紫杉醇对低分化鼻咽癌细胞株CNE-2生长凋亡的影响及Survivin mRNA的表达变化

目的:探讨紫杉醇对低分化的鼻咽癌细胞株CNE-2生长抑制率、凋亡的影响以及凋亡抑制基因Survivin的变化.方法:通过MTT法计算紫杉醇作用CNE-2细胞后的生长抑制率,通过流式细胞仪检测紫杉醇对CNE-2细胞凋亡及细胞周期的影响并应用One Step RT-PCR法检测Survivin mRNA表达的变化.结果:观察到CNE-2细胞对紫杉醇具有时间和剂量的依赖性.10-9～10-7 mol·L-1的紫杉醇作用后,随着时间的增加,细胞的凋亡率也明显增加.低浓度的紫杉醇(10-9～10-8 mol·L-1)作用细胞后,并没有出现G2/M期的累积.而当浓度达到10-7 mol·L-1作用24 h后便出现明显的G2/M期阻滞,但48 h后这种阻滞又出现下降.CNE-2细胞被高浓度的紫杉醇(10-7～10-6 mol·L-1)作用24 h后,Survivin mRNA的表达反而显著增加(P＜0.05),低浓度紫杉醇则对Survivin mRNA的表达无影响.10-7 mol·L-1紫杉醇作用CNE-2细胞后,Survivin mRNA表达明显增加并持续到48 h,72 h后则又降至对照组水平.结论:紫杉醇作用CNE-2细胞后可以出现早期明显的G2/M期累积,这种现象可能与Survivin基因表达上调有一定关系.     

眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人鼻咽癌CNE-2细胞株的影响

目的：了解眼镜蛇毒灌胃后的兔血清(serum of rabbit taking orally cobra venom,SRCV)对人鼻咽癌CNE-2细胞的影响。方法：采用体外细胞培养的方法,观察SRCV对人鼻咽癌CNE-2细胞及人胚肺成纤维细胞的细胞毒作用,及对细胞生长和分裂指数的影响。结果：发现SRCV能够明显抑制鼻咽癌CNE-2细胞的生长,且其抑制效应随剂量的增加而增加,但该血清对正常人胚肺成纤维细胞的生长却没有明显影响。结论：SRCV对鼻咽癌CNE-2细胞的生长有明显的抑制作用,并且有高度的选择性。     

雷公藤甲素促进人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及机制

目的探讨雷公藤甲素促进人类鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测雷公藤甲素对CNE-1的细胞毒作用;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变;Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白的变化。结果雷公藤甲素对CNE-1有强大的细胞毒作用,IC50为0.029±0.007μmoL/L;该化合物可浓度依赖性地诱导CNE-1细胞发生凋亡,出现典型的凋亡小体及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的裂解活化。结论雷公藤甲素可浓度依赖性地诱导人鼻咽癌CNE-1细胞发生凋亡,且与Caspase-3的裂解活化有关。     

阿霉素对人肝癌细胞株HepG2中Survivin表达的影响

目的探讨阿霉素(ADM)对人肝癌细胞株HepG2中Survivin表达的影响。方法用不同浓度的ADM对人肝癌细胞株HepG2作用不同时间，然后以免疫细胞化学和RT-PCR方法检测．HepG2细胞中Smvlvin蛋白和Survivin RNA表达的改变。结果未加药物干预之前，免疫化学中，HepG2细胞被Survivin抗体染成棕黄色，核内染色深于胞浆；琼脂糖凝胶电泳中，可见Smvivin mRNA明亮条带；各种浓度的ADM均可降低HepG2细胞Survivin免疫染色和Survivin mRNA在凝胶电泳中的灰度；并且随干预浓度的增加或作用时相的延长，降低更明显。结论人肝癌HepG2细胞表达Survivin，且核内Survivin蛋白表达比胞浆表达强；ADM可降低HepG2细胞中Survivin表达，并呈浓度和时间依赖性；ADM可能通过下调Survivin表达而参与诱导癌细胞凋亡而发挥其抗癌作用。     

在Hep G2细胞中利用siRNA沉默GFP基因的实验探讨

目的:通过探讨小分子双链RNA(siRNA)通过RNA干扰(RNAi)机制沉默肝癌细胞株Hep G2荧光素报告基因GFP的各项生物学指标,为进一步实验和临床研究提供依据.方法:通过体外实验,对siRNA和siRNA脂质体的稳定性和细胞毒性进行评估;通过荧光标记技术,研究不同时间siRNA脂质体的转染效率;通过荧光显微镜下观察转染细胞和RT-PCR检测靶基因mRNA表达,确定不同种类、形式、剂量的siRNA对靶基因的沉默效能.结果:在空白培养液中,siRNA和siRNA脂质体可稳定至4h,在5%血清中2～4h后明显降解;100nM的siRNA和siRNA脂质体无明显细胞毒性;siRNA脂质体转染细胞株的效率随时间不同而不同,4h可达90%;非特异性siRNA/脂质体无沉默靶基因表达作用,特异性siRNA/脂质体对靶基因的沉默作用在一定范围内随剂量升高(20nM、50nM、100nM)而升高.结论:siRNA的稳定性可满足实验需要,且无明显细胞毒性,特异性siRNA转染肝癌细胞株能有效抑制靶基因表达,用脂质体转染可提高转染效率.siRNA通过RNAi机制沉默靶基因表达,为肿瘤的治疗和基础研究提供了新的工具和思路.     

慢病毒介导MCF-7细胞中FOXP2基因沉默体系的建立

为了实现FOXP2基因在MCF-7细胞中稳定低表达,采用基因工程的方法构建pMAGic7.1-shFOXP2慢病毒干扰载体,并将其与辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装shFOXP2干扰慢病毒,收取病毒上清加入到MCF-7细胞中,培养48h,荧光定量PCR检测FOXP2的基因mRNA表达水平,Western Blotting检测FOXP2蛋白表达水平.获得了pMAGic7.1-shFOXP2干扰载体,从而成功建立FOXP2基因稳定干扰的MCF-7细胞株,为进一步研究FOXP2在乳腺癌发生发展中的功能提供了研究材料.     

姜黄素对鼻咽癌细胞株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤增殖的影响

目的研究姜黄素对人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤生长和增殖的影响。方法复制人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤模型,观察姜黄素对移植瘤生长的影响。结果裸鼠体内实验显示姜黄素可以抑制移植瘤的生长。不同浓度姜黄素组移植瘤瘤重与溶剂对照组比较有降低趋势,高剂量组降低更明显,差异有极显著性(P<0.001),抑瘤率达59.75%。结论姜黄素可以抑制CNE-2Z-H5细胞裸鼠移植瘤的生长,其可能在鼻咽癌的治疗中具有一定的价值,值得进一步深入研究。     

姜黄素对鼻咽癌细胞株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤增殖的影响

目的 研究姜黄素对人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤生长和增殖的影响.方法 复制人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5裸鼠移植瘤模型,观察姜黄素对移植瘤生长的影响.结果 裸鼠体内实验显示姜黄素可以抑制移植瘤的生长.不同浓度姜黄素组移植瘤瘤重与溶剂对照组比较有降低趋势,高剂量组降低更明显,差异有极显著性(P＜0.001),抑瘤率达59.75%.结论 姜黄素可以抑制CNE-2Z-H5细胞裸鼠移植瘤的生长,其可能在鼻咽癌的治疗中具有一定的价值,值得进一步深入研究.     

人工基膜对鼻咽癌细胞株体外诱导分化的影响

用全反维甲酸（ＲＡ）１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ对生长在玻璃皿（Ｇ）和人工基膜上的鼻咽癌细胞株细胞进行９ｄ的诱导分化。结果显示生长在Ｇ上的癌细胞增殖被抑制，软琼脂内集落形成和裸鼠体内生长等恶性的表型减弱，生长在ＡＢＭ的细胞则不受影响，但其表面微绒毛丰富，细胞的紧密连接、交指状连接、桥粒和腺腔样结构多见，高尔基器，粗面内浆网发育较好。表明不同的培养基质对ＲＡ的生物学作用有不同的影响，ＡＢＭ有拮抗ＲＡ抑制癌细     

水稻OsRhoGDI2基因RNA干扰载体的构建

水稻OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的小G蛋白Rho家族成员OsRacD互作蛋白的编码基因,为了研究OsRhoGDI2与OsRacD的相互作用及其在水稻发育中的功能联系,本研究基于序列比对的提示,选择了OsRhoGDI2基因长度为285 bp的特异区段,分别以正向和反向插入中间载体pKANNIBAL中,并亚克隆...     

RNA干扰沉默PID1基因在C2C12细胞中表达的研究

 构建和筛选对PID1（phosphotyrosine interaction domain containing 1, PID1）基因有RNA干扰作用的PID1-shRNA表达载体。据小鼠PID1 cDNA序列,优化设计了4条shRNA及1条阴性干扰序列,插入pGPU6/GFP/Neo载体中,得到pGPU6/GFP/Neo-PID1-1、pGPU6/GFP/Neo-PID1-2、pGPU6/GFP/Neo-PID1-3、pGPU6/GFP/Neo PID1 4和pGPU6/GFP/Neo-PID1-NC。干扰载体转染C2C12细胞,以RT-PCR和Western blot技术检测shRNA对C2C12细胞中PID1 mRNA和蛋白表达的下调作用。结果表明：靶向PID1基因的4个shRNA重组质粒载体经测序分析,其shRNA编码序列与预期设计的完全一致,经酶切鉴定和测序分析证实,靶向PID1基因的shRNA重组质粒载体构建成功。进一步将构建的4个表达载体分别转染C2C12细胞,24h后细胞中PID1基因mRNA表达水平依次下调 (23.58±1.87)%、(75.44±0.77)%、(70.52±0.41)% 和 (56.60±3.13)%。48 h后细胞中PID1蛋白表达水平依次降低 (30.15±5.05)%、(71.86±4.85)%、(67.93±2.28)% 和 (56.81±2.01)%。所筛选出的pGPU6/GFP/Neo-PID1-2、pGPU6/GFP/Neo-PID1-3和pGPU6/GFP/Neo-PID1-4三个表达载体均能高效地抑制转染细胞PID1 mRNA和蛋白的表达,为进一步研究PID1基因的功能奠定了基础。     

Paraneoplastic myasthenic syndrome IgG inhibits 45Ca2+ flux in a human small cell carcinoma line

Certain cancers exert unexplained remote effects on the nervous system. Small cell carcinoma (SCC) of the lung, a tumour capable of spike electrogenesis and which is of possible neural crest origin, is present in approximately 70% of patients with the Lambert-Eaton myasthenic syndrome (LEMS), a disorder characterized by fatigable muscle weakness. Patients with this syndrome have a defect in the (Ca2+-dependent) quantal release of acetylcholine from motor nerve terminals evoked by a nerve impulse or by high K+ (ref.5), and a decreased number of presynaptic active zone particles. The physiological and morphological features of the syndrome can be transferred to mice by the patients' IgG, consistent with an autoantibody interfering with the function of voltage-dependent Ca2+ channels. Here we demonstrate that K+-induced 45Ca2+ flux in a cultured human SCC line is significantly reduced by LEMS IgG, suggesting that in SCC-LEMS an autoantibody to tumour Ca2+-channel determinants is triggered; its cross-reaction with similar determinants at the motor nerve terminal could lead to the remote neurological syndrome.     

聚乙烯亚胺介导的生存素反义核酸提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性

目的:探讨聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)介导的生存素(survivin)反义核酸(antisense-oligonucleotides,ASODN)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、三氧化二砷(arsenic trioxide)或羟基喜树碱(hydroxycamptothecine,HCPT)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用.方法:单独应用不同浓度的5-FU,As2O3,HCPT,或这些药物分别与survivin ASODN或PEI-ASODN联合应用,作用于SMMC-7721细胞,采用WST-8法检测SMMC-7721细胞的增殖抑制率,并计算药物作用的IC50.以金正均的概率和法进行协同作用分析.结果:不同浓度的5-FU,As2O3或HCPT联合PEI-ASODN(ASODN终浓度为0.125μmol/L)均明显降低这些化疗药物的IC50,提高SMMC-7721细胞对5-FU,As2O3或HCPT的敏感性,增敏倍数分别为36.1、4.16、18.8.金正均Q值法分析表明,5-FU,As2O3或HCPT与PEI-ASODN联合使用,均表现出协同作用.结论:PEI介导的低浓度的生存素反义核酸可提高人肝癌细胞SMMC-7721对5-FU,As2O3和HCPT的敏感性,PEI介导的生存素反义核酸与5-FU联合的作用效果最佳.     

Structure of the Ki-ras gene of the human lung carcinoma cell line Calu-1

The homologue of the viral Kirsten ras (v-Ki-ras) gene found in the human lung carcinoma cell line, Calu-1, has an intron-exon structure similar to that of the human homologue of the viral Harvey ras (v-Ha-ras) gene. A second, potential fourth coding exon is present in the human Ki-ras gene and similar sequences are found in the Kirsten murine sarcoma virus. Cysteine is encoded at the twelfth amino acid position, suggesting that the Calu-1 Ki-ras gene has undergone a mutational activation at the same position as the human Ha-ras gene of the bladder carcinoma cell line, T24. A comparison of their predicted amino acid sequences suggests that ras proteins have a 'constant' region and a 'variable' region. Here we propose a common modular structure for ras gene products in which the variable region forms a physiologically important combining site.     

聚乙烯亚胺-整合素配体复合物介导bcl-2反义核酸对结肠癌细胞的作用

目的:观察聚乙烯亚胺(PEI) -整合素蛋白的配体(Arg -Gly -Asp ,RGD)介导的bcl - 2反义核酸(antisenseoligodeoxynucleotide ,ASODN)对结肠癌细胞caco - 2的作用效果。方法:将阳离子复合物jetPEI-RGD与bcl- 2反义核酸混合形成ASODN -PEI-RGD三聚体复合物,转染caco - 2细胞。用台盼蓝拒染法计数活细胞,观察ASODN -PEI-RGD对caco - 2细胞的生长抑制作用,用流式细胞仪检测细胞的亚二倍体百分率,Heochst332 5 8染色观察细胞凋亡。结果:与ASODN对照组和jetPEI-RGD对照组相比,ASODN -PEI -RGD能够明显抑制caco - 2细胞增殖和诱导细胞凋亡(P<0 0 5 ) ,呈剂量和时间-效应关系。ASODN -PEI-RGD作用4 8h ,荧光染色可见大量的caco - 2细胞核固缩、核碎裂。结论:jetPEI-RGD介导的bcl- 2反义核酸能抑制caco - 2细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

沉默SEMA3A基因对胶质瘤细胞U251增殖和转移的影响

探讨了SEMA3A基因在恶性胶质瘤细胞U251迁移和侵袭能力中的作用, 及其用于胶质瘤临床治疗的可行性. 用特异识别SEMA3A基因的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)片段与真核表达载体pFH-GFP-L连接, 再与辅助质粒联用来包装慢病毒. 通过荧光显微镜观察感染胶质瘤细胞U251的感染效率. 通过实时定量PCR技术和Western-blot技术验证了U251细胞中SEMA3A基因的沉默效果. 通过MTT法、PI染色法和Transwell小室分别检测了U251细胞增殖、细胞周期和运动能力的变化. 结果表明, SEMA3A-shRNA慢病毒感染U251能有效下调SEMA3A基因的表达水平(P <0.01), 使U251细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力明显降低(P <0.05), 细胞大量阻滞在G2/M期, 并促进了细胞凋亡(P <0.05).