钾通道阻断剂对人乳腺上皮细胞MOF10A增殖的影响

探讨电压门控钾离子通道在乳腺上皮细胞增殖过程中的作用．通过MTT法检测了钾通道阻断剂TEA、电压门控钾通道阻断剂4-AP对人乳腺上皮细胞MCF10A增殖的影响并与乳腺癌细胞MCF7作了比较,免疫印迹方法观察了电压门控钾通道Kv1．2、Kv1．5的表达．研究发现,两种钾离子通道阻断剂对人乳腺细胞和乳腺癌细胞增殖的影响均呈剂量依赖性关系．经5mmol／LTEA处理72h后,MCF10A细胞的生长抑制率为21．67％,而MCF7细胞的生长抑制率为41．36％;5mmol／L 4-AP处理72h后,MCF10A的生长抑制率为29．24％,而MCF7细胞的生长抑制率为40．24％．Kv1．2在MCF10A和MCF7中表达没有变化．而Kv1．5在MCF10A细胞中的表达明显高于MCF7细胞．提示电压门控钾离子通道在乳腺细胞的增殖中起重要作用,其中Kv1．5可能和乳腺细胞的转化密切相关．     

碳源饥饿对癌细胞和正常细胞增殖的影响

研究了共培养条件下碳源饥饿对癌细胞和正常细胞形态、生长和凋亡的影响.采用细胞体外共培养的方法,实验分4组:对照组(25 mmol/L葡萄糖)及5,1和0 mmol/L葡萄糖组,分别处理共培养条件下的HeLa癌细胞和人脐带正常细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态与生长,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双重荧光染色检测凋亡细胞的形态及数量.结果表明:对照组HeLa癌细胞和人脐带正常细胞都分布均匀,贴壁性好,形态饱满,多呈规则的梭形或多角形,折光性好,AO/EB双染绿色荧光分布均匀;实验组糖浓度越低,细胞存活时间越短,细胞收缩变圆并逐渐凋亡,AO/EB双染细胞由绿色荧光逐渐变为橙黄色荧光;相同糖浓度条件下人脐带正常细胞比HeLa癌细胞存活时间更长.说明碳源饥饿使癌细胞先于正常细胞死亡.     

nm23-H1基因对乳腺癌细胞MCF-7S增殖及移动特性的影响

目的：探讨nm23—H1基因转染乳腺癌细胞后对其增殖和转移能力的影响。方法：用人nm23—H1基因与真核表达质粒pcDNA3．1(—)构建成重组表达质粒pcDNA3．1—NMHl，转染人乳腺癌细胞MCF—7S，经G418筛选4周后，筛选出稳定表达nm23—H1的细胞株，绘制其生长曲线，检测其增殖、移动能力，用SPSS统计软件处理实验数据，分析nm23—H1基因对乳腺癌细胞的作用。结果：与对照组相比，转染nm23—H1基因的MCF—7S细胞的对数生长期延长，细胞增殖速度减慢，移动距离缩短，克隆形成率降低。结论：nm23—H1基因在乳腺癌细胞的体外实验中有抑制癌细胞生长、增殖、转移能力的作用。     

基于Potts模型的恶性肿瘤生长的二维随机模拟

使用热力学方法建立了一个癌变细胞在正常细胞组织中生长的计算机仿真模型．初始细胞模型采用二维离散化结构，设置一序列的调控因子，以模拟不同条件下的不同类型的癌细胞的生长过程，并考察了调控因子对癌细胞生长的影响．最后，通过加入细胞增殖机制，扩展了该模型．     

3-羟基丁酸对HeLa癌细胞生长与凋亡的影响

研究3-羟基丁酸对HeLa癌细胞生长与凋亡的影响.采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力;AO/EB荧光染色观察细胞凋亡与坏死的形态学变化;单细胞凝胶电泳检测细胞DNA的损伤;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测凋亡蛋白的表达.结果表明:3-羟基丁酸能够抑制HeLa癌细胞增殖;使HeLa癌细胞DNA受到损伤;通过caspase依赖性细胞凋亡途径诱导HeLa癌细胞凋亡;在HeLa癌细胞与人脐带正常细胞共培养条件下,3-羟基丁酸诱导HeLa癌细胞先于人脐带正常细胞凋亡.实验为肿瘤的生酮饮食疗法和酮体疗法提供了理论依据.     

表皮生长因子效应评价细胞模型的建立

为了筛选表皮生长因子(EGF)信号通路的未知调控分子,利用人正常乳腺上皮细胞系MCF10A建立了EGF效应评价模型,包括细胞增殖、迁移以及细胞周期的进程等。结果显示,EGF能有效促进MCF10A细胞的增殖。饥饿同步化后,EGF能促进细胞从G1期进入S期,开始DNA的合成。此外,Transwell实验显示EGF能明显促进MCF10A细胞的迁移。     

癌细胞在40度下消灭

日本国立预防卫生研究所和庆応大学医学部的研究人员使用人体子宫癌细胞进行实验结果,已弄清人体的癌细胞与正常细胞相比在40度左右的高温下具有特别弱的性能,且于11月14日在大阪召开的日本细胞生物学会上发表。据已发表的内容,在低温下的癌细胞达到34度以下时繁殖速度减慢,即使在32度下     

CdTe量子点对人乳腺癌细胞MCF 7/ADM的化学增敏作用及其机制研究

利用纳米材料CdTe量子点作为增敏剂, 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力的实验表明CdTe量子点增强了阿霉素对于MCF 7/ADM的毒性, 而对非耐药的MCF 7无增敏作用. 然后利用免疫印迹法和免疫荧光染色法检测发现CdTe量子点提高了MCF 7/ADM细胞的自噬水平, 且这种自噬水平的上调与化学增敏效应是相关的, 以上结果提示CdTe量子点通过诱导MCF 7/ADM细胞发生自噬, 增强耐药性细胞对DOX毒性的敏感性.     

青蒿琥酯-转铁蛋白复合物抑制癌细胞增殖的初步研究

采用简单、快捷的药物配体自识别的方式制备了青蒿琥酯（ATS）-转铁蛋白（Tf）复合物（ATS—Tf）．紫外一可见光谱分析表明：在正常生理条件（pH=7．4）下,ATS与Tf易自组装形成稳定的ATS—Tf复合物（结合常数群为3．4×10^5L／m01）;而在酸性条件（pH=5．5）下,结合能力相对变弱（Kf=1．7×10^4L／m01）,ATS易与Tf分离,具有良好的pH敏感性．同时研究了该复合物对细胞增殖的抑制作用,结果表明：ATS—Tf复合物对正常肝细胞L-02的毒性较低,而对人肺腺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2和胃癌细胞MGC-803的增殖具有显著的抑制作用,表现出良好的靶向杀伤性,有望开发成新型靶向抗肿瘤药物．液相色谱法证实Tf增强了癌细胞对ATS的摄取能力．进一步通过分子对接模拟和荧光光谱分析对ATS与Tf的结合模式和机理进行了研究,提出了ATS—Tf靶向抑制癌细胞增殖的可能机理．研究为青蒿琥酯靶向抗肿瘤药物的研发提供了理论支持和实验依据,在癌症治疗领域具有良好的应用前景．     

UFC1基因在乳腺癌细胞中的表达及意义

目的：泛素结合酶UFC1是一个新鉴定的类似泛素结合酶E2的基因,探讨UFC1基因在不同类型的乳腺癌细胞中是否表达及表达量情况.方法：分别应用RT-PCR法、Western-blot法检测分别检测一系列的乳腺细胞系MCF7、HBL100、MDA-MB231和MDA-MB-453中UFC1基因的表达水平,并进行比较.结果：在正常的HBL100乳腺细胞系中的表达最低,而在乳腺癌细胞系MCF7、MDA-MB231、MDA-MB-453中的表达明显增强,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论：UFC1在乳腺细胞系中的差异表达的结果为将UFC1作为新的靶分子引入乳腺癌的临床预防和治疗提供实验依据.     

Hiwi基因在耐药MCF-7/ADM乳腺癌细胞株中的表达

目的探讨Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞和非耐药MCF-7细胞的表达.方法应用实时定量PCR与Western blot技术进行Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞和非耐药MCF-7细胞株表达水平检测.结果 Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞中的表达明显高于正常乳腺细胞(P0.01)及非耐药MCF-7细胞(P0.05).结论 Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞株的高表达为耐药乳腺癌细胞的靶向治疗指出新的研究方向,对乳腺癌治疗预后评估具有临床指导性.     

建立人输卵管上皮细胞无血清培养

人输卵管上皮细胞（HOEC）可以体外较长时间无血清培养,DMEM／F12培养液的培养效果优于Ham’sF10,在加有多种因子和胎球蛋白的培养液中,HOEC可贴壁生长,生长能力达到合质量分数15％FCS的对照组的30％～40％,一般可传代2次,最长培养可维持38d,细胞形态与有血清培养差别不大,虽然无血清培养HOEC的生长速度、密度、传代成功率远不及有血清培养,但能抑制成纤维细胞生长,维持较纯的上皮细胞。     

Scatter factor is a fibroblast-derived modulator of epithelial cell mobility

Various factors are known to regulate cell growth and differentiation, but less is known of agents which affect movement and positioning, particularly in epithelial-mesenchymal interactions. Cultured human embryo fibroblasts release a protein with a relative molecular mass (Mr) of approximately 50,000 (50K) that affects epithelial cells by causing a disruption of junctions, an increase in local motility and a scattering of contiguous sheets of cells. To investigate specificity, a range of cells has been examined for the ability to produce the factor and for sensitivity to its action. Most freshly isolated normal epithelia and epithelia from cell lines of normal tissue, but not epithelia from tumour cell lines or fibroblasts, were sensitive to scatter factor. In contrast, production of the factor, as identified by activity and by chromatography, was restricted to embryonic fibroblasts and certain variants of 3T3 and BHK21 cells and their transformed derivatives. We conclude that the scatter factor is a paracrine effector of epithelial-mesenchymal interaction, which affects the intercellular connections and mobility of normal epithelial cells. The factor might be involved in epithelial migration, such as occurs in embryogenesis or wound healing.     

α-生育酚琥珀酸酯对乳腺癌细胞中IAPs家族蛋白表达的影响

目的检测α-生育酚琥珀酸酯(-αTOS)对MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖以及细胞中凋亡抑制蛋白家族(IAPs)表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定-αTOS对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-453增殖的抑制作用,细胞分别接种于96孔板后用浓度为51、0、255、0、75、1001、25和150μmol/L的-αTOS处理48 h后检测;细胞经50μmol/L、100μmol/L-αTOS处理122、4、48 h后,用RT-PCR的方法检测细胞内c-IAP1和c-IAP2 mRNA的转录水平;用Western Blot的方法检测c-IAP1和c-IAP2的蛋白质表达水平。结果-αTOS对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-453有显著的增殖抑制作用,并表现为剂量依赖性,-αTOS对MCF7和MDA-MB-453的IC50值(细胞半数死亡的药物浓度)分别为132μmol/L和74μmol/L;RT-PCR结果显示,-αTOS使两个细胞系的c-IAP1的转录水平显著下降,且呈时间依赖性;但对c-IAP2的转录水平没有明显影响;Western Blot的结果发现-αTOS使得这两种细胞系的c-IAP1蛋白质翻译水平也呈下降趋势,该结果与mRNA转录水平下降相一致,对c-IAP2蛋白质的表达几乎无影响。因此,α-TOS可能通过抑制c-IAP1蛋白的表达而抑制MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞的生长增值,a-TOS有望开发成为新的预防和治疗乳腺癌的有效药物。     

腺病毒介导MTS1的抑癌作用

人多肿瘤抑制因子（MTS1）是一个抑瘤基因,在许多原发性肿瘤及细胞系中都发现了它的突变,有潜在应用价值。由于腺病毒独特的性质,它介导的肿瘤基因置换疗法,受到了愈来愈多的应用与关注。人癌胚抗原启动子能指导组织特异性表达。将癌胚抗原启动子置于MTS1基因上游,并在下游加poly A化信号,通过穿梭质粒pΔE1SP1A在人胚肾细胞HEK 293中与腺病毒载体pBHG11进行同源重组,插入腺病毒E1区。获得的重组病毒粒子作用于人乳腺癌细胞系MCF7,初步表明重组腺病毒能抑制MCF7的生长。     

抑癌基因p27在肿瘤细胞MCF7中的表达

抑癌基因p27是一个细胞周期依赖性激酶抑制子CKI(CDK inhibitor),对细胞周期起着负调控的作用,将p27基因克隆到表达载体pcDNA,转染到肿瘤细胞MCF7中,筛选到稳定表达株．p27基因的过量表达确实对肿瘤细胞的生长产生了抑制作用,并且引发了部分肿瘤细胞的凋亡．     

糖尿病基础上的脓毒症模型

摘要: 目的观察糖尿病( DM) 对脓毒症炎症反应的影响。方法高糖高脂饮食喂养联合链脲佐菌素( STZ) 制备糖尿病大鼠模型,在此基础上通过盲肠结扎穿孔术( CLP) 建立脓毒症模型。留取心脏组织和全血标本,ELISA 检测炎症因子TNF-α,中性粒细胞百分比计数,观察心脏组织糖原染色。结果( 1) 糖尿病模型: 与正常大鼠相比,糖尿病大鼠出现多饮、多食、多尿、体质量减轻的典型“三多一少”症状,血糖和体质量显著升高( P ＜ 0. 001) ; 心肌糖原染色结果显示: 正常大鼠心肌细胞核染色,间质细胞及血管无染色; 糖尿病大鼠心肌细胞和心肌微血管均染色且血管壁增厚,血管周围细胞核明显深染。( 2) 糖尿病基础上的脓毒症模型,造模后大鼠出现异常的行为活动和精神状态; Normal-CLP 组血清TNF-α 值显著高于Normal-Control 组( P ＜ 0. 01) ,明显高于Normal-Sham 组( P ＜ 0. 05) 。DM-CLP 组血清TNF-α 值显著高于DM-Control 组( P ＜ 0. 01) ,明显高于DM-Sham 组( P ＜ 0. 05) ; Normal-CLP 组外周血中性粒细胞百分比显著高于Normal-Control 组和Normal-Sham 组( P ＜ 0. 01) ,DM-CLP 组外周血中性粒细胞百分比显著高于DM-Control 组和DM-Sham 组( P ＜ 0. 01) 。结论正常大鼠和DM 大鼠对脓毒症的炎症反应是不一致的,这可能与正常大鼠和DM 大鼠体内免疫状态相关。     

桂枝茯苓汤含药血清对子宫内膜癌细胞的影响

为探究桂枝茯苓汤含药血清是否通过调控3-磷酸肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT),参与调控子宫内膜癌细胞增殖、上皮-间质转化(EMT)与凋亡,将72只SD大鼠分为健康组、桂枝茯苓汤高剂量组、桂枝茯苓汤中剂量组、桂枝茯苓汤低剂量组和奥沙利铂组,对各组大鼠灌胃相应剂量药物,从大鼠的腹主动脉取血制备含药血清,培养子宫内膜癌HEC-B细胞,分为对照组、含药血清高剂量组、含药血清中剂量组、含药血清低剂量组、奥沙利铂血清组、含药血清高剂量+通路激活剂组,向各组细胞培养基中加入相应血清及试剂.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western Blot法检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平及PI3K/AKT通路相关蛋白磷酸化水平.结果表明：与对照组相比,含药血清高剂量组、含药血清中剂量组、含药血清低剂量组的细胞生存率、Vimentin和N-cadherin蛋白表达量、PI3K和AKT磷酸化程度均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadh...     

Cell transformation by the superoxide-generating oxidase Mox1.

Reactive oxygen species (ROS) generated in some non-phagocytic cells are implicated in mitogenic signalling and cancer. Many cancer cells show increased production of ROS, and normal cells exposed to hydrogen peroxide or superoxide show increased proliferation and express growth-related genes. ROS are generated in response to growth factors, and may affect cell growth, for example in vascular smooth-muscle cells. Increased ROS in Ras-transformed fibroblasts correlates with increased mitogenic rate. Here we describe the cloning of mox1, which encodes a homologue of the catalytic subunit of the superoxide-generating NADPH oxidase of phagocytes, gp91phox. mox1 messenger RNA is expressed in colon, prostate, uterus and vascular smooth muscle, but not in peripheral blood leukocytes. In smooth-muscle cells, platelet-derived growth factor induces mox1 mRNA production, while antisense mox1 mRNA decreases superoxide generation and serum-stimulated growth. Overexpression of mox1 in NIH3T3 cells increases superoxide generation and cell growth. Cells expressing mox1 have a transformed appearance, show anchorage-independent growth and produce tumours in athymic mice. These data link ROS production by Mox1 to growth control in non-phagocytic cells.