烟草赤星病菌拮抗菌的筛选鉴定及发酵液稳定性分析

为了探寻烟草赤星病的生防药剂,减少该病害对烟草生产的影响,利用琼脂块法和管碟法从土壤中筛选烟草赤星病拮抗菌,并进行鉴定,考察其抗菌谱和发酵稳定性.结果表明:成功筛选得到一株拮抗菌株ZJNU968,其对烟草赤星病菌的抑菌圈直径达到了3.60 cm;根据菌株形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析结果,鉴定该菌株为Streptomyces lunalinharesii;ZJNU968菌株对杨树溃疡病菌、水稻白叶枯病菌、番茄早疫病菌、小麦赤霉病菌和黄瓜枯萎病菌等均有较强的拮抗作用,同时,发酵液中抗菌活性物质具有较强的热稳定性、酸碱稳定性和光照稳定性.因此,ZJNU968菌株产生的代谢产物有望开发成为一种新型防治烟草赤星病菌的生物农药.     

孝顺竹内生菌BME17对水稻白叶枯和条斑病生防效果的初步研究

2017年5月从校园内健康孝顺竹叶分离纯化得到1株具有生防潜力的细菌BME17菌株.为研究BME17菌株的生防潜力,对水稻白叶枯病菌PXO99和细菌性条斑病菌RS105的平板抑菌活性以及水稻盆栽的防治效果,以期为水稻白叶枯病和细菌性条斑病的生物防治提供材料.通过形态观察、理化特性和16S rDNA基因测序对其进行鉴定.平板对峙法检测其对PXO99和RS105的拮抗作用,并对该菌的生防效果进行盆栽试验.结果表明,菌株BME17为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis;平板上,内生菌BME17对PXO99的抑菌圈直径(D)/菌落直径(d)为2.18;而对RS105的抑菌效力比值为1.87.盆栽防治试验,内生菌BME17对PXO99引起的水稻白叶枯防治效果为43.06%;而对RS105引起的水稻细菌性条斑病的防治效果为24.32%.内生细菌BME17对水稻细菌病害表现出一定的生防潜力.     

白蚁链霉菌ACT-2菌株抗菌谱及其发酵液抑菌稳定性分析

测定了白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株的抗菌谱．结果表明：ACT-2菌株对细菌类病原体有较强的拮抗能力,对真菌类病原菌抑菌效果不显著．以水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv．oryzae）P6生理小种为指示菌,分析了ACT-2菌株发酵液的抑菌稳定性．ACT-2菌株发酵液抑菌稳定性实验显示：在温度低于80℃,4000lx光照强度下,ACT-2菌株发酵液能保持稳定的抑菌能力;温度高于90℃时,其发酵液的抑菌能力开始降低;经酸碱处理后,其发酵液的抑菌能力出现了明显的降低．     

拮抗水稻白叶枯病菌菌核曲霉As-68菌株培养基配方和发酵条件的响应面优化

为提高菌核曲霉(Aspergillus sclerotiorum)As-68菌株发酵液对水稻白叶枯病菌的抑菌活性,用响应面法优化培养基配方和发酵条件.通过单因素实验,筛选出适宜的碳源、氮源及其浓度和适宜发酵条件,利用Plackett-Burman设计,探究碳源浓度、氮源浓度、菌龄和转速对抑制水稻白叶枯病菌影响效果,采用...     

一株抗烟草赤星病解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定

从土壤中分离出82株细菌,通过平板对峙法初筛和双层平板法复筛,筛选出对烟草赤星病菌有较强拮抗作用的细菌B11菌株,其无菌发酵液对烟草赤星病菌(Alternaria alternata)的抑菌带达到26.55mm.对B11菌株进行生理生化和分子鉴定,结果表明B11菌株生理生化特征与Bacillus amyloliquefaciens最为接近;16SrRNA基因序列分析结果表明该菌株与B.amyloliquefaciens(NR-116022)聚类呈一支,同源性为99%,因此把该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens).进一步研究表明B11菌株对几种植物病原真菌的生长均有抑制作用.     

苏都黄连内生放线菌的分离、鉴定及抗菌活性研究

对分离自内蒙古呼伦贝尔的苏都黄连根部的内生放线菌进行抗真菌活性测试,并对农作物致病真菌具有拮抗作用的内生放线菌进行分类学鉴定.研究结果表明,苏都黄连根部分离得到的10株内生放线菌中,菌株LJ-1发酵液对9种农作物病原菌具有较好的拮抗作用,抗真菌谱较广,其中对大豆菌核病菌和辣椒疫病菌具有显著的拮抗作用,抑菌圈直径分别为22.10mm和30.90mm,具有开发为新型生物农药的潜力.经形态特征、培养特征、生理生化特征和分子分类学分析鉴定,菌株LJ-1与Streptomyces tauricus JCM 4837T在同一分支上,相似性为99.73%,最终鉴定为Streptomyces tauricus.     

一株拮抗纹枯病菌放线菌的筛选及鉴定

从采自金华市各地的68份土样中分离得到了放线菌406株,以水稻纹枯病菌为指示菌,利用平皿对峙法筛选到42株具有较好拮抗作用的放线菌菌株．其中,Sh-43菌株的拮抗作用最强,抑菌带宽度为28．3mm．根据培养特征、形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列比对分析,鉴定Sh-43菌株为吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）．     

基因聚合品种对云南水稻白叶枯病的抗性分析

研究含多个抗性基因的聚合品种和单个抗性基因的近等基因系对云南省水稻白叶枯病菌的抗性差异.基因聚合品种对水稻白叶枯病菌的抗性达到高抗至免疫水平,病斑长度比单基因品系明显缩短,表明聚合抗病基因提高了水稻品种的抗性.单个抗性基因的近等基因系对这些菌株的抗性均不高,对我省生产中的主要白叶枯病菌株多表现为中感;这一研究结果为培育具有持久抗性的品种提供了新思路,它在实践应用方面将具有重要的意义.     

拮抗梨黑斑病菌的链霉菌的筛选及鉴定

从河北梨树果园土壤中分离到一株对梨黑斑病菌(Alternaria alternard)有强拮抗作用的链霉菌菌株B-105,该菌对多种植物病原真菌有很好的抑制作用.离体叶片和鸭梨果实试验表明,B-105菌株对梨黑斑病防治效果显著.通过对拮抗菌的形态特征、培养性状、生理生化特征及16S rDNA序列进行综合试验分析.鉴定该菌株为灰色链霉菌(sfreptomyces griseus).     

黄瓜枯萎病菌内生拮抗细菌的筛选与鉴定

采用平板对峙法从黄瓜体内筛选对黄瓜枯萎病菌具有拮抗作用的细菌.结果表明,黄瓜体内的细菌数量为2.9-25.6×103cfu· (g·FW)-1,其中,植株不同器官的内生细菌数量不同,以叶中的细菌数量最多,其次为花,最少的为果实;从所分离的细菌菌株中筛选到20株对黄瓜枯萎病菌具有不同程度拮抗作用的菌株;选择拮抗效果较好的10株菌株,用革兰氏染色、鞭毛染色、芽孢染色和生理生化测定等进行鉴定,发现其均为芽孢杆菌属(Bacillus spp.).     

土壤放线菌分离及无抗菌活性株的激活

从广州的稻田土里分离出三支菌，其中一株（２０号）产生的抗生物质不仅可抑制多种细菌，而且也可抑制白色念珠菌，经初步鉴定为诺卡氏菌属放线菌；另外两支为天然无抗生活性的放线菌，属拟诺卡氏菌。对两株无活性的菌进行紫外照射，然后用四环素和盐酸羟胺复合诱变，经初筛后发现三支激活株，其中一支产生了较明显的抗真菌活力。最后对激活株和２０号菌所产生的抗生物质进行初步研究，证明可能是一种非多烯大环内酯类抗真菌抗生素。实验结果表明这几支天然无活性的供试菌中均含有可被激活的沉默基因，这些基因和抗生素合成有关。     

分子标记辅助选育红米巨胚水稻

以正常胚红米水稻"上师大6号"和白米巨胚水稻"上师大5号"作为亲本进行杂交和回交,结合分子标记辅助育种,成功选育出红米巨胚水稻新品系"上师大10号"."上师大10号"的单株重与"上师大5号"差异不显著,但不同地区试种比较结果显示,"上师大10号"产量高于"上师大5号",且生育期较"上师大5号"短4~5 d."上师大10号"的胚重与糙米重比值显著小于"上师大5号",但其胚体积与糙米体积比和"上师大5号"间没有显著差异."上师大10号"的成功培育为市场进一步开发应用红米巨胚水稻提供了物质基础.     

具有ACC脱氨酶活性的绞股蓝根际细菌的分离鉴定及其促生作用

为了筛选含ACC脱氨酶的根际促生细菌,以1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)为唯一氮源,从绞股蓝根际土壤中富集和分离ACC脱氨酶阳性细菌,利用α-丁酮酸测定法和CAS平板法分别检测其ACC脱氨酶活性和产嗜铁素能力,利用菌液培养接种法检测细菌的促生作用,最后通过生理生化试验和16SrRNA基因序列分析对所筛选的菌株进行鉴定.经富集筛选法从绞股蓝根际土壤中分离出9株ACC脱氨酶阳性细菌,它们均具有不同程度的ACC脱氨酶活性,其中3株细菌能产生嗜铁素.促生试验结果表明,7株ACC脱氨酶活性细菌对水稻幼苗根系的生长发育表现出不同程度的促生作用,其中菌株JDG127的促生作用最明显,与对照组相比,水稻幼苗的根长和根鲜重增长了约1.6倍.鉴定结果表明,9株细菌中1株属于单胞菌属(Stenotrophomonas),1株属于类芽胞杆菌属(Paenibacillus),1株属于芽孢杆菌属(Bacillus),2株属于肠杆菌属(Enterobacter),4株属于不动杆菌属(Acinetobacter),与ACC脱氨酶相比,铁载体对根际细菌的促生作用更明显.     

机油降解菌的筛选及其降解能力的研究

从环境微生物工程角度出发,以20^#机油为唯一碳源,从含油污泥中筛选出3株降解机油能力较强的菌株,借助形态学观察和生理生化试验,鉴定为：动胶菌属(Zoogloea so.)、氮单胞菌属（Azomonas sp.)和假单胞菌属（Pseudomonas sp.)。对上述3菌株分别进行摇瓶试验,在此基础上,选择除油能力最强的动胶菌属LD2菌株,进行生物接触氧化法处理含20^＃机油废水的室内动态模拟试验。结果表明,动胶菌属LD2菌株降解机油能力比较显著：当入流质量浓度为424－1432mg/L时,出流水中20^#机油含量降为0－20mg/L,除油率达到97%-100%。用18^#机油代替20^#机油,出流质量浓度降到4-10mg/L,除油率达到98%以上。以上经过处理的出流水质均达到国家污水排放标准。     

水稻黑条矮缩病毒基因组组分10编码的外壳蛋白基因的克隆及表达

从我国山东发病的玉米材料中提取水稻黑条矮缩病毒 ,抽提病毒RNA ,经RT PCR ,克隆了编码外层外壳蛋白的基因组组分 10 (S10 )的cDNA ,并进行了序列测定 .与已报道的日本株和湖北等地的S10进行了序列同源性比较 .结果表明 ,与日本株的同源性为 92 % ,与湖北等地的同源性在 97%～ 98%之间 .将该序列构建到pGEX 3X表达载体中 ,经IPTG诱导 ,表达了分子质量约为 76ku的GST融合蛋白 .经亲和层析纯化和Western印迹分析 ,证实了该基因以可溶性的GST融合蛋白形式在原核中表达 .     

一株茶树内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性测定

从茶树内生真菌芒果球座菌(Guignardia mangiferae)的菌落表面分离获得1株放线菌菌株BF-01,通过形态学观察和16S rDNA序列分析及抗菌活性测定,初步鉴定该菌株为卡伍尔链霉菌(Streptomycescavourensis).对其代谢产物进行了抑菌活性的初步研究,发现该菌发酵产物对除1株木霉外的7株茶树内生真菌及6株植物病原真菌均表现出不同程度的抑制作用.其发酵液氯仿萃取物对供试的5种病原细菌、1种白假丝酵母菌有较明显的抑制作用,对2种植物病原真菌的孢子萌发也有较强的抑制作用,表明菌株BF-01及其代谢产物具有广谱的抑菌活性.     

紫色非硫光合细菌的研究——I.沼泽红假单胞菌的分类鉴定和生理特性

采用改良的Hungate厌氧培养技术-滚管法,从淀粉厂的污泥中,分离得到一株革兰氏阴性,弯曲杆状,出芽繁殖,既能在光照厌氧,也能在黑暗好氧条件下生活的光能异养型Y_6菌株.经形态观察、生理特性的测定,确证Y_6菌株为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas Palustris).     

牛瘤胃中琥珀酸产生菌的分离鉴定研究

通过添加地克球利进行富集培养,结合溴甲酚绿中性平板从牛瘤胃中初步筛选得300株产酸菌,TLC法点样分离出31株菌有不同程度的琥珀酸生产能力,进一步地HPLC法定性定量,复筛得8株发酵性状较优菌株,其中最有潜力的一株菌NO.4发酵琥珀酸累积产量达16.8 g/L。针对菌株的细胞及菌落形态研究表明,菌落为圆形凸起,表面光滑,不透明或半透明,呈浅兰色或乳白色,边缘整齐,菌体呈球状,细胞大多数单个或成双甚至成串出现,菌体兼性厌氧,呈革兰氏阳性,无内生芽孢,有荚膜,可运动。对菌株的进一步生理生化和16s-rRNA分析确认为Leuconostoc mesenteroides,最终将菌株NO.4命名为L.mesenteroides JST。     

连翘中具有药物活性成分内生菌的筛选及其拮抗特性的研究

采用组织分离法从连翘枝条中筛选出13株内生菌,其中有7株内生真菌,6株内生细菌。分别以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为指示菌株,采用平板对峙法对分离出的13株内生菌的抗菌活性进行筛选。结果表明：13株菌种中有10个菌株对1种供试菌具有抑菌活性。其中L-07-01、L-07-09、L-07-12、L-07-13的拮抗效果明显,L-07-09对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌效果,测量其抑菌圈直径为10 mm。L-07-12对大肠杆菌具有较强抑菌效果,测量其抑菌圈直径为10 mm。对拮抗效果较强的菌株进行液体发酵培养后采用双层打孔法,测定其抑菌效果后证明L-07-13对金黄色葡萄球菌有极强的抑制效果。对拮抗后的指示菌进一步镜检后,发现菌体有明显的溶菌、空洞、畸形等现象。连翘内生菌可以产生丰富的具有药物活性的次生代谢产物,可作为新型药物的筛选源。     

阴道念珠菌病患者阴道分泌物念珠菌培养鉴定及药敏分析

目的：了解大理地区妇科女性患者阴道分泌物念珠菌检出状况、菌群分布及对常用抗真菌药物的敏感性。方法：取有自觉阴道症状到妇科门诊就诊患者的阴道分泌物进行念珠菌培养、鉴定和药敏试验。结果：192份标本中念珠菌阳性标本55例,检出率28．6％,汉族和少数民族妇科门诊女性患者阴道分泌物念珠菌检出率分别为32．2％和25．7％,差异无显著性（P=0．324）;56株念珠菌中白色念珠菌32株、光滑念珠菌12株、克柔念珠菌5株、热带念珠菌4株、其它2株。56株念珠菌对KETO、FCZ、5-FC和Amb的耐药率最高的是KETO,达73．2％;最低的是Amb,无耐药株。结论：外阴阴道念珠菌病是妇科门诊的常见疾病,白色念珠菌仍是主要致病菌,光滑念珠菌感染逐渐增多。本地区妇科患者阴道异常分泌物检出念珠菌对常用抗真菌药物酮康唑存在普遍耐药现象,对两性霉素B基本无耐药株产生。