离子束介导外源基因群转移小麦的研究

通过能量为30KV,剂量2×1017N+/cm2的离子注入,将大豆全NDA导入新麦9号籽粒种胚,结果表明,处理后当代后熟植株籽粒蛋白质含量有明显变化,得到了一批高蛋白的极端变异材料,收获的植株中蛋白含量高于对照20%的植株占6.1%.说明通过离子束介导外源DNA转化技术可对种子直接转化,并获得高蛋白材料,它有可能成为一种无性的边缘育种手段.     

离子束介导的小麦变异株系染色体行为分析

经低能离子束将大豆DNA导入新麦九号后获得了4个性状和蛋白质含量基本稳定遗传的第六代变异株系05-5-1,05-49-1,05-61,05-8-1,对其染色体畸变及有丝分裂指数进行了分析和研究.结果表明:1.低能离子束介导的4个变异株系小麦的有丝分裂指数均明显高于对照组.2.离子束介导的变异株系小麦染色体畸变率与对照组...     

农杆菌介导法的植物遗传转化

农杆菌介导的基因转化是一种使外源DNA转移到目的植株的天然系统,通过植物表达载体上DNA的加工与转移将外源DNA转运到植物细胞中。因其具有易操作、低费用、高效率、插入片段确定性好和转基因拷贝数低等独特优点,已经成为转基因策略中的首选方法,在植物的遗传转化中得到广泛应用。     

花粉管通道法转基因技术在甜瓜品种河套蜜瓜上的应用

为建立甜瓜(Cucumis melo L.)简便易行转化频率高的转基因技术,以甜瓜品种河套蜜瓜为受体材料,以含gus基因的植物双元表达载体pPZP221为外源基因供体,进行了花粉管通道法转基因研究.自交授粉后分别于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h,切去柱头上端1/3部分,立即滴加质粒DNA溶液,果实成熟后收获转化种子.对T0代植株进行PCR检测,结果表明不同时间处理所得到的T0代植株均具有较高的转化频率,其中授粉后7 h滴加DNA溶液所获得的转化率为28.3%.对一部分PCR阳性的T0代植株基因组DNA进行Southern杂交分析,结果表明所有样品均出现特异性杂交条带,证明外源基因已整合到受体植物基因组中.     

植物转基因技术（二）

三、物理方法 物理转化方法是基于许多物理因素对细胞膜的影响,或通过机械损伤直接将外源DNA导入细胞。它不仅能够以原生质体为受体,还可以直接以植物细胞乃至组织、器官作为靶受体,因此比化学法更具有广泛性和实用性。常用的物理方法有电激法、超声波法、激光微束导入法、显微注射法、基因枪轰击法以及正在发展中的低能离子束介导法等。     

基因枪法在植物转基因中的应用

基因枪法是是指用鸽粉或金粉包裹外源DNA,而后依靠基因枪装置,利用高压氦气冲击波加速微弹去穿透植物细胞壁和细胞膜,使外源DNA进入植物细胞并整合到植物细胞染色体组中,从而达到稳定遗传和表达的目的。它多用于对农杆菌不敏感的物种和基因型,用外源DNA包被的钨粒对大豆茎尖分生组织进行轰击,获得大豆转基因植株,此后,这一技术便很快在大豆中得到了应用。虽然它有缺点,但可与其他转基因技术结合使用。农杆菌介导法和基因枪轰击法各有自己的优缺点,它们之间并不是相斥的M相反,通过结合两种方法的特性,互相取长补短,就有可能提高转化效率。     

授粉方式对小麦花粉管通道转化效果的研究

研究了花粉管通道转化技术中,自花授粉后滴注外源DNA和去雄后再实施人工授粉并滴注外源DNA两种操作方法对转化效果的影响,对小麦花粉管通道转化的有效实施提供依据.结果表明,从结实率和转化率两方面分析,去雄后再实施人工授粉并滴注外源DNA比自花授粉后滴注外源DNA有明显优势.     

家蚕精子介导报告基因gfp和egfp转移技术的研究

探讨家蚕精子介导基因转移技术能否有效地将外源基因导入并整合到家蚕基因组中，使之稳定遗传．分别进行了含gfp报告基因的pG350载体和含egfp报告基因的pMD-Fib-IE-EGFP与pEGFP-N3载体的精子介导基因转移实验．结果表明，导入线性pG350载体，在14个G0代实验蛾区的DNA样品中，有5个PCR检测为阳性，阳性率为35．7％；对G1代的PCR与Southern blot检测的结果证明，导入的gfp基因存在于G1代的家蚕基因组中．导入不同浓度或构型的pMD-Fib-IE-EGFP与pEGFP-N3载体时，对G0代的PCR检测结果表明，导入线性pMD-Fib-IE-EGFP组的PCR阳性率为61.2％，而导入环状质粒组的PCR阳性率为57．1％；导入环状pEGFP-N3组的PCR阳性率为46．2％；对部分PCR阳性蛾区进行Southern blot检测结果表明，导入的egfp基因整合在G0代家蚕基因组中．本研究的结果表明，家蚕精子介导基因转移能够将外源基因有效地导入、整合于家蚕基因组，并可遗传至G1代．     

离子束介导大豆DNA小麦低蛋白变异株系幼苗生长动态分析

经离子束介导大豆DNA后,获得了稳定遗传的第6代转基因小麦3个低蛋白变异株系,对3个低蛋白变异株系进行培养,分别在24 h,48 h,72 h和96 h观察和记录种子萌发和幼苗生长的情况,以未经离子束处理的相同小麦种子作为对照,研究发现:经离子束处理获得的3个低蛋白株系的种子萌发率与幼苗生长速度均明显高于对照,变异株系幼苗芽长、根长及侧根长与对照相比差异显著,t检验结果显示变异株系和对照相比芽长和跟长的差异程度均达到显著水平.     

离子束介导大豆DNA小麦低蛋白变异株系幼苗生长动态分析

经离子束介导大豆DNA后,获得了稳定遗传的第6代转基因小麦3个低蛋白变异株系,对3个低蛋白变异株系进行培养,分别在24 h,48 h,72 h和96 h观察和记录种子萌发和幼苗生长的情况,以未经离子束处理的相同小麦种子作为对照 ,研究发现:经离子束处理获得的3个低蛋白株系的种子萌发率与幼苗生长速度均明显高于对照,变异株系幼苗芽长、根长及侧根长与对照相比差异显著,t检验结果显示变异株系和对照相比芽长和跟长的差异程度均达到显著水平.