螺旋藻废液中藻多糖的提取与分离纯化

从螺旋藻废液中提取藻多糖 ,经酶和Sevage脱蛋白 ,SephadexG - 2 5凝胶过滤层析除去全部 (NH4) 2 SO4,再经DEAE -SepharoseFastFlow和SephadexG - 10 0凝胶柱层析分离纯化藻多糖 ,得到两个藻多糖组分PSPⅠ、PSPⅡ ;经高效液相色谱法测定PSPⅠ相对分子量为 130 0 0 ;经完全酸水解研究 ,确定PSPⅠ是由D -葡萄糖、D -甘露糖、D -葡萄糖醛酸组成的多糖。     

响应面法优化碱提斜生栅藻多糖的提取工艺

微藻多糖具有抗氧化、抗病毒等多种生物学活性,但对微藻多糖的提取多采用热水浸提法,多糖提取率及提取效率较低。为了提高斜生栅藻多糖的提取率,通过单因素试验和Box-Benhnken中心组合实验设计,对影响斜生栅藻多糖提取率的主要因素碱液浓度、提取温度和提取时间进行了优化。实验结果表明,当碱液质量浓度为0.175mol/L、提取温度为80.8℃、提取时间为2.1h时,实验条件最优,斜生栅藻多糖的提取率可达到11.08%,与模型预测值接近;优化后的碱提斜生栅藻多糖提取率和提取效率较热水浸提法分别提高了4.74和13.27倍。     

叉鞭金藻多糖的分离纯化及体外抗氧化作用研究

叉鞭金藻多糖(DAP)经琼脂糖凝胶柱层析进行分级,得到了DAP-1和DAP-22个组分,分别对这2个组分进行了纯度和分子质量的测定,并考察了对羟自由基OH.、超氧阴离子O2-.的清除效果,以及对H2O2诱发小鼠红细胞氧化溶血的抑制作用和对小鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用.结果显示,两个组份的组成相对均一,能显著或极显著清除OH.、O2-.,抑制小鼠红细胞溶血,并能显著抑制小鼠肝脂质过氧化的产生,且呈现剂量依赖性.其中DAP-2的抗氧化活性较DAP-1好,其对OH.、O2-.的清除率最高可达85.2%和76.0%,对小鼠红细胞的溶血抑制率和脂质过氧化的抑制率分别可达83.6%和89.3%.     

桑叶多糖提取及抑菌实验研究

以超声波辅助水提醇沉法提取桑叶多糖,采用正交实验法优化桑叶多糖的提取工艺;采用滤纸片法进行抑菌试验评价桑叶多糖体外抑菌作用。实验考察提取时间、液固比、提取温度等因素对桑叶多糖提取率的影响,观察桑叶醇提物和桑叶多糖对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌抑制作用。实验结果证明:超声波提取时间50 min,液固比40:1(m L.g~(-1)),提取温度为70℃,其桑叶浸提液中的多糖得率达到5.50%,体外抑菌实验结果显示桑叶醇提物对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌有明显的抑制作用,桑叶多糖对这两种菌则没有抑制作用。     

红树植物老鼠筋多糖的提取和初步纯化的研究

对老鼠鲂多糖的提取和初步纯化工艺进行了研究，通过探讨料液比、提取时间、提取温度和提取次数对老鼠鲂多糖提取率的影响，并在单因素的基础上进行正交试验来确定最佳提取条件．结果表明：提取多糖最佳条件未料液比（树枝：水）为1：35，90℃水浴提取3h，提取次数为3次，多糖提取率达到1．14％．使用不同树脂（D001，D301，D201，ADS-8）对老鼠筋粗多糖进行初步纯化，结果表明D301脱色脱蛋白效果最好，并可将纯度提高到35．6％．     

微囊藻毒素的提取纯化方法比较

研究了从天然蓝藻水华藻粉中提微囊藻毒素，以及对提取物纯化的方法。通过对比不同提取剂的提取效果，发现浓度为80％的甲醇溶液提取效率最高，但采用乙醇作为替代提取剂也有较好的效率，且方法更为安全。对于提取物的纯化，可通过调节溶剂的pH至等电点以除去对反相填料具有负作用的藻胆蛋白。研究结果为更高效地纯化微囊藻毒素提供了依据。     

小远志多糖的提取及纯化

微波辐射下经水提取得到小远志粗多糖(提取率4.86%),经过脱蛋白、二乙氨基乙基纤维素(DEAE-52)离子交换和Sephadex G-200凝胶色谱法分离得到两个主要组分PP-1和PP-2,纸层析、HPLC、比旋光度法证明两者均为均一组分,经凝胶层析法测得两者的相对分子质量分别为40 800和97 300.     

多糖的提取纯化研究

研究了多糖的提取纯化方法,提出了将来的研究和发展方向.     

红树植物老鼠簕多糖的提取和初步纯化的研究

对老鼠簕多糖的提取和初步纯化工艺进行了研究,通过探讨料液比、提取时间、提取温度和提取次数对老鼠簕多糖提取率的影响,并在单因素的基础上进行正交试验来确定最佳提取条件.结果表明:提取多糖最佳条件未料液比(树枝:水)为1:35,90℃水浴提取3h,提取次数为3次,多糖提取率达到1.14%.使用不同树脂(D001,D301,D201,ADS-8)对老鼠簕粗多糖进行初步纯化,结果表明D301脱色脱蛋白效果最好,并可将纯度提高到35.6%.     

微囊藻毒素的提取纯化方法比较

研究了从天然蓝藻水华藻粉中提微囊藻毒素,以及对提取物纯化的方法.通过对比不同提取剂的提取效果,发现浓度为80%的甲醇溶液提取效率最高,但采用乙醇作为替代提取剂也有较好的效率,且方法更为安全.对于提取物的纯化,可通过调节溶剂的pH至等电点以除去对反相填料具有负作用的藻胆蛋白.研究结果为更高效地纯化微囊藻毒素提供了依据.     

杜氏盐藻无菌纯化研究

首先通过杜氏盐藻及藻液内优势菌对抗生素的敏感性实验确定了氨苄青霉素、庆大霉素、头孢霉素和链霉素为该盐藻的除菌工具.采用联合加入的方法,即上述4种抗生素终浓度均为800μg/mL,相同浓度连续混合处理3次,每次处理间隔2d,再结合平板稀释分离法,获得无菌盐藻.带菌盐藻的生长稍快于无菌盐藻,但会较早出现老化现象;分别回加分离到带菌盐藻中的5种优势菌会促进无菌盐藻的生长.本实验为进一步的盐藻转基因以及藻菌关系等研究奠定了基础.     

盐生杜氏藻的完整叶绿体分离

盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是世界上最耐盐的一种单细胞真核绿藻,可在含0．1～5．0mol／L NaCl的培养液中正常生长．盐生杜氏藻细胞内的主要调渗物质是甘油,在甘油代谢途径中,3-磷酸甘油脱氢酶是一个关键酶．近年来的研究表明杜氏藻(Dunaliella tertiolecta)细胞质和叶绿体中都存在3-磷酸甘油脱氢酶的同工酶,且叶绿体上的同工酶与渗透调节作用直接相关,为了解D．satina中3-磷酸甘油脱氢酶同工酶的细胞定位和分布,我们通过冰浴超声波破碎和蔗糖密度梯度离心,获得盐生杜氏藻的完整叶绿体,用相差显微镜镜检、酶的活性分析等方法对其完整性作了初步分析。     

盐生杜氏藻碱性蛋白的研究

以一种单细胞的盐生杜氏藻为实验材料，利用化学和机械的方法破碎细胞，然后梯度分离细胞核，用盐酸抽提细胞核蛋白质，并与小牛胸腺组蛋白相比较。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析测定所得的碱性蛋白发现盐生杜氏藻核中有三条碱性蛋白带，两条蛋白带与Ｈ３与Ｈ４相对应，另一条分子量很小。     

盐藻rbcS基因克隆及其原核表达

1,5-二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶（Ribulose1,5-bisphosphate carboxylase／oxygenase,E,C．4,1．1．39简称RuBisCO）是光合作用中的关键酶,作者应用RT-PCR技术从一种极其耐盐的生物-杜氏盐藻的总RNA中克隆RuBisCO的小亚基（rbcS）的cDNA,它的开放读码框为570bp,编码190个氨基酸,将此cDNA定向克隆于原核表达载体pET-30a（＋）中,构建重组质粒pET-rbcS,经IPTG诱导,在大肠杆菌株BL21中表达．SDS-PAGE电泳表明,rbcS融合蛋白分子量约为26kDa．     

盐生杜氏藻Dunaliella salina的生物学特性与培养研究

盐生杜兵藻富含β－胡萝卜素和蛋白质，适宜在高纬度、光照强的各种咸水环境中生长，对它的生物学特性和培养条件进行了研究，发现适宜于盐生杜氏藻生长的培养基主要成分为：２ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ，５ｍｍｏｌ／ＬＫＮＯ３，６．５ｍｍｏｌ／ＬＮａＨＣＯ３，５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＳｏｒ，０．３ｍｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４。     

盐度对盐生杜氏藻叶绿体超微结构的影响

研究不同盐度对盐生杜氏藻（ Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａｓａｌｉｎａ（ Ｄｕｎａｌ．） Ｔｅｏｄ ．） 叶绿体超微结构的影响．结果显示,在ＮａＣｌ 浓度为２ ．７ ｍｏｌ／Ｌ 的培养液中,其叶绿体为典型的杯状结构．在ＮａＣｌ 浓度从２ ．７ ｍｏｌ／Ｌ 增加到４ ．３ ｍｏｌ／Ｌ时,其杯状叶绿体逐渐离解为多个相互连结或分离的部分;叶绿体内的类囊体片层系统解体并出现大量的嗜锇质体小球;在分离的叶绿体间隙中形成多个线粒体．在培养液的ＮａＣｌ 浓度逐步从４ ．３ ｍｏｌ／Ｌ 降低到２ ．７ ｍｏｌ／Ｌ后,盐藻的叶绿体又逐步恢复为典型的杯状结构．由此可知,不同盐度下盐藻叶绿体的结构变化是一个可逆的过程,这种可逆变化是盐藻得以在高盐度,强光照,易蒸发的自然环境中生存的一种适应机制．     

盐藻的无菌培养及其抗生素标记的选择

对影响盐藻生长的NaNO3、NaH2PO4、NaHCO3和VB1、VB12、VH等几种主要营养盐进行了优化,在单因素实验的基础上做了四因素三水平正交实验,实验结果得出优化配方为N／P值固定为f／2培养基,NaNO3和NaH2PO4添加量为f／2培养基的10倍、NaHCO3 0．4g/L、VB1 100μg／L、VB12 1．0μg/L,其他元素按f／2培养基添加．对盐藻的选择标记进行了研究,选择了氯霉素、G418、潮霉素3种抗生素进行实验,得出氯霉素适合作为盐藻基因工程的筛选抗生素,CAT基因为其阳性筛选标记基因,固体培养基筛选浓度为80μg／mL．为该藻的进一步高密度大规模培养和分子水平的研究提供了依据．     

盐藻GPDH基因的载体构建及在烟草中的表达

作者用冻融法，将构建有盐藻3-磷酸甘油脱氢酶基因的植物高效表达载体DsGPDH导入感受态的根癌农杆茵EHA105中．叶盘法转化烟草，在含卡那霉素的MS培养基上进行选择性培养，生根率达到80％．用POR的方法对再生苗进行了初步筛选，阳性率约为50％．对PCR阳性苗，进行RT-PCR分析，证实整合到烟草基因组中的GPDH基因表达产生了mRNA．     

温度对杜氏藻生长和脂肪酸组成的影响

研究了不同温度对盐生杜氏藻(Dunaliella.salina)生长及脂肪酸组成的影响.结果表明:在20～32℃之间,提高培养温度和增加光照强度促进了盐生杜氏藻的生长;盐生杜氏藻的脂肪酸组分以C16和C18脂肪酸为主,随着培养温度的升高和光照强度的增加,藻株内饱和脂肪酸所占百分比例增加,多不饱和脂肪酸所占百分比例减小.     

盐生杜氏藻和衣藻双结构域NAD+-GPD基因的生物信息学分析

盐生杜氏藻（Dunaliella salina）是极端耐盐的单细胞真核绿藻,依赖于NAD的3－磷酸甘油脱氢酶（NAD+-GPD）是盐生杜氏藻调渗物质——甘油合成的关键酶.盐生杜氏藻NAD+-GPD基因是第一个被发现含双结构域（SerB和GPD）的GPD基因.而双结构域可能是盐生杜氏藻具有极强耐盐性和快速合成甘油的关键.通过与莱茵衣藻基因组数据库比对,发现莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）中也存在具有SerB和GPD结构域的NAD+-GPD基因序列.在对两个物种NAD+-GPD基因的基因结构、mRNA组成成分、编码蛋白及其理化性质和编码蛋白结构的分析中,发现二者具有较高的相似性.针对目前仅在盐藻和衣藻中发现含SerB和GPD结构域的NAD+-GPD基因这一现象,分别对SerB和GPD结构域同源基因的系统进化进行了分析.