单克隆抗本亲和层析法纯化人尿激酶

含抗人尿激酶单克隆抗本的腹水经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ纯化得到ＩｇＧ纯品，分子量为１５０ＫＤ，与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成抗人尿激酶单克隆抗体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析介质。     

用脾内免疫法制备抗人尿激酶单克隆抗体

用常规免疫法制备抗人尿激酶单克隆抗体费时、费样品。本文采用脾内直接注射的免疫方法,利用杂交瘤技术制备了3C_6抗尿激酶单克隆抗体,3C_6单克隆抗体属IgM亚类,主要识别MW 54,000的高分子量尿激酶和MW 33,000的低分子量尿激酶。3C_6单克隆抗体与结构类似的胰蛋白酶和纤溶酶原无交叉反应,与胰凝乳蛋白酶原和胰凝乳蛋白酶有一定程度的交叉反应。     

抗人尿激酶单克隆抗体的制备

采用常规免疫和脾内免疫相结合的方法，利用杂交瘤技术得到两个能分泌抗人尿激酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株１０Ｈ１０，１０Ｄ１２。它们分泌的单克隆抗体主要识别Ｍｒ．５４，０００的高分子量尿激酶和Ｍｒ．１８，０００的尿激酶Ａ链。两种单克隆抗体与胰蛋白酶，胰蛋白酶原，胰凝乳蛋白酶和胰凝乳蛋白酶原等丝氨酸蛋白酶和酶原无交叉反应。     

尿激酶纯化方法与技术的研究

尿激酶产品为我国赚取了大量外汇，但大部分以粗品形式外销，且精品大多系台商在大陆投资企业所生产．为此，我们对尿激酶纯化方法与技术进行了研究．结果表明，我们摸索的工艺具有精制环节少、成本低、收率高、方法新（国内一般用ＤＥＡＥ─Ｓ精制）等特点．一般的精制收率（指比活在１５０００ｉｕ／ｍｇｐ左右）在３３％左右．而我们的产品收率在４１％．摸索的工艺条件对７１４树脂和ＣＭ—Ｓ破坏性小，去杂提纯效果好，降低了成本．     

免疫亲和层析法从兔杂交瘤培养上清液中纯化兔抗烟草花叶病毒的单克隆抗体

报道一种较为简易的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中分离纯化单克隆抗体。先用过碘酸钠活化层析柱填料Sepharose4B,然后加入碱性碳酸钠缓冲液与羊抗兔IgG于4℃偶联过夜,冲洗后加硼氢化钠使偶联稳定,经1％BSA-PBS溶液封闭,冲洗后即得到免疫亲和层析柱。将兔抗烟草花叶病毒（TMV）杂交瘤细胞2E2和3C6的培养上清加入亲和柱中,37℃下吸附1h,冲洗后用pH3稀盐酸溶液洗脱,洗脱液用Tris溶液调至pH中性,供SDS-PAGE分析和Westernblot实验。洗脱液中存在分子量约为60000与52000的二条蛋白条带。Westernblot结果显示,纯化抗体对纯化TMV样品,以及TMV侵染的烟草病叶中的TMV都具有非常好的识别能力。利用所报道的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中成功分离纯化到兔抗TMV的单克隆抗体。     

辛酸沉淀纯化单克隆抗体的研究

采用一种经修改的辛酸沉淀法进行纯化小鼠腹水或血清中单克隆抗体(McAbs)的试验,全部八种抗促卵泡激素(FSH)单抗腹水的纯化结果都很好。该方法大致做法为将经稀释的腹水调pH至4.5后加入辛酸,离心弃沉淀,取上清液加等体积饱和硫酸铵,所得沉淀物用磷酸盐缓冲液(PBS)溶解后对相同PBS作广泛透析。以聚丙稀酰胺凝胶电泳(PAGE)检查经纯化抗体的纯度,并在600nm波长上扫描PAGE图谱,对抗体纯度作定量分析。结果抗体纯化物的平均纯度达93％(范围:83.5—98.6％)。通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测得知,纯化后抗体活性无明显丢失。     

金属亲和层析法分离纯化醇脱氢酶

报道了用金属亲和层析法分离纯化酵母细胞中醇脱氢酶(ADH).以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,乙二胺为螯合配基,制备了金属螯合亲和吸附剂.通过溶胀法从酵母细胞中抽提胞内酶,粗抽提液再经过硫酸铵盐析以及亲和柱层析.收得率为16.9%,纯化倍数达11.5.     

单克隆抗体亲和层析纯化基因工程人γ-干扰素研究

用抗基因工程人γ－干扰素单克隆抗体（２Ａ１２）细胞株亲和层析从表达人γ－干扰素的大肠杆菌抽提液中纯化经稀释复性后的γ－干扰素。一步纯化后的γ－干扰素含量达９５％以上，蛋白质的比活性达 １．２×１０ｕ／ｇ，收率为７８％。洗脱液用 ０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣＩ的 ＰＢＳ溶液，洗脱率达９２．８％。     

Heparin-Argarose亲和层析法分离人甲状腺肿瘤组织中的bFGFs

本文介绍了甲状腺肿瘤组织中碱性纤维母细胞生长因子(basis Fibroblast Growth Factors.bFGFs)的提取过程和分子量鉴定。研究表明:bFGFs对肝素具有强的亲和力,组织匀浆通过Heparin-Argarose亲和层析柱后,用2.0mol/L的NaCl即可洗脱下来,收集其亲和峰值的洗脱组分,经三氯醋酸沉淀后即可得到bFGFs,经Western-blot方法分析其分子量有三种,分别为14KD、17KD、18KD。     

比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG

优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件,并与A蛋白亲和层析法比较纯化效果,以求得到一种简便、快速、高效的纯化IgG方法.结果表明:从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价高达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗血清,磁珠与IgG结合10 min达到平衡,其最大结合量为0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法...     

联苯胺亲和层析纯化尿激酶

利用甲基丙烯酸缩水甘油酯与乙二醇甲基丙烯酸酯经悬浮聚合反应合成亲水性亲和载体骨架,骨架上的不环氧基与氨水反应,继之与丁二酸酐反应,最后与配基联苯胺偶联制备亲和载体,配基密度为５４μｍｏｌ／ｇ湿胶。亲和载体吸附激酶的最佳条件为ＰＨ４．６和２．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ;测定了吸附等温线,算得离常数Ｋｄ为３１６ＩＵ／ｍｌ,了大吸附量ｑｍ为２．３８３×１０＾４Ｕ／ｍＬ湿胶,洗脱条件为含０．５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ     

聚苯乙烯载体亲和层析纯化尿激酶

聚苯乙烯经磺化后连接手臂６－氨基己酸，然后偶联配基对氨基苯甲脒，制成亲水性的亲和载体。载体的最适配基密度为每克湿载体３２μｍｏｌ，最适吸附条件为ｐＨ７．５、０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）。在ｐＨ４．０、０．１ｍｏｌ／Ｌ醋酸缓冲溶液（含ＮａＣｌ０．５ｍｏｌ／Ｌ）中，采用０～１ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＳＣＮ梯度洗脱，可将比活８．３３μｍｏｌ·Ｓ－１·ｍｇ－１的粗酶纯化５０倍，收率大于５３％。     

新型仿生亲和介质纯化工艺生产效率分析

抗体的捕获层析的成本在整个抗体纯化工艺中占有相当的比例.分析比较了新型小分子仿生亲和介质和常规蛋白A的动态载量、循环使用次数和线性流速等参数,并计算了相应的生产效率,发现新型小分子仿生亲和介质最高生产效率能达到蛋白A亲和层析介质最高生产效率的3⁶.9倍.     

尿激酶亲和层析分离中吸附和洗脱过程的速率模型模拟

采用非平衡层析速率模型，对尿激酶的亲和层析过程进行了模拟计算。利用亲和层析，可以将粗品原料净化为高纯度尿激酶产品；层析所用的亲和载体是采用对氨基苯甲脒作为配基，将琼脂糖凝胶进行活化制得的。通过问歇实验，测定了吸附等温线并进行吸附动力学研究。借助于VERSE—LC模拟软件，采用速率模型作为基本方程，对亲和层析的实验现象进行了数值模拟分析，与实验结果进行对比发现，速率模型可以较准确地描述固定床中的亲和层析过程。     

亲和层析法制备人血浆白蛋白

低温乙醇法FIV沉淀中含有白蛋白96．00±13．52g／kg．15倍生理盐水磷酸缓冲液可溶解其中的87．44％(约83．94±11．119／kg)．通过DEAE Affi-Gel Blue 亲和层析及DEAESepharose FF 离子交换层析两步分离的纯化工艺，可从FIV溶解液中回收白蛋白48．18±1.118／kg FIV，回收率为57．40±1.94％．白蛋白溶液呈淡黄色，澄清透明，纯度为98．28±1．68％，单体含量97．00±2．19％，吸收度为0．028±0．006．白蛋白试制品能耐受57℃50h热稳定性试验．各检测指标显示，通过亲和层析综合阴离子交换层析回收纯化的白蛋白制品各主要生化指标符合质检要求．     

纤维蛋白溶解酶原的纯化及性质

人血浆组分Ⅲ经Lys－Sepharose4B和SephadexG－200柱层析分离，得到分子量为90000的纯品纤维蛋白溶解酶原（HPg）．其作用的最适PH、温度、离子强度分别为6.0，25℃和0．05mol／L．Zn2＋对HPg活性有明显抑制作用；Mg2＋，Li＋，Ca2＋等离子显示了不同程度的激活作用．     

HRP标记β_2-微球蛋白单克隆抗体的研究

用辣根过氧化物酶(HRP)标记β2-微球蛋白单克隆抗体,以此作为ELISA实验的酶标二抗.用过碘酸钠将辣根过氧化物酶(HRP)的糖的部分轻微氧化为醛基,然后与抗体氨基进行反应,形成辣根过氧化酶(HRP)与抗体的结合物.将β2-微球蛋白与过氧化物酶的结合物进行纯化,得到较纯的酶结合物,以此作为ELISA的酶标二抗.     

重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定

通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子（VEGF）抗体的重链和轻链DNA序列, 分别构建表达载体pcDNA VEGFH和pcDNA VEGFV, 将表达载体共转染HEK 293细胞后, 与C6胶质瘤细胞共培养, 并将所得蛋白进行分离纯化. 实验结果表明: pcDNA VEGFH和pcDNA VEGFV共转染HEK 293F细胞, 可显著抑制C6细胞增殖（P<0.01）; 转染24~144 h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达; 所得纯化蛋白和标准品一致; 纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖（P<005~001）, 与标准品抑制效果相似.