金黄地鼠卵母细胞4℃保存的研究

目前体外评价人类精子受精潜力是借助去透明带地鼠卵穿透试验（HOPT）。但实际应用中，动物超排获得的新鲜卵往往难与精子完成制备的时相一致。而且，精子所需获能时间也存在很大个体差异。故此，离体后卵子若能在一定时间内保持活性则可避免这些不足。本文以4℃作卵子冷保存的条件进行实验，以期为HOPf应用冷保存卵提供参考性资料。卵子冷保存基液为HamsF10生理液，加人牛血清白蛋白、乳酸钙、碳酸氢钠等。以0．2mL为液滴，放人卵子20－30个／滴，置冰箱4℃水浴中保存。结果表明，冷保存24h组卵子的穿透率与对照组比较没有显著性差异。…     

醋酸铅对小鼠受精能力及受精卵发育毒性研究

目的研究醋酸铅对公鼠精子受精能力及受精卵发育的毒性,为进一步研究提供依据。方法采用腹腔注射染毒法将体重为(18±2)g的性成熟期公鼠随机分为高剂量(1/10 LD50)、中剂量(1/50 LD50)、低剂量(1/250 LD50)染毒组和对照组。染毒组公鼠于试验的0,3,6,9 d和12 d分别腹腔注射1.2,0.24,0.048 mg/mL的Pb(CH3COO)2.3H2O溶液,注射量0.01 mL/g,对照组注射相应体积的灭菌蒸馏水。染毒30 d后用各组公鼠与未染毒超排母鼠配种。结果回收胚胎中受精并卵裂的胚胎比例随染毒剂量的增加而显著下降,未受精卵比例相应上升。在受精卵地进一步发育中,随着染毒剂量的增加,退化胚比例显著上升,发育到囊胚~孵化胚的比率则显著降低。结论醋酸铅能明显影响小鼠精子的受精能力,并影响受精卵的进一步发育。     

小鼠未成熟卵母细胞体外培养

目的：探讨小鼠未成熟裸卵体外培养,获得较高的成熟率和受精率的适宜培养时间和培养条件。方法：在培养液中添加不同剂量的人绝经期促性腺激素（hMG)和卵泡刺激素（FSH）,分别培养从未行激素刺激排卵处理的昆明系小白卵巢中获得的未成熟裸卵,培养24h和48h后,进行体外受精和胚胎培养,结果：添加不同激素和培养不同时间对未成熟裸卵的体外成熟无显著性影响（P＞0．05）,但黄体生成素（LH）的存在对培养48h后成熟卵子的体外受精率有显著性影响（P＜0．05）,并随LH含量的增多,影响也越大。结论：未成熟裸卵能在体外培养成熟并受精,但培养液中LH含量对培养较长时间的成熟裸卵的体外精率有极显著的不利影响。     

小鼠卵泡卵母细胞体外成熟培养基的选择

试验选用30只昆明小白鼠,采出卵巢回收卵泡卵母细胞,分别在培养基WM、TALP、M-199、mD-PBS和BMOC-3中培养。小鼠卵泡卵母细胞在五种培养基中的发育率都在81％以上,统计处理之间都没有显著差异。但成熟率差异明显,其中WM最高(65.7％),BMOC-3最低(18.2％),TALP、M-199和mD-PBS则相近,三者的成熟率分别为37.1％、37.5％和38.5％。试验资料表明WM是小鼠卵泡卵母细胞体外成熟的最佳培养基。     

昆明白小鼠卵母细胞的生发泡移植

为探讨细胞核与细胞质调控减数分裂的机制，对昆明白小鼠GV期卵母细胞进行了GV移植研究．将6～8周龄小鼠GV期卵母细胞分别与6～8周龄和3月龄小鼠GV期卵母细胞进行GV互换，所形成的3种GV～胞质体复合体的融合率(85．0％～89．8％)和3种重组卵母细胞的成熟率(93．9％～96．2％)并不因小鼠年龄的改变而有所变化．经人工活化后，3种重组卵母细胞形成原核期胚和2-细胞期胚的比率(分别为80．5％～85．4％和51．2％～55．4％)也不因不同年龄小鼠卵母细胞所带来的细胞质或细胞核的改变而受到影响．细胞遗传学分析表明成熟的重组卵母细胞表现出正常的核型．     

三元体系NH4Cl-NH4SCN-H2O的相平衡研究（0℃，30℃）

测定了NH4Cl-NH4SCN-H2O三元体系在0℃和30℃时的溶解度和饱和溶液的折光率，绘制了相应的溶度图及折光率图，结果表明0℃和30℃时体系的等温溶度图均为简单共饱型，其溶度曲线和折光率曲线均由两支构成，在0℃和30℃时共饱点的组成NH4Cl和NH4SCN的质量分数分别为5．82％，51．39％；6．70％，61．88％．     

第一次减数分裂期小鼠卵母细胞的化学去核

过免疫荧光染色法确定了小鼠第一次减数分裂的进程,在此基础上分别用脱羧秋水仙碱和放线菌酮处理成熟培养的小鼠卵母细胞,抑制其纺锤体极间微管的延长和降低成熟促进因子的浓度,使其核物质随极体全部排出.结果表明:(1) 卵母细胞从有腔卵泡中分离时处于生发泡期,可见核仁;成熟2h内则全部发生生发泡破裂;培养5h,90%到达第一次减数分裂的前中期;培养8h,则33.3%处于中期;71.4%的细胞在成熟12h后发育为后期;第二次减数分裂的中期则于成熟培养15h发生.(2) 于成熟的不同时间取卵母细胞-卵丘细胞复合体进行去核处理后发现,体外成熟培养5h(即卵母细胞处于第一次减数分裂前中期时进行处理),其去核率最高,达85.6%;成熟5h之前各组随成熟培养时间的延长而去核率升高,之后各组则降低.(3) 比较卵母细胞-卵丘细胞复合体与自然裸卵去核率,后者效率为56%,显著低于前者(p＜0.05),因此该方法在卵母细胞-卵丘细胞复合体的完全去核率与传统的物理去核方法相当.     

褪黑素对小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响

本文通过卵母细胞自发成熟体外培养模型研究了褪黑素(MT)对小鼠如母细胞成熟的影响。结果表明:0.1mg/ml、0.02mg/ml、0.004mg/mg及0.0008mg/ml浓度的MT均能显著抑制小鼠卵丘卵母细胞复合体(CEO_s)自发成熟过程(P<0.01)。但对裸卵(DO_s)自发成熟,没有影响。结论:MT是调节哺乳动物卵母细胞成熟的重要激素之一,其作用机制可能是通过卵丘细胞实现的。     

精子和酒精对小鼠卵母细胞激活的比较

对不同卵龄的小鼠卵母细胞被精子和酒精激活后的激活率进行了比较。结果显示,卵母细胞对常规的体外受精和酒精的人工激活的激活率存在卵龄的差异。注射hCG后15～24h的卵母细胞容易被酒精的人工刺激所激活,20h卵龄的卵母细胞激活率最高,平均为81．6％,且速即卵裂率也最高,平均为48％,卵龄更大的卵母细胞激活率降低,而13h的卵母细胞难以被酒精激活。另一方面,13～15h的卵母细胞容易被精子激活而受精,卵龄较大的卵母细胞在体外难以被精子激活受精。这表明,精子和酒精对卵母细胞的激活机制有所不同。     

三元体系LiCl-NH4Cl-H2O的相平衡研究（O℃，30℃）

测定了三元体系LiCl-NH4Cl-H2O在0℃、30℃时的溶解度和饱和溶液的折光率，绘制了相应的等温溶度图及折光指数图．结果表明0℃和30℃时体系均为简单共饱型，其溶度曲线和折光率曲线均由两支组成，分别对应于LiCl&#183;H2O和NH4Cl．在0℃和30℃时LiCl和NH4Cl共饱点的组成质量分数分别为28．50％，3．50％；44．80％，3．51％。     

DHEA对小鼠超排卵和卵母细胞质量的影响

目的 研究脱氢表雄酮(DHEA)对C57BL/6J雌鼠超排卵效果和卵母细胞质量的影响及其机制。方法 3周龄C57BL/6J雌鼠30只随机分为3组,分别为对照组、低剂量处理组(2 mg/kg·d-1)和高剂量处理组(5 mg/kg·d-1)。用DHEA灌胃1周,再经超排卵后分别进行体外受精和收集卵丘细胞。提取卵丘细胞RNA进行qRT-PCR检测与胚胎质量相关基因Grem1、Has2、Ptgs1、Ptgs2和Vcan的mRNA水平以及凋亡相关基因Caspase3和Bcl2l10的mRNA水平。结果 经过DHEA处理的雌鼠超排卵后,体外受精(IVF)显示实验组异型卵比例下降。实验组卵丘细胞中与胚胎质量相关基因Has2,Ptsg1和Vcan转录水平与对照组相比上调,而Germ1和Ptgs2的mRNA水平下调。Caspase3的mRNA水平下调,Bcl2l10的mRNA水平上调。结论 经过DHEA处理后可以通过抑制卵丘细胞凋亡,提高卵母细胞的质量。     

抗氧化剂对小鼠腔前卵泡及其卵母细胞体外发育的影响研究

通过使用改良的TCM199无血清培养系统,在96孔细胞培养板中,每孔放入一个腔前卵泡等条件下,探索添加物抗氧化剂维生素C对小鼠腔前卵泡卵母细胞体外生长发育的影响,旨在摸索一套适合小鼠腔前卵泡体外生长发育的培养体系.结果表明:随着浓度的增加,卵泡和卵母细胞的直径都不同程度地有所增长,其中50μg/m L浓度组在卵泡培养相同时间下,卵泡和卵母细胞的增长值相对于其他浓度组略大些,但各浓度组之间无论是卵泡直径增长值还是卵母细胞直径增长值都不存在显著性差异(P0.05).培养到第6天时,50和100μg/m L浓度组卵泡存活率最高,为59.5%,且50μg/m L浓度组第一极体排出率最高,为2.38%,但发生生发泡破裂率次于150μg/m L浓度组.可得结论:在改良的TCM199无血清培养系统中,添加50μg/m L维生素C有利于腔前卵泡卵母细胞的生长,而添加150μg/m L维生素C有利于生发泡破裂.     

卵母细胞老化对小鼠体细胞克隆胚发育的影响

就小鼠卵母细胞的卵龄对克隆胚的体外发育能力的影响进行了检测,以确定最佳的取卵时间,以及取卵后进行核移植操作的可耐受的时间。采用PMSG和hCG超排B6D2F1雌鼠。在体内老化实验中,分别于注射hCG后13,15,17,20h取卵用于核移植操作;在体外老化实验中,所有的卵均于注射hCG后13h取出并培养,然后在13,15,17,20h进行核移植操作。每个时间点的核移植操作在1h内完成,重构的胚胎培养1h后进行激活。结果显示:在体内老化实验中,注射hCG后13h取卵,获得的克隆囊胚发育率最高,为56.0%,15h取卵仍维持了其支持胚胎体外发育的能力,但17h及更长时间后取的卵,重构后的囊胚发育率显著下降(18.1%)。注射hCG后15h取的卵孤雌发育率最高(囊胚发育率为90.1%),并在17h仍维持较高的孤雌发育能力,在20h显著下降。在体外老化试验中,于注射hCG后13h取卵,分别于13,15,17h重构,都获得了较高的囊胚发育率(分别为57.7%,52.2%,46.3%),而在注射hCG后20h重构,囊胚发育率显著下降(14.8%)。体外老化的孤雌胚在注射hCG后22h激活时囊胚发育率显著下降。结果表明:卵母细胞在体内和体外老化都影响克隆胚的体外发育,最佳取卵时间为注射hCG后13h,取卵后立即用于重构可获得最佳囊胚发育率;体内、外老化卵支持重构胚较好发育的时间间隔是不同的,体内老化卵支持重构胚发育能力从注射hCG后17h开始下降,体外老化卵则发生在20h。这些结果可以指导操作,有利于在应用核移植进行其他基础研究时降低操作引起的误差。     

昆明小鼠未成熟卵母细胞OPS和SSV冷冻保存的比较

目的寻找昆明小鼠卵母细胞冷冻保存效率的新途径。方法选用5~6周龄雌性昆明小鼠的未成熟卵母细胞,在不同前处理液(10%EG或10%EG+10%DMSO)中平衡5 min,然后在冷冻液(EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40)中平衡30 s后进行OPS(Open pulled straw)法和SSV(Solid-surface vitrification)法玻璃化冷冻保存。结果小鼠未成熟卵母细胞的OPS法冷冻保存中,用EFS液冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为84.4%,成熟率低于16.7%;而在SSV法冷冻保存中,用EFS液冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为86.0%,成熟率为46.5%。OPS法和SSV法冷冻小鼠未成熟卵母细胞形态正常率为91.6%和91.4%,与对照组间差异较显著(P>0.01);成熟率为42.9%和59.1%,与对照组差异极显著(P<0.01)。结论多种抗冻保护剂组合使用效果好于单种抗冻保护剂;EDFS冷冻液冷冻保存效果好于EFS,尤其是EDFS30;OPS法可以有效地冷冻保存小鼠未成熟卵母细胞,且新型玻璃化冷冻法SSV法冷冻保存效果优于OPS法。     

小鼠腔前卵泡卵母细胞的体外培养、体外成熟和体外受精研究

小鼠腔前卵泡在体外生长过程中，于培养液中添加血清，以及ＦＳＨ和胰岛素均对小鼠腔前卵泡的体外生长，体外成熟，体外受精起促进作用，其中以胰岛素的效果最为显著，腔前卵泡的体外成熟率和体外受精率可达６９．４％和８０．６％，但是体外受精后的体外发育率低于加ＦＳＨ的试验组，表明ＦＳＨ有益于卵母细胞生长过程中细胞质的成熟，单层培养的卵巢颗粒细胞对腔前卵泡的体外生长也具有促进作用，将体外受精后发育至２－细胞的胚胎     

小鼠腔前卵泡卵母细胞的体外培养、体外成熟和体外受精研究

小鼠腔前卵泡在体外生长过程中，于培养液中添加血清，以及ＦＳＨ和胰岛素均对小鼠腔前卵泡的体外生长、体外成熟、体外受精起促进作用，其中以胰岛素的效果最为显著，腔前卵泡的体外成熟率和体外受精率可达６９．４％和８０．６％，但是体外受精后的体外发育率低于添加ＦＳＨ的试验组，表明ＦＳＨ有益于卵母细胞生长过程中细胞质的成熟。单层培养的卵巢颗粒细胞对腔前卵泡的体外生长也具有促进作用。将体外受精后发育至２—细胞的胚胎移植入受体鼠，胚胎可以正常着床发育。同时，卵母细胞的核仁和线粒体在培养过程中也发生相应的变化。     

小鼠卵母细胞生发泡破裂前的钙离子波动及分布

用显微操作技术将Ｃａ＾２＋特异荧光染料Ｃａｌｃｉｕｍ ｇｒｅｅｎ＾ＴＭ－１注射入ＧＶ期卵母细胞的细胞质内,在激光扫描共聚焦显微镜下观察生发泡破裂前Ｃａ＾２＋的时间和空间分布的变化,利用Ｌａｓｅｒ ｓｈａｒｐ软件进行分析,发现一种有规律的Ｃａ＾２＋波动,其波动周期约为９０ｓ。卵母细胞内Ｃａ＾２＋的分布并不均匀,核膜周围的Ｃａ＾２＋浓度了高,细胞质中次之,而生发泡内部Ｃａ＾２＋浓度最低。     

富勒烯及其衍生物对小鼠卵母细胞成熟和激活的作用

为探索富勒烯及其水溶性衍生物对哺乳动物卵母细胞减数分裂的作用,使用富勒烯膦酸衍生物(2P)、富勒烯-PVP和富勒醇作用于体外培养的小鼠GV期卵母细胞和超排卵母细胞,通过观察第一极体排出率和原核形成率以判断卵母细胞的成熟和激活,并探讨光照对这一作用的影响.结果表明,在光照和非光照下,富勒烯的PVP水溶液、富勒醇对卵母细胞的成熟没有明显影响,而2P在光照下对卵母细胞的成熟和孤雌激活具有明显抑制作用,其作用有浓度依赖性.     

淡干虾皮在4℃及25℃贮藏条件下的品质变化

对淡干虾皮在4℃和25℃贮藏条件下的品质变化进行了研究。在4℃条件下,贮藏30 d时,挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)、菌落总数(total plate count,TPC)和三甲胺氮(trimethylamine nitrogen,TMA-N)分别达到0.824 mg/g、9.40 log CFU/g和0.054 mg/g;在25℃贮藏条件下,贮藏3 d时TVB-N、TPC、TMA-N分别达到0.293 mg/g,7.24 log CFU/g和0.045 mg/g。硫代巴比妥酸反应物质(thiobarbituric acid reactive substances,TBARS)和样品的b*值在贮藏期间显著增加。低温贮藏可大幅延缓淡干虾皮的变质过程。淡干虾皮在贮藏过程中的所有品质指标的变化与贮藏时间都呈显著相关。     

激素超排对小鼠卵母细胞染色体空间形态的影响

激素超数排卵作为一种非自然排卵方式,在临床辅助生殖及基础科学研究中应用广泛。但此种排卵方式对卵母细胞成熟质量的影响仍不明确。鉴于此,以荧光标记、双光子成像及图像三维重构为技术基础,量化研究激素超排获取的卵母细胞中染色体的空间构象情况。结果表明,激素超排造成染色体空间排布异常,但不影响染色体的体积、表面积等几何构型。此结果可能提示激素超排干扰了染色体的运动与迁移功能,希望能为深入认识激素超排技术提供有用的参考。