嗜水气单胞菌的分离培养及鉴定

从患腹水病褐牙鲆体内分离致病菌,通过生理生化鉴定方法对该菌进行了鉴定.根据Genbank 上报道的嗜水气单胞菌标准株的16s rDNA序列以及致病性嗜水气单胞菌所含有的气溶素(aer)基因没汁了2对引物,对所分离到的2株疑似菌以及3株标准株进行PCR扩增,均能够扩增出目的条带,经测序后,该菌的16s rDNA的序列、aer序列与标准株同源性分别达到99.8%和95%,与常规细菌鉴定方法所得结果一致,证明该菌为嗜水气单胞菌.     

嗜水气单胞菌感染美洲鳗鲡的病理观察

用嗜水气单胞菌人工感染美洲鳗鲡(Anguilla rostrata),采集死亡或濒死鳗鲡的心脏、肝脏、肾脏和脾脏,通过病理组织切片染色观察其病理变化,从组织病理学角度研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)对美洲鳗鲡的致病性.结果表明,美洲鳗鲡感染嗜水气单胞菌后注射部位出现溃疡,其组织病理变化主要见于肾脏,表现为肾小球毛细血管肿胀,肾小囊囊腔狭窄;肾间质出血,有较多的炎性细胞浸润;肾小管变性崩解,上皮细胞肿胀,颗粒或水泡变性,大部分上皮细胞脱落进入管腔,管腔内有蛋白管型和细胞碎片.肝脏弥散性出血,肝细胞水肿变圆,空泡变性,部分肝细胞溶解、消失;肝中央静脉扩张,充盈红细胞;肝血窦瘀血,肝组织间含铁血黄素沉着.脾淋巴细胞明显减少,白髓几乎消失;被膜结缔组织增厚、出血;脾炎性水肿,部分实质细胞坏死,出现许多网孔;脾间质小动脉管壁严重水肿增厚.心肌纤维出现不同程度的颗粒变性,变性纤维浑浊肿胀.本研究结果为美洲鳗鲡感染嗜水气单胞菌后的病理诊断及其免疫防治提供了参考依据.     

嗜水气单胞菌噬菌体的分离与性质研究

本文自中华鳖养殖水体中成功分离得到水产常见致病菌——嗜水气单胞菌的噬菌体,并对其理化性质进行了研究。结果表明,该噬菌体对碱性环境具有抗性,但对酸性环境敏感,pH<5时几乎无噬菌斑形成;与宿主菌的吸附时间大约为20 min;对紫外辐射敏感,20 s的紫外照射便使大量的噬菌体死亡;对高温敏感,超过50℃时,噬菌体便失去活性。     

鳗鲡肠道中嗜水气单胞菌的拮抗菌筛选

从鳗鲡肠道中分离到643株细菌,用点种法筛选出65株病原性嗜水气单胞菌的拮抗菌,研究拮抗效果最好的14株拮抗菌的抗菌谱和生长曲线及其与病原性嗜水气单胞菌的共凝集作用.研究结果显示:NAC琼脂培养基筛选的2株拮抗菌(Na 3-38和Nb 3-15)对7株指示菌均有较强的拮抗作用,Aa 3-22和Mb 3-7对7株指示菌中的5株有拮抗效果;除Na 3-38和Nb 3-15以外,其余12株的生长系数均大于嗜水气单胞菌;11株拮抗菌(Na 3-38、Nb 3-15、Ab 2-55、Ab 2-77、Ab 1-3、Aa 3-22、Aa 3-67、Mb 1-4、Mb 2-10、Mb 3-7和Mb 3-27)和嗜水气单胞菌的共凝集率大于10%.这表明:Aa 3-22和Mb 3-7在抗菌谱和生长曲线及其与病原性嗜水气单胞菌的共凝集作用等方面都适合作为益生菌.     

双重PCR法快速检测欧鳗鲡嗜水气单胞菌

采用已知的嗜水气单胞菌编码溶血素(Hemolysin)和外膜蛋白(Ompts)的基因序列为目的基因,依据其保守序列设计两对相应引物,用双重PCR方法检测了32株从发病欧鳗鲡分离的细菌,将检测结果与试剂盒快速生化鉴定结果进行比较.以嗜水气单胞菌为阳性对照,以大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞菌、鳗弧菌、溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌为阴性对照检测了嗜水气单胞菌溶血素与外膜蛋白基因的特异性.结果表明:被检测的32株欧鳗鲡致病菌中,检测到的4株既有溶血素基因又有外膜蛋白基因的细菌,其生化鉴定结果全部为嗜水气单胞菌,而仅具有外膜蛋白基因的13株细菌中只有5株生化鉴定结果为嗜水气单胞菌.证明双重PCR法可用于快速检测部分嗜水气单胞菌.     

超分支滚环扩增法检测美洲鳗鲡嗜水气单胞菌

建立了基于锁式探针的超分支滚环扩增检测嗜水气单胞菌的新方法.根据嗜水气单胞菌ARE基因上的一段高保守基因序列,设计锁式探针和对应的扩增引物,并优化了反应条件.探针在T4 DNA连接酶作用下,16℃连接1 h、63℃扩增1 h,其扩增产物电泳后得到明显条带.在8种水产养殖病原菌中,只有嗜水气单胞菌可以特异性检出,并且特异...     

灭活嗜水气单胞菌菌苗免疫巴西彩龟研究

选择对巴西彩龟毒力最强的嗜水气单胞菌菌株(98037),扩大培养制成灭活福尔马林菌苗,分别对巴西彩龟进行注射和浸泡实验.经过对吞噬细胞吞噬活性、血清抗体效价的检测和攻毒实验,结果表明,受免疫组各项指标均明显高于对照组,免疫保护力达到81%以上,其中浸泡组各项指标略低于注射组.     

嗜水气单胞菌的研究进展

简要回顾和总结了气单胞菌的分布、分类地位、分离鉴定和生长条件等方面的研究情况,并概述嗜水气单胞菌的外膜蛋白(OMP)、胞外分泌物(ECP)等致病因子、诊断技术及疫苗开发方面新的研究成果。     

嗜水气单胞菌的研究进展

回顾了嗜水气单胞菌的生物学性状、血清型、致病性以及致病机理的研究情况,并概述了嗜水气单胞菌的致病毒力因子和诊断检测技术方面的研究情况及新的研究进展.     

嗜水气单胞菌毒力与毒力基因分布的相关性

采用PCR扩增的方法对9株鱼源嗜水气单胞菌AEROM ONAS HYDROPHILA中的气溶素基因(AERA)、溶血素基因(HLYA)和丝氨酸蛋白酶基因(AHPA)进行了扩增。结果表明,6/9的A.HYDROPHILA中存在AERA基因,8/9的A.HYDROPHILA中存在HLYA基因,而在7/9的A.HYDROPHILA中检测到AHPA基因。通过比较基因检测的结果与嗜水气单胞菌对鲫鱼的致病性,发现AHPA阴性菌株是无毒株,强毒株都呈AERA HLYA AHPA 基因型。AERA HLYA AHPA 基因型是致病性嗜水气单胞菌主要的基因型。本研究首次发现AHPA阳性的嗜水气单胞菌皆为毒力菌株,并且发现AERA和AHPA基因存在相关性,探讨了嗜水气单胞菌致病性与毒力基因分布的关系。     

中华鳖嗜水气单胞菌病的研究

概述了由嗜水气单胞菌所引起中华鳖的各种疾病、病理症状、致病原因和机理,以及疾病防治的研究。     

嗜水气单胞菌感染对美洲鳗鲡血液和生化指标的影响

为研究自发病美洲鳗鲡分离的嗜水气单胞菌对该鱼的致病性,试验将60尾美洲鳗鲡平均分为对照组、浸泡组和注射组3组,3组鳗鲡分别注射PBS、以1.0×107cfu/mL的嗜水气单胞菌浸泡和1.0×108cfu/mL嗜水气单胞菌注射感染.各组鳗鲡分别于处理后6 h和30 h断尾采血并分离抗凝血和血清,抗凝血由血常规检测分析仪检测7项血液指标,血清由全自动生化分析仪检测13项与免疫相关的生化指标,数据用SAS软件进行统计学分析.结果表明,鳗鲡注射感染后6 h,与浸泡组相比,血清谷草转氨酶(AST)与谷丙转氨酶(ALT)的比值显著(P0.05)升高,其他指标在三组间均无显著(P0.05)差异.鳗鲡注射感染后30 h,同对照组和浸泡组相比,血清总蛋白和血糖极显著(P0.01)下降,Na+和Cl-浓度显著(P0.05)下降,而AST和ALT则均极显著(P0.01)上升.     

水体嗜水气单胞菌的监测

首先探索了快速检测嗜水气单胸的微生物学培养法和免疫学方法，进而利用所建方法对５８０余个不同来源的样品进行实测，考核其特异性和敏感性，监测鳖池水的细菌数量变化动态，结合疫情建立菌情－疫情关系模型。     

我国嗜水气单胞菌感染研究概况

主要从嗜水气单胞菌感染的发现、人的嗜水气单胞菌感染、动物的嗜水气单胞菌感染、诊断要点及防控等方面对我国嗜水气单胞菌感染进行了综述。     

牛蛙嗜水气单胞菌病的病原研究

针对厦门市同安区某牛蛙养殖场中出现的后腿肌肉变成淡黄绿色、肝肿大呈深紫红色、肾脏充血呈鲜红色为主要症状的患病牛蛙，进行了细菌分离、培养、人工感染、生理生化、药物敏感等试验研究，结果确认引起该病的病原菌为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)，药敏试验结果表明，该病原菌对环丙沙星、诺氟沙星、庆大霉素等高度敏感，而对氯霉素、青霉素钠、复方SMZ等不敏感。     

嗜水气单胞菌发酵条件的优化研究

研究了嗜水气单胞菌的最佳培养条件,通过单因子实验得到该菌株的最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为大豆蛋白胨,初始pH值为7.5,最适生长温度和时间为28℃、36h,最佳氯化钠浓度为6.84mg/mL;在其他培养条件不变的情况下,通过对大豆蛋白胨、葡萄糖、K2HPO4浓度、初始pH值做四因子三水平的正交实验,得到培养基最佳组合为:葡萄糖10 g/L、大豆蛋白胨10 g/L、K2HPO44.56mg/mL、初始pH值7.5.研究结果为嗜水气单胞菌规模化发酵培养奠定了基础.     

青石斑鱼源嗜水气单胞菌的鉴定及耐药性分析

为鉴定从青石斑鱼肝脏分离到的致病菌ZPY-1和探讨其耐药性,对其进行菌种鉴定、药敏性分析和传代诱导.结果显示:ZPY-1为革兰氏阴性,具有典型的单细胞微生物生长曲线;生理生化特性和16S rRNA鉴定判断ZPY-1为嗜水气单胞菌.在14种常用渔业抗菌药物中,嗜水气单胞菌ZPY-1对氨苄青霉素、强力霉素、阿奇霉素、磺胺间甲氧嘧啶和磺胺嘧啶高度耐药,对氟苯尼考、诺氟沙星、磺胺甲恶唑较为敏感;但是对氟苯尼考、诺氟沙星、磺胺甲恶唑的敏感性,却随着ZPY-1分别在这3种抗菌药物低剂量连续诱导下失去了.本研究将为石斑鱼细菌性疾病的防控提供一定的理论依据.     

嗜水气单胞菌HEC毒素苗对鲫鱼的免疫效果的初步研究

用嗜水气单胞菌强毒株BSK－10和TPS－30的HEC毒素苗分别免疫鲫鱼,以不同嗜水气单胞菌菌株攻毒,测定免疫保护率,结果显示：BSK－10HEC毒素苗对同型菌株攻击保护率达90％－100％,对异型菌株攻击的保护无效,为0－20％;TPS－30HEC毒素苗对,同源菌株攻击的保护率达100％,对同型菌的保护率为75．5％－100％,对异型菌株的保护率为44．4％－100％,经统计检验,TPS－30毒素苗对10株攻毒株的保护除1株无效外,其余均效果极显著或显著,对血清型不同的菌株的免疫保护率没有区别。     

基于AhsA蛋白的嗜水气单胞菌特异性抗体的制备与鉴定

选取嗜水气单胞菌表面特异性抗原蛋白AhsA,构建了pET-28a(+)-AhsA表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行表达,利用Ni-NTA亲和层析、凝胶过滤层析等蛋白纯化方法进行纯化。重组蛋白表达效果较好,浓度可达10 mg·mL^-1,纯度可达90%以上,符合制备多克隆抗体的免疫原标准。利用Western Blot技术将AhsA抗体特定识别免疫原蛋白,结果表明该抗体能够特异性识别免疫原蛋白AhsA,而对于牛血清蛋白却不能发生免疫应答,表明该抗体具有一定的特异性且AhsA蛋白具有很好的免疫原性。同时通过检测验证了AhsA蛋白抗体能够特异性检测嗜水气单胞菌,将为水产品质量控制及临床检测嗜水气单胞菌可提供新的技术。