中华管鞭虾多酚氧化酶生化特性研究

对中华管鞭虾中多酚氧化酶(PPO)的活性及其影响因素进行研究,讨论了最适反应温度、pH、特异性底物及其酶动力学性质,激活剂对酚氧化酶的激活作用,抑制剂对酚氧化酶的抑制作用。结果表明:中华管鞭虾酚氧化酶的最适反应温度为45℃,最适反应pH为8.0;十二烷基硫酸钠(SDS)对PPO的激活作用最大,其次为胰凝乳酶和β-葡聚糖,激活率分别为71.9%、62.4%和33.4%;4-己基间苯二酚对PPO抑制作用最强。     

影响金针菇多酚氧化酶活性因素研究

目的 从金针菇中提取多酚氧化酶,并对其特性进行研究.方法 采用分光光度法研究温度、pH、抑制剂对金针菇多酚氧化酶活力的影响.结果 以邻苯二酚为底物,金针菇多酚氧化酶(Polyphenoloxidase fromFlammulina velutipes,FVPPO)的酶促褐变产物在可见光波长295 nm处有最大吸收峰;在pH为5.0～6.0范围内酶活力较大;在20～40℃的范围内随着温度升高,酶活性逐渐增强;在40℃时PPO活性最强;抗坏血酸、柠檬酸、EDTA-2Na对金针菇多酚氧化酶的活性都有抑制作用,在同浓度下,对金针菇PPO活性的抑制效果次序为抗坏血酸>柠檬酸>EDTA-2Na.结论 金针菇多酚氧化酶的最适pH为6.0,最适温度为40℃,抗坏血酸对金针菇PPO活性的抑制作用最强.     

刺嫩芽中多酚氧化酶活性的影响因素研究

研究了pH、温度以及抑制剂与激活剂对从新鲜刺嫩芽中提取出的多酚氧化酶（PPO）活性的影响,及温度对其热稳定性的影响.结果表明：以邻苯二酚为底物,该酶的最适pH为4.4,在pH 4.0-4.8内有较高的稳定性;最适温度为12.5℃,在30℃以上失活;70℃热处理90 s可以钝化PPO的活性;抗坏血酸（Vc）,L-Cys对PPO有抑制作用,SDS对PPO有激活作用.     

黄花梨多酚氧化酶特性及防褐变处理

从黄花梨中提取多酚氧化酶,并对其特性进行研究.以邻苯二酚为底物采用分光光度法测定了不同pH值、温度、底物浓度、酶浓度及抑制剂对PPO活性影响.结果表明:黄花梨PPO具有同工酶.黄花梨PPO的最适pH值为6.0,最适温度为25℃,并在此基础上考察了抗坏血酸、柠檬酸、亚硫酸氢钠和L-半胱氨酸对PPO的褐变抑制效果.     

甘蔗多酚氧化酶酶学特性及应用研究

对甘蔗多酚氧化酶(PPO)进行提取和部分纯化,研究了PPO的酶学特性.结果表明:以邻苯二酚为底物,甘蔗PPO酶促反应米氏常数Km为54.4 mmol/L,米氏方程:V=1250[S]/(54.4+[S]).蔗汁中邻位多酚类物质是甘蔗PPO的最适反应底物.最适反应条件为:pH值6.2,40℃;该酶在pH5.8和温度低于3℃0时较稳定.试验了6种甘蔗PPO抑制剂:单独使用柠檬酸、草酸、乙二胺四乙酸(EDTA)对PPO活力抑制效果不明显;70 mg/L亚硫酸氢钠、110 mg/L抗坏血酸、120 mg/L硫代硫酸钠可完全抑制PPO活力.现行甘蔗提汁的浸渗工艺较适合蔗汁酶促褐变反应,应作相应的调整.     

李多酚氧化酶酶学特性的研究

采用分光光度法,研究了李多酚氧化酶（PPO）的特性,包括不同温度、pH值、底物浓度和抑制剂对PPO活性的影响,以及PPO的热稳定性。结果表明：李PPO的最适酶促反应温度为30℃;最适pH值为5．5;Km为123mmol／L;Vm为0．522△OD／min;90℃热处理2min可钝化PPO的活性;抗坏血酸和亚硫酸钠为强抑制剂,质量分数为189mg／kg的亚硫酸钠和317mg／kg的抗坏血酸能有效抑制PPO的活性。     

枯草芽孢杆菌WD-23 β-甘露聚糖酶的纯化及其酶学性质

利用硫酸铵盐析缓冲液透析、聚乙二醇浓缩、DEAE-Sepharose FF窝子交换层析等方法,纯化了枯草芽孢杆菌WD-23 β-甘露聚糖酶,并研究了其酶学性质。结果表明:纯化的枯草芽孢杆菌WD-23 β-甘露聚糖酶的分子质量约为40 ku,酶的纯化倍数为14.1倍; 最适反应pH和pH稳定范围分别为5.6和5.0～7.0; 最适反应温度和温度稳定范围分别为55 ℃和40～70 ℃; Ca²⁺对该酶的促进作用最为明显,Li⁺的抑制作用最明显。     

菊芋多酚氧化酶的酶学性质

为了解菊芋提取物氧化变色的机理,用分光光度法分别研究了以邻苯二酚为底物的酶促褐变反应动力学和pH值、温度、底物浓度、酶浓度对该反应的影响,以及不同底物对多酚氧化酶活性的影响,揭示了菊芋多酚氧化酶(PPO)的基本酶学性质.结果表明:菊芋PPO催化邻苯二酚氧化反应的最适pH值为4.8,最适温度为35℃;菊芋PPO的热稳定性差,85℃以上加热处理5min就可使其大部分失活;菊芋PPO酶促褐变反应动力学符合米氏方程所描述的规律,相应的动力学参数Km=0.013 mol/L,Vmax=7.5 mmol/s.菊芋PPO的活性随酶浓度的增加而增大,酶的添加量超过0.8mL后,增速逐步减小;菊芋多酚氧化酶对邻位多酚的氧化具有专一性.     

联氨氧化酶初步纯化及醌类化合物对其活性影响

厌氧氨氧化菌是一种化能自养菌,它具有独特的生理生化特性及生物脱氮机理.对厌氧氨氧化菌进行实验室扩大培养,对其主要代谢酶联氨氧化酶性质进行研究,对联氨氧化酶进行初步纯化,并探究醌类化合物对联氨氧化酶活性的影响.最终得出联氨氧化酶活性最适温度为35℃,最适pH为7.5.酶纯化结果表明超滤相对分子质量在50～100 kDa....     

草鱼肌肉亮氨酸氨肽酶的分离纯化与性质研究

通过DEAE-Sephacel离子交换层析、Sephacryl S-200 HR凝胶过滤层析、羟基磷灰石层析和Phenyl Sepharose 6-Fast Flow疏水层析,从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉中分离纯化得到了一种亮氨酸氨肽酶,并对其生物化学性质进行了研究.结果表明,草鱼肌肉亮氨酸氨肽酶分子量约为105 ku,是单体结构.最适温度为40 ℃,最适pH为7.5,属于金属蛋白酶.除了Leu-MCA,该酶对其它多种荧光合成底物也有一定程度的分解作用,但对内肽酶对应的荧光底物则没有分解作用.     

朊圆酵母Y0401尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0～12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时活性保持90%,在60℃处理30min时活性仍保持80%.在最适条件下,该酶催化尿酸的米氏常数(Km)为3.34×10-5mol/L.一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

十二烷基硫酸铵对烟草多酚氧化酶的激活作用

本文对从新鲜烟叶中分离纯化了两种多酚氧化酶,分别命名为多酚氧化酶(PPO )和多酚氧化酶(PPO ),并对其活性做了深入研究,发现对大多数蛋白质有抑制作用的十二烷基硫酸钠(SDS)对其有激活作用。在SDS浓度为0.5mM的条件下,PPO 和PPO 的活性分别提高了50%和86%。在pH值为6.5,T=50℃时PPO 的活性达到最大,在此条件下加入SDS后PPO 的活性提高了29.6%。SDS与PPO 的物质的量比在1.2时,PPO 的活性达到最大。     

农药胁迫对杨树多酚氧化酶的影响

确定了杨树多酚氧化酶(PPO)测定的最佳条件为pH=4.0,温度5～30℃,时间1 min。利用试验得到的反应最适条件进一步研究了戊唑醇、多菌灵、甲胺基阿维菌素苯甲酸盐(甲维盐)和阿维菌素4种农药对杨树PPO活性的影响。结果表明:不同的药剂对杨树PPO的影响不同,200和400 mg/L戊唑醇可诱导杨树PPO活性升高;100、200和400 mg/L多菌灵对杨树PPO活性升高具有明显的诱导作用;400 mg/L甲维盐对杨树PPO活性升高具有诱导作用;400和800 mg/L阿维菌素能够诱导杨树PPO活性升高。     

新疆马乳葡萄中多酚氧化酶性质的研究

采用分光光度法,研究了不同pH值、温度和底物浓度对新疆马乳葡萄多酚氧化酶的活力的影响,利用高压液相色谱法对新疆马乳葡萄中的酚类物质进行了定性分析。结果表明,PPO的最适pH值为6.0,最适温度为19℃,在该条件测得Km=14.5 mmol/L,Vm=1.380 D/min。马乳葡萄中酚类物质以绿原酸的含量最多。     

朊圆酵母尿酸酶的基本特性研究

研究了尿酸酶分离纯化条件和pH、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对尿酸酶酶促反应速度的影响.研究结果表明,用Triton X-100及巯基乙醇处理细胞悬液(pH 8.5),再用超声波处理破碎细胞效果最佳.硫酸铵沉淀尿酸酶的最佳浓度为75%.用Phenyl-Sepharose CL-4B疏水层析和Xanthine-agarose亲和层析两步纯化步骤可获得理想纯度的酶制剂.在一定的条件下,尿酸酶的最适pH和酸碱稳定pH范围分别为8.5和5.0~12.最适温度为37℃;热稳定性较好,在50℃处理30 min时     

蓝圆鲹骨骼肌GPI的纯化及其对肌原纤维降解的抑制

通过硫酸铵分级沉淀、Q-Sepharose阴离子交换层析和SP-Sepharose阳离子交换层析等方法,从蓝圆鲹骨骼肌中分离纯化得到葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI).SDS-PAGE结果显示,GPI分子质量约为56 ku;Western-blot分析显示,纯化的蛋白质与抗白姑鱼GPI多克隆抗体有很强的阳性反应,表明其为GPI;GPI的最适pH值和最适温度分别为8.0和40℃;GPI能有效抑制蓝圆鲹肌原纤维蛋白在55℃下的自身降解,且随着GPI添加浓度的增加,肌原纤维蛋白的降解逐渐受到抑制,提示GPI可用于鱼糜制品生产以提高产品的凝胶强度.     

灰绿曲霉产纤维素酶的研究

灰绿曲霉(Aspergillus glaucus)发酵液通过硫酸铵盐析、Sephadex G-100分子筛、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱和Phenyl Sepharose Fast Flow疏水层析,分离纯化一种外切葡聚糖酶(CBH)和一种内切葡聚糖酶(EG).通过SDS-PAGE和凝胶柱层析法测定分子质量表明:CBH全酶分子质量为71 ku,由两个分子质量为35 ku的同型亚基组成;EG为单体蛋白,全酶分子质量为32 ku.酶学性质研究表明:CBH催化pNPC的最适pH为6.0,最适温度为55 ℃,酶活在pH 5.0～8.0 区间和温度低于55 ℃时稳定;EG催化CMC-Na的最适pH为4.0,最适温度为50 ℃,酶活在pH 3.5～7.5区间和温度低于65 ℃时稳定.Na+、K+、Ba2+、Mg2+以及NO-3和SO2-4对CBH和EG酶活均无影响;Ca2+和Mn2+对CBH有激活作用,Fe2+和Mn2+对EG有激活作用,而Zn2+、Cd2+和Cu2+对CBH和EG均有不同程度的抑制效应.酶动力学分析表明:CBH催化pNPC水解的米氏常数Km值为1.4 mmol/L(pH 6.0,55 ℃),EG催化CMC-Na水解的米氏常数Km值为5.0 mg/mL(pH 4.0,50 ℃).     

产朊假丝酵母(Candida utilis)尿酸酶的基本特性

产朊假丝酵母尿酸酶通过由DEAE-sepharose和Xanthine-agarose等层析纯化.纯化酶经SDS-PAGE显示单一蛋白带,HPLC显示纯度为97.5%.其相对分子质量为127 kDa,变性SDS-PAGE表明该酶的表观分子质量为33 kDa.该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,最适pH为8.5,最适温度为40.0℃.在最适条件下测得其Km为35.0 μmol/L.某些金属离子对酶活性的研究结果表明,Co3 ,Pb2 ,Mn2 及EDTA,NEMI对尿酸酶活性有抑制作用,Mg2 ,Triton X-100对尿酸酶活性略有激活作用.     

黑曲霉糖化酶的纯化及特性鉴定

采用硫酸铵高饱和度一步沉淀,Sephadex G-25脱盐,DEAE—Toyopearl离子交换层析,Sepharose S—100 HR凝胶过滤法,从黑曲霉糖化酶粗酶液中纯化出电泳均一的糖化酶。其分子量为73～75Kd,等电点为pH3.3,最适pH为4.2,最适反应温度为60℃,对可溶性淀粉的K_m值为7.56。该糖化酶的含糖量为17.9％,此外还测定了其氨基酸组成及含量。     

微波对没食子酸和PPO相互作用特性的影响

为了明确没食子酸和多酚氧化酶(PPO)相互作用的分子机制及微波对其相互作用的影响,通过酶活性分析、荧光光谱、紫外光谱和清除自由基等方法进行了分析。结果表明:没食子酸和PPO体系最佳浓度比为50,pH为6.8,温度为50℃。没食子酸与PPO相互作用的结合常数随温度升高而增大,结合位点数约为2,属于静态淬灭、自发进行反应,主要作用力为疏水作用力。经微波辐射后,没食子酸与PPO体系发生规律性的变化,使PPO构象、酶活性和清除DPPH自由基发生变化。