．５；等电点约在ＰＨ４．５～５．０之间；８℃以下存放，酶活力损失较少，３０℃以上存放，酶活力有明显损失．金属离子Ｓｒ２＋，Ｂａ２＋，Ｚｎ２＋和Ｍｇ２＋对该酶的激活作用为Ｓｒ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｇ２＋．Ｃｕ２＋和Ｎａ＋对酶活性有抑制作用．ＮａＮ３对保持酶活性有重要作用．     

地衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheni formis）AS10106α－乙酰乳酸脱酸酶经硫酸沉淀，聚乙二醇沉淀，DEAE－Sepharose Fast Flow离子交换，Gigapite K-100S柱层及SephadexG－100分子凝胶过滤柱等分离纯化步骤，得到SDS－PAGE电泳纯，α－乙酰乳酸脱羧酶的比活提高了53．5倍。对该酶性质的研究表明，酶单亚基分子量为32Kda，等电点为4．5；该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH为6．0，对热（40℃以上）敏感。在pH5．0－6．5之间稳定。酶活不需要金属阳离子，Cu^2 、Co^2 强烈抑制酶的活性。摇瓶实验表明，纯化的地衣芽孢杆菌α－乙酰乳酸脱羧酶能明显降低双乙酰的形成并缩短其还原时间。     

丝瓜果实发育过程中4—CL连接酶的特性研究

以丝瓜果实为材料，分析了４－香豆酸辅酶Ａ连接酶（４－ＣＬ）的理化性质及其在木质素合成和导管分子（ＴＥ）分化中作用。发现４－ＣＬ存在两种同工酶，经柱层析后，酶Ｉ纯化１５．６８倍，含量为２２．６３％；酶Ⅱ纯化４４．２３倍，含量为３．９１％。酶Ｉ对得豆酸和咖啡酸有较大亲和性，对阿魏酸较小；而酶Ⅱ对香豆酸和咖啡酸有一定亲和性，对阿魏酸亲和性极小。酶Ｉ有较好的热稳定性，最适温度为４０℃，最适ｐＨ８．０。发现     

牛奶黄嘌呤氧化酶的纯化性质研究

本文建立从牛奶中分离纯化黄嘌呤氧化的酶的工艺,该工艺采用正丁醇－硫酸铵分级提取、磷酸钙凝胶吸附、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０层析纯化获得纯品。从磷酸钙凝胶上解吸到的ＸＯＤ粗酶化活性达５．０９６Ｉ．Ｕ／ｍｇ－ｐｒ,提纯３４０倍,产率达７４．３％。每单位粗酶的吸附剂用量以６ｍｇ为最佳。纯酶的最大紫外吸收在２８５ｎｍ处,酶活性测定的最适ｐＨ在８．６０～１０．１５之间,最适温度在２５℃～３５℃间。１ｍｏｌ／     

甲基营养细菌No1甲胺脱氢酶的纯化和性质研究

甲基营养细菌Ｎｏｌ甲胺脱氢酶是以色所酸－色氨酰醌为辅基的一种特殊氧化还原酶，粗酶液经纯化后，其比活力和收得率分别为５．１ｎｍｏｌ．ｇ＾－１和２８％。该酶的分子量为６７０００，等电点为８．３和８．５，组成它的大，小两上亚基的分子量分别为３７０００和１５０００。甲胺脱氢酶有较好的耐热性，它能催化包括一级甲胺和二胺在内的底物反应，与甲胺反应的Ｋｍ值为２６．６μｍｏｌ．Ｌ＾－１，最适ｐＨ为８．０。其酶催化     

黑曲霉单宁酶的纯化及部分性质研究

黑曲霉在五倍子单宁的诱导下产生单宁酶。通过（ＮＨ４）２ＳＯ４分形沉淀,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０凝胶过滤,从黑曲霉的发酵液和菌丝中纯化得到凝胶电泳均一的单宁酶。酶作用的最适温度为３０℃,最适ｐＨ值为５．５,在温度１０－３０℃和ｐＨ４－６之间保持稳定,金属离子对单宁酶没有的激活作用,Ｆｅ＾２＋和Ｍｎ＾２＋则对酶有抑制作用。     

谷胱甘肽S—转移酶5—5和细菌二氯甲烷脱卤素酶的性质比较

通过简便的两步阴离子交换色谱，从遗传工程菌株大肠杆菌ＪＭ１０５中纯化出哺乳动物的谷胱甘肽Ｓ－转移酶５－５（ＧＳＴ５－５），ＧＳＴ５－５以二卤甲烷为底物时的动力学常数，热稳定性和最适ｐＨ被测定，并与细菌二氯甲烷脱卤素酶的上述性质进行了比较。     

内孢霉酵母糖化酶产酶条件及酶学特性的研究

本研究对Ｅｎｄｏｍｙｃｏｐｓｉｓｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ（内孢霉酵母）糖化酶发酵进行培养基的选择，并对产酶时间、接种量、装量和初始ｐＨ值诸因素进行探讨，获得最佳产酶条件．该糖化酶以可溶性淀粉为底物，最适ｐＨ为５．２，最适温度４０℃；在５０℃以下较稳定，有较宽的ｐＨ稳定范围（ｐＨ３．０－７．０）；米氏常数Ｋｍ＝１２．８４ｍｇ·ｍｌ－１．     

福寿螺β-葡萄糖苷酶的分离纯化及性质的初步研究

以福寿螺内脏为材料,经本实验室开发的工业生产法制备粗酶粉,进一步采用葡聚糖凝胶（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００）和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析纯化,获得经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一纯的β－葡萄糖苷酶制剂．测定该酶的最适反应温度为４３℃,最适反应ｐＨ为５．１;在ｐＨ５．１,４５℃下,该酶催化水杨素水解的Ｋｍ值为３．４０ｍｍｏｌ／Ｌ,活化能为５０．６３ｋＪ／ｍｏｌ．研究几种效应物对酶活力的影响,结果表明：Ｍｎ２＋、Ｃｏ２＋对酶有激活作用,而Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、ＳＤＳ及脲对酶有不同程度的抑制作用,其中Ｃｕ２＋和Ｈｇ２＋对该酶的抑制作用最强,其抑制机理均表现为非竞争性抑制     

地衣芽孢杆菌A.4041耐高温α-淀粉酶的纯化及性质

地衣芽孢杆菌A.4041（Bacillus，licheniformisA．4041）耐高温α-淀粉酶，经硫铁沉淀和垂直板制备凝胶电泳纯化，得到三种电泳均一的组分，α－Ⅰ，α－Ⅱ和α－Ⅲ．其相对质量分数分别为14.7％，32.2％和52.9％；等电点为5．2，5．4和5．5；相对分子质量为48000，55000和60000．酶作用于可溶性淀粉的米氏常数分别为4.5mg／mL，3．4mg／mL和2．6mg／mL．最适作用温度皆为90℃；最适pH为6.0～6.5；稳定pH范围皆为4～11．5在温度高于70℃，保温30min条件下，三组分的活力开始下降，但α－Ⅱ和α－Ⅲ在100℃，保温30min时仍分别保持15％和20％的残余活力，表明该酶的热稳定性良好．Ca2+，Mg2+，K+对酶明显激活；Cu2+，Fe3+，Zn2+，Al3+，EDTA、甲醛、戊二醛对酶强烈抑制．     

黑曲霉胞外葡萄糖淀粉酶的纯化及特性

黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ７２８）的粗酶液，经硫酸铵沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤脱盐，ＤＥＡＥ－Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ离子交换柱层析和ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－１００凝胶层析纯化，经ＰＡＧＥ鉴定为一条带ＳＤＳ凝胶电泳测定分子量为７００００．金属离子Ｆｅ３＋对该酶有一定的抑制作用，该酶的等电点为３．７，最适ｐＨ为４，最适温度为６０℃．Ｅ２８０１％为１５．７２，Ｋｍ值为０．１１２×１０－３ｍ．     

长毛对虾酸性磷酸酶的纯化与性质

分别从健康和患病长毛对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｐｅｎｉｃｉｌａｔｕｓ）肌肉提取一种酸性磷酸酶（ＡＣ－Ｐａｅ，ＥＣ．３．１．３．２．），进一步用硫酸铵分级分离，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱纯化，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，并于ＢｅｃｋｍａｎＤＵ－８Ｂ紫外分光光度计扫描为单一区带酶液。该酶紫外吸峰在２８０ｎｍ处，荧光激发峰在２８４ｎｍ处，发射峰在３４７ｎｍ处。酶的分子量为７３０００道尔顿，等电点为４．７酶水解对硝基苯磷酸二钠（ＰＵＰＰ）最适ｐＨ为４．５，最适温度４０℃。健康虾与病虾酶的活化能分别为４１．０３ｋＪ／ｍｏｌ·Ｌ和４５．７８ｋＪ／ｍｏｌ·Ｌ，米多常数ｋｍ值分别为０．８０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ和１．４３×１０－４ｍｏｌ／Ｌ。重金属离子Ｃｕ２＋，Ｈｇ２＋，有机溶剂甲醇，乙醇，乙二醇等对ＡＣＰａｓｅ有明显的抑制作用。     

聚苯乙烯载体亲和层析纯化尿激酶

聚苯乙烯经磺化后连接手臂６－氨基己酸，然后偶联配基对氨基苯甲脒，制成亲水性的亲和载体。载体的最适配基密度为每克湿载体３２μｍｏｌ，最适吸附条件为ｐＨ７．５、０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）。在ｐＨ４．０、０．１ｍｏｌ／Ｌ醋酸缓冲溶液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）中，采用０～１ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＳＣＮ梯度洗脱，可将比活８．３３μｍｏｌ·Ｓ－１·ｍｇ－１的粗酶纯化５０倍，收率大于５３％。     

木聚糖降解菌的筛选和木聚糖酶性质的研究

筛选两株生长快、产木聚糖酶活力高的菌种；黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ，ＡＮ０１）、链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ｓｔｒ７Ｂ），酶活力分别达１２８ｍｇ／Ｌ·ｍｉｎ和１７６ｍｇ／Ｌ·ｍｉｎ；酶反应最适温度分别为６０℃与５０℃；最适ｐＨ值为５．０和６．０，并分别在ｐＨ２．２～５．０，５．８～６．４酶活性稳定；在６０℃条件下保温１．５ｈ，酶活力分别剩余２０．５％，８８．５％，其中ＡＮ０１株原酶液在９０℃保温１０ｍｉｎ，活力仍剩余１４．５％．Ｃｕ２＋对酶活表现出极强抑制，Ｆｅ２＋，Ｍｇ２＋，Ｃａ２＋等离子则有促进作用；用纸层析法探讨了不同培养时间各种产物产生的情况．     

新鲜香菇子实体漆酶的纯化与性质

硫酸铵分级沉淀，离了交换纤维素柱层板分离技术，对香菇子实体漆酶进行了分离纯化，得到单一组分的漆酶，通过ＳＯＤ－ＰＡＧＥ凝胶电泳法，测得其摩尔式量为５５０００。研究表明该酶的最适ＰＨ为２．６，最适温度为７０℃，酶的动力学研究测出米氏常数Ｋｍ值为０．１４２ｍｍｏｌ