GMA-NVP-MBAA三元聚合物载体固定化青霉素酰化酶性能的研究

利用反相悬浮聚合技术合成了珠状甲基丙烯酸缩水甘油酯—N—乙烯砒咯烷酮—N，N’—亚甲基双丙烯酰(GMA—NVP—MBAA)三元GNM共聚物．研究表明，GMA与NVP质量比为1：10，MBAA为单体总量50％合成的GNM(50)固定青霉素酰化酶，固定化酶水解青霉素G钾盐活性达491U／g．固定化酶经4次使用后活性达到稳定值为444U／g，再经14次使用，活性几乎不变．同时，考察了水解反应温度、pH值对固定化酶活性的影响．     

用大孔吸附树脂固定化青霉素酰化酶的研究

用四种大孔吸附树脂制备固定化青霉素酰化酶。结果表明,AB—8型和0.01CC型树脂固定化酶活力回收较高,分别为14.2％和12.4％,其它两种型号的树脂固定化酶活力回收均小于10％。同时研究了温度、pH、戊二醛对AB—8型和0.01CC型树脂固定化酶活力的影响以及这两种固定化酶的操作稳定性。     

戊二醛交联壳聚糖固定化青霉素G酰化酶及其性质研究

以戊二醛为交联剂,壳聚糖为载体固定化粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶.通过单因素和正交试验优化确定固定化最佳条件:0.1 g载体,2.5%戊二醛,酶量160 U,0.6mol/L NaCl,0.2 mol/L磷酸缓冲液9.5 mL,37℃,pH 8.0,固定化38 h.固定化酶最高比活为48.7 U/g湿载体.固定化酶性...     

硅藻土强化吸附壳聚糖固定化青霉素酰化酶

文中针对壳聚糖颗粒机械强度不够和比表面积不大的缺点,用无机多孔材料硅藻土(celite)在低压下强化吸附壳聚糖,再用戊二醛使其活化,以此为载体通过共价结合固定化青霉素酰化酶。以酶活和回收率为指标,讨论了活化、固定化及酶反应的不同条件对固定化青霉素酰化酶的酶活和回收率的影响。当戊二醛溶液质量分数为5%、pH值为8.5;酶固定化温度为27℃,固定化pH值为7.6,固定化时间为12～18h时,为最佳固定化条件。固定化酶的酶活可达10000mol/s左右,回收率约为40%。固定化酶的储存稳定性和热稳定性好,载体有良好的强度。     

大孔GAM珠状聚合物固定化青霉素酰化酶催化性能的研究

应用反相悬浮技术合成了大孔甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)-丙烯酰胺(AM)-N,N′-亚甲基双丙烯酰胺(MBAA)珠状三元聚合物GAM,并用于制备固定化青霉素酰化酶.在37℃时,用固定化酶PA/GAM(粒径0.10~0.13 mm)水解青霉素G制备6-氨基青霉烷酸(6-APA),其表观活性为569 IU/g,表观米氏常数k′m为1.7×10-2mol/L,最大反应速度vmax为6.1×10-4mol/min,水解反应最适温度为50℃,最适pH值为8.0.固定化酶在pH值为4.0~9.0,且温度低于40℃时活性稳定,经20次间歇操作使用后,催化活性没有明显衰减,有良好的应用前景.     

青霉素酰化酶工程菌的褐藻胶固定化

本文报告以褐藻胶(海藻酸钠)固定化青霉素酰化酶工程菌的方法。本方法对大肠杆菌的包埋量可达30～40％(W/W),酶活回收率为88％。本文对6-APA测定的PDAB法进行了改进;对固定化细胞酶活的测定提出一种新方法。     

青霉素G酰化酶在磁性复合载体上的固定化及其酶学性质

利用凝胶-溶胶方法对磁性Fe3O4微粒表面进行功能化修饰,制备了表面含氨丙基的磁性复合载体,并通过戊二醛交联制备固定化青霉素G酰化酶(PGA).结果表明,在37℃时,固定化酶水解青霉素G钾盐,制备6-氨基青霉烷酸的表观活性为1 886 IU/g,表观米氏常数K'm＝140 mmol/L,最大反应速度Vmax＝0.45 ...     

固定化粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的制备

粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶通过共价结合在环氧型载体EupergitC上,通过对酶质量浓度、固定化反应时间、pH 值以及反应温度等条件的考察,确定了最优固定化条件：375mg比活力5000U/g的重组粪产碱杆菌青霉素G酰化酶蛋白对应1g载体,最适pH8.0,反应温度30 ℃.反应120h后制得固定化青霉素G酰化酶活力达到220U/g,固定化酶效率为10.7%.该固定化酶可在含饱和乙酸丁酯磷酸缓冲液中彻底水解青霉素G钾盐.经过15批连续水解反应,固定化酶仍保持95%的活力,展现出良好的稳定性.     

功能基化聚丙烯酸甲酯固定青霉素G酰化酶的性质

采用肽键法将青霉素G酰化酶固定在功能化的聚丙烯酸甲酯上得固定化酶 ,其最适pH为8.2,最适反应温度为70℃ ,该固定化酶在pH6～10和40℃以下非常稳定 ,表观米氏常数为1.48×10-2mol/L,最大反应速度为5.09mmol/s.33℃下水解质量分数为5 %的青霉素G,使用63次,酶活力保留79.4 %.在4℃的湿润状态下贮藏25d,酶活力保留97.6 %.     

固定化青霉素酰化酶在双水相体系中催化合成氨苄西林

通过研究氨苄西林、6-氨基青霉烷酸（6-APA）和D-苯甘氨酸甲酯（D-PGME）在聚乙二醇（PEG）和不同盐组成的双水相体系（ATPS）中的分配行为,建立了一个由PEG-4000（w=20％）和硫酸铵（w=15％）组成的双水相体系．在此体系中,氨苄西林的分配系数为5．0,6-APA和D—PGME的分配系数分别为1.7和1．4．以环氧基功能化介孔分子筛SBA-15为载体固定青霉素酰化酶（Penicillin G Acylase,PGA）,并在双水相体系中催化合成氨苄西林,产率为80％,经过4批次的连续合成,产率提高到98％,而在水相体系中酶促合成氨苄西林的产率仅为27％．     

固定化青霉素酰化酶在光敏感可再生两水相体系中催化青霉素G为6-APA

在一种光敏感可再生高聚物(PNBC 300000)与葡聚糖20000(Dextran 20000)形成的两水相体系中进行固定化青霉素酰化酶的相转移催化青霉素G产生6-APA的反应。在这个两水相体系中,当pH为7.8,底物浓度为62 mmol/L,反应温度为20℃,在50 mmol/L KCl存在下,6-APA的分配系数可达8.4。催化动力学显示,达到平衡的时间近6 h,PG(Na)转化率约82.6%。3批半连续反应转化率为60%~70%,较相近条件下的单水相反应得率提高近20%。在两水相中,底物及产物主要分配在上相,固定化酶分配在下相,底物青霉素G进入下相经酶催化产生的6-APA及苯乙酸又转入上相,从而解除了青霉素酰化酶催化反应的底物及产物抑制作用,达到提高产物得率的效果。形成两水相的高聚物通过488 nm的激光照射可实现循环利用,高聚物的光照回收率在95%~98%。     

甲基丙烯酸缩水甘油酯的正交设计合成

在季铵盐催化剂和对苯二酚阻聚剂存在下，由甲基丙烯酸甲酯和环氧氯丙烷合成了甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA），通过正交实验设计得到了最优反应条件：反应温度110℃，反应时间4h，催化剂四丁基溴化铵（TBAB）的用量为0.8g，产率为84.3%，纯度为98%。     

甲基丙烯酸缩水甘油酯制备工艺研究

探讨了反应温度、反应时间、催化剂及其用量和溶剂(环氧氯丙烷)用量等主要制备工艺条件对单体转化率的影响.以甲基丙烯酸和环氧氯丙烷为原料,十六烷基三甲基溴化铵为相转移催化剂,制备了无甲醛交联性单体甲基丙烯酸缩水甘油酯.研究结果表明,在最佳制备工艺条件下(催化剂对甲基丙烯酸钠质量百分数5.5%、反应温度95～100℃、反应时间150～160min、环氧氯丙烷与甲基丙烯酸钠的摩尔比为5.5:1.0),甲基丙烯酸钠盐的转化率接近95%,产物的纯度大于96%.     

丙烯腈—甲基丙烯酸多乙氧基甲酯共聚物的合成及性能研究

用溶液聚合方法合成了一系列单体配比不同的丙烯腈-甲基丙烯酸八乙氧基甲酯(简称MAMG)的共聚物。对共聚物进行了表征,并测定了吸湿率和上色率。实验结果表明,吸湿率和上色率随共聚物中第二单体MAMG含量的增加而升高,而共聚物的T_(?)随组成中MAMG含量的增加而降低。     

渗透休克法提取重组青霉素G酰化酶及酶学性质研究

为简化后期提取工艺,采用渗透休克法提取基因工程菌重组青霉素G酰化酶,回收率92.4%的酶蛋白释放到胞外,纯度达80%,比酶活26.4 U/m g.酶学性质研究表明,K cPGA的最适作用pH和温度分别为pH 7~9和50℃,在pH 5.0~8.0和低于40℃的范围较稳定.