用快速蛋白液相层析（FPLC）法纯化文昌鱼酸性鳞酸酶

从厦门文昌鱼体内提纯了一种酸性磷酸酶，用快速蛋白液相层析法（ＦＰＬＣ）的Ｓｕ－ｐｅｒｏｓｅ１２柱和ＭｏｎｏＳ柱对其进一步纯化，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＦＰＬＣ的Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２柱鉴定为单一纯的酶制剂，它的分子量为５２０００，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定该酶为二聚体。酶的提纯倍数为６１２．５２。     

文昌鱼酸性磷酸酶在变性剂变性时的构象及活力变…

十二烷基硫酸锂（ＬＤＳ），脲（Ｕｒｅａ）等变性剂作用于ＡＣＰａｓｅ，以荧光法跟踪该酶的构象变化，随着ＬＤＳ浓度提高荧光强度下降但发射峰没有位移，而在Ｕｒｅａ中，荧光强度随着变性剂浓度上升而下降，发射峰明显红移，由３３０－３５０ｎｍ。分别测定其变性及失活的动力学常数，比较酶构象及催化活力的关系，结果表明：变性与失活为快相和慢相的一级反应，在ＬＤＳ作用下，失活速度大于变性速度，属于快活力慢构象变化的…     

磷酸盐及其结构类似物对文昌鱼酸性磷酸酶的影响

研究了磷酸盐（ＨＰＯ￣（２－）＿４）及其结构类似物钼酸盐（ＭｏＯ￣（２－）＿４），钒酸盐（ＨｖＯ￣（２－）＿４），钨酸盐（ＷＯ￣（２－）＿４）对文昌鱼酸性磷酸酶活力的影响及其抑制机理。实验结果表明：磷酸盐对文昌鱼酸性磷酸酶的抑制作用表现为竞争性抑制类型，而其结构类似物则是通过非竞争性抑制的方式抑制酶活力．抑制常数Ｋｉ分别为：磷酸盐：３．０×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ，钼酸盐：５．５×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ，钒酸盐：７．０×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ，钨酸盐：３．８×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ，用酸盐对酶活力呈时间抑制过程，表明该类似物可能通过氧化—还原这种新的抑制机理来抑制酶的活力。     

文昌鱼酸性磷酸酶在甲醇溶液中的构象与活力变化

文昌鱼酸性磷酸酶（ＡＣＰａｓｅ，Ｅ．Ｃ３．１．３．２）是一种含有铁离子的金属酶，其可见光谱中５００ｎｍ的吸收峰以及荧光５１５ｎｍ的发射峰为该酶分子含铁的特征峰，与酶活力关系密切．通过荧光发射光谱和紫外可见光谱对该酶在不同浓度甲醇溶液中的构象与活力变化进行研究．不同浓度（Ｖ／Ｖ）的甲醇对酶活力有明显的抑制作用，动力学分析表明甲醇对酶的抑制为非竞争性抑制，其抑制常数为２０％．还研究了在甲醇存在下ＡＣＰａｓｅ活力中心的构象与活力变化，结果表明其构象变化快于活力变化．     

文昌鱼酸性磷酸酶在变性剂变性时的构象及活力变化的研究

十二烷基硫酸锂(LDS),脲(Urea)等变性剂作用于ACPase,以荧光法跟踪该酶的构象变化,随着LDS浓度提高荧光强度下降但发射峰没有位移,而在Urea中,荧光强度随着变性剂浓度上升而下降,发射峰明星红移,由330～350nm,分别测定其变性及失活的动力学常数,比较酶构象及催化活力的关系,结果表明:变性与失活为快相和慢相的一级反应,在LDS作用下,失活速度大于变性速度,属于快活力慢构象变化的模式,Urea的作用为变性速度大于失活速度,属于快构象慢活力变化的另一种模式,Urea作用后的变性酶,在测定其活力的10min内,没有观察到底物对变性酶的修复作用,以及稀释对变性酶的复活效应。     

长毛对虾酸性磷酸酶的纯化与性质

分别从健康和患病长毛对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｐｅｎｉｃｉｌａｔｕｓ）肌肉提取一种酸性磷酸酶（ＡＣ－Ｐａｅ，ＥＣ．３．１．３．２．），进一步用硫酸铵分级分离，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱纯化，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，并于ＢｅｃｋｍａｎＤＵ－８Ｂ紫外分光光度计扫描为单一区带酶液。该酶紫外吸峰在２８０ｎｍ处，荧光激发峰在２８４ｎｍ处，发射峰在３４７ｎｍ处。酶的分子量为７３０００道尔顿，等电点为４．７酶水解对硝基苯磷酸二钠（ＰＵＰＰ）最适ｐＨ为４．５，最适温度４０℃。健康虾与病虾酶的活化能分别为４１．０３ｋＪ／ｍｏｌ·Ｌ和４５．７８ｋＪ／ｍｏｌ·Ｌ，米多常数ｋｍ值分别为０．８０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ和１．４３×１０－４ｍｏｌ／Ｌ。重金属离子Ｃｕ２＋，Ｈｇ２＋，有机溶剂甲醇，乙醇，乙二醇等对ＡＣＰａｓｅ有明显的抑制作用。     

一种麦芽酸性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

经硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose CL 4B和DEAE-Sepharose CL 4B离子交换柱层析等步骤,从麦芽中分离提纯到一种酸性磷酸酶(ACPase,E．C．3．1．3．2),纯化倍数为33．06,酶液比活为88．27 U/mg．通过动力学方法测得其最适pH为5．4,酸碱稳定性较差,仅在pH 6．0左右的缓冲液中较稳定;最适温度为50 ℃,40 ℃以下有较好的稳定性;在最适条件下,该酶催化pNPP的米氏常数(Km)为4．696×10-4 mol/L．同时研究了一些金属离子和有机化合物对该酶     

蛋白磷酸酶2C（PP2C）的表达、 纯化与催化活性

从小鼠肌肉组织中提取了总RNA, 经RT PCR, 扩增出蛋白磷酸酶2C（PP2C）基因, 并构建了pUCm T载体. 经核酸序列分析证明PP2C基因序列正确后, 将pUCm T中的PP2C基因插入pET28a载体中, 构建了表达载体pET28a PP2C, 并转化到E.coli BL21(DE3)进行表达. 经测定, 该菌株表达目的蛋白PP2C的最适条件为： 诱导物IPTG的终浓度为0.8 mmol/L, 37 ℃, 诱导时间为20 h. 在此条件下, PP2C实现了高 效表达, 表达的PP2C蛋白约占菌体总蛋白的18.2%, 其中在裂解上清液、 沉淀中分别占总蛋白的7.1%和11.1%. 经SDS PAGE分析, 表达产物分子量约为42 000. 应用Ni NTA柱实现了可溶性PP2C的纯化, 收率达805%, 纯化的PP2C比活力达34.5 U/mg.     

肝大部切除前后热休克处理对热休克蛋白、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性影响的分析

综合了磷酸酶的原位复性电泳、体视学分析、比色分析等方法分析①切除大白鼠大部分肝后的肝再生期间,②热休克处理大白鼠（４６℃、３０ｍｉｎ）恢复８ｈ,再切除大部分肝后的肝再生期间,③切除大部分肝恢复４ｈ,再热休克处理（４６℃、３０ｍｉｎ）后的肝再生期间热休克蛋白（ＨＳＣ７０／ＨＳＰ６８）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）和碱性磷酸酶（ＡＫＰ）动态变化的资料,从６个方面比较分析了ＨＳＣ７０／ＨＳＰ６８,ＡＣＰ和ＡＫＰ在肝再生中的相互关系及对肝再生的可能作用     

蛋白磷酸酶2C(PP2C)的表达、纯化与催化活性

从小鼠肌肉组织中提取了总RNA,经RT-PCR,扩增出蛋白磷酸酶2C(PP2C)基因,并构建了pUCm-T载体.经核酸序列分析证明PP2C基因序列正确后,将pUCm-T中的PP2C基因插入pET28a载体中,构建了表达载体pET28a-PP2C,并转化到E.coli BL21(DE3)进行表达.经测定,该菌株表达目的蛋白PP2C的最适条件为:诱导物IPTG的终浓度为0.8 mmol/L,37 ℃,诱导时间为20 h.在此条件下,PP2C实现了高效表达,表达的PP2C蛋白约占菌体总蛋白的18.2%,其中在裂解上清液、沉淀中分别占总蛋白的7.1%和11.1%.经SDS-PAGE分析,表达产物分子量约为42 000.应用Ni-NTA柱实现了可溶性PP2C的纯化,收率达80.5%,纯化的PP2C比活力达34.5 U/mg.     

文昌鱼酸性磷酸酯酶色氨酸残基的修饰

从厦门文昌鱼(Branchiostonia belcheri Gary)分离纯化获得聚丙烯酰胺胶电泳单一蛋白区带的酸性磷酸酯酶(EC3.1,3.2)应用化学修饰方法,荧光以及紫外-可见光谱的变化,探讨Trp残基与酶活力的关系,被NBS修饰的Trp基团仅有一个Trp残基被氧化时,酶活力丧失90％,该Trp残基为ACPase表现活力所必需,而且优先被氧化、从光谱扫描(230～600nm)结果表明,经NBS修饰以后的酶构象发生变化,文昌鱼ACPase的Trp残基和酶分子上的铁离子等基团均为酶活力的必需基团,推测两者可能以配位结合,共同维持酶活力中心的构象。     

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活力变化的关系

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位构象变化与活力变化的关系，酶于０．６ｍｏｌ／ＬＧｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２～２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数，也研究了酶的重折叠与复性的关系     

高效液相色谱—电喷雾—质谱法测定蛋白质混合物

介绍高效液相谱－电喷雾－质谱（HPLC－ESI－MS）联用技术在生物大分子（蛋白）的分离和检测上所表现出来的优越性能,并利用LC－ESI－MS技术成功地分离、检测溶菌酶和牛血清蛋白混合物。     

高效液相色谱分离和检测蛋白质

对近年来高效液相色谱(HPLC)用于蛋白质的分离检测、蛋白质的研究进展作了综述。比较详细地介绍了各种HPLC模式、检测器、以及联用技术的应用情况,肯定了其在蛋白质分离检测中的重要作用。     

高效液相色谱法分析食品中的Vc含量

用高效液相色谱分析食品中的Ｖｃ要比化学法准确、快速。准确度和精密度都很高。其最低检测限在０．１ｍｇ／１００ｍｌ的水平。     

珍珠角壳蛋白中氨基酸的高效液相色谱分析

采用国产C18反相柱,对以异硫氰酸苯酯（PITC）为柱前衍生化试剂的高效液相色谱测定氨基酸的方法进行了研究,在室温下,以pH=6.3的HAc-NaAc缓冲溶液及乙腈水溶液为流动相进行梯度洗脱,18种常见氨基酸在30min内获得了较好的分离,并且测定了珍珠角壳蛋白的氨基酸组成,结果表明：珍珠角壳蛋白主要由天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸、亮氨酸等10种氨基酸组成,这些氨基酸约占蛋白总量的85％。     

比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG

优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件,并与A蛋白亲和层析法比较纯化效果,以求得到一种简便、快速、高效的纯化IgG方法.结果表明:从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价高达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗血清,磁珠与IgG结合10 min达到平衡,其最大结合量为0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法...     

联苯胺亲和层析纯化尿激酶

利用甲基丙烯酸缩水甘油酯与乙二醇甲基丙烯酸酯经悬浮聚合反应合成亲水性亲和载体骨架,骨架上的不环氧基与氨水反应,继之与丁二酸酐反应,最后与配基联苯胺偶联制备亲和载体,配基密度为５４μｍｏｌ／ｇ湿胶。亲和载体吸附激酶的最佳条件为ＰＨ４．６和２．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ;测定了吸附等温线,算得离常数Ｋｄ为３１６ＩＵ／ｍｌ,了大吸附量ｑｍ为２．３８３×１０＾４Ｕ／ｍＬ湿胶,洗脱条件为含０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ     

高效液相色谱法分析黑色喷墨打印墨水（盒）的种类

由打印机打印形成文件的检验是目前司法鉴定中经常遇到的问题，因此建立一种简便、灵敏、准确的鉴定打印机字迹色痕的异同及形成时间的方法是十分必要的。以乙腈：水：冰乙酸（40：60：0．05）为提取剂，在乙腈-水（45：55）含IPR—A及冰醋酸、检测波长为580nm的色谱条件下，对80种不同产地、不同牌号的黑色喷墨打印墨水（盒）字迹色痕进行HPLC分析，依据黑色喷墨打印墨水（盒）油墨中所含染料种类的不同，可将其分为6大类，每类中的各个样品又可根据其各色谱峰峰面积比的不同进一步进行种类的鉴别。实验结果表明，用该法鉴别黑色喷墨打印墨水（盒）字迹是一种简便、快速、准确的方法。