用改进的酚-氯仿法提取榕小蜂基因组DNA及SRAP分析

以传粉榕小蜂为材料,用改进的酚-氯仿法对不同保存条件下的样品提取基因组DNA,并进行分光光度、琼脂糖凝胶电泳、SRAP扩增等方法的鉴定.结果表明:改进的酚-氯仿法均可从4种保存条件下的样品中提取出DNA,新鲜样品和体积分数95％乙醇固定样品提取效果比其他2组提取效果好.选择体积分数95％乙醇固定所提取的DNA为模板进行...     

紫菜叶状体DNA的提取方法

为得到适合不同试验的高纯度紫菜DNA,对紫菜叶状体DNA的3种提取方法进行了分析比较.结果显示:酶解法提取的DNA样品质量最高,但要求样品量较多;改良的CTAB法提取的DNA样品多糖含量少,完全可以满足通常的遗传操作的需要,且需要样品量较少;常规的CTAB法提取效果最差.     

发状念珠藻胞外多糖对小鼠免疫活性的影响

采用 BG-11培养液,悬浮培养发状念珠藻,提取发状念珠藻胞外多糖。分别以发状念珠藻胞外多糖25 mg／kg、50 mg／kg、100 mg／kg这3个剂量灌胃小鼠,连续两周后,皮下注射氢化可的松一周,处死小鼠。测定小鼠脏器指数、碳粒廓清指数、迟发型变态反应和脾脏抗体生成细胞数,分析发状念珠藻胞外多糖的体内免疫活性。研究结果表明：与模型对照组相比,多糖组小鼠的脏器指数、廓清指数、吞噬指数及足跖增厚值都显著增大,脾脏 B细胞分泌抗体能力显著增强。发状念珠藻胞外多糖具有增强小鼠免疫功能的作用。     

红碱淖遗鸥血液基因组DNA提取方法的比较研究

采用酚-氯仿法和改良Miller盐析法从红碱淖遗鸥冷冻血液样品中提取基因组DNA,以筛选遗鸥冷冻血液DNA的最佳提取方法.结果显示：酚-氯仿法琼脂糖凝胶电泳DNA样品亮度和清晰度较高,条带较粗,纯度较高;而改良Miller盐析法提取基因组DNA,获得率较低,并且难以去除杂质;酚-氯仿法提取时,酶解16 h比酶解10 h的DNA提取效果好,说明在一定时间范围内,延长酶解时间可有效地提高DNA提取效果.上述结果提示,酚-氯仿法对遗鸥冷冻血液基因组DNA提取的效果优于改良Miller盐析法.     

角倍蚜总RNA提取方法的比较及优化

采用Trizol法及试剂盒柱提法提取角倍蚜若虫及成虫总RNA,通过紫外分光光度法(OD260/OD280、OD260/OD230)及琼脂糖凝胶电泳检测,对所提取RNA的纯度、浓度及完整性进行了分析.结果表明,采用常规样品量两种方法提取的RNA均降解严重,分析认为角倍蚜富含内源性RNase.通过大幅降低样品量,优化提取步骤,缩短提取时间,有效消除了RNA降解现象.采用Trizol法获得了纯度高、完整性好的RNA样品,电泳显示清晰的28S、18S及5S三条带;试剂盒柱提法获得的RNA呈现较为特殊的带型,没有常规的5S条带,而在750bp～1 000bp之间有一明显条带.     

发状念珠藻中麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因的克隆和序列分析

从发状念珠藻(Nostoc flaglliforme)中克隆出麦芽寡糖基海藻糖基水解酶MTHase的基因TreZ,对该基因核苷酸序列测序表明开读框全长1848 bp,编码的蛋白质有615个氨基酸.根据基因序列预测的TreZ氨基酸序列具有MTHase的催化功能保守区.发菜TreZ和TreY与点形念珠藻(Nostoc punctiforme)的TreZ和TreY有很高的同源性.结果初步表明:可以从发状念珠藻中克隆到麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因TreZ,为进一步研究海藻糖代谢在发状念珠藻抗逆机理的工作奠定了理论和实验基础.     

薄层色谱扫描法检验口红样品

通过实验确定薄层色谱扫描法检验口红样品的条件.对收集到的不同品牌、同一品牌不同牌号、同一品牌同一牌号不同批次的口红样品,用乙醇:氯仿(1:1)进行提取,在四氯化碳:氯仿:乙酸(6:4:1)的展开剂体系中对口红样品进行展开,并用CS-9301薄层色谱扫描仪扫描.利用薄层色谱扫描法可以将不同品牌以及同一品牌不同牌号的口红样品加以区分.实验证明,确定的实验条件是切实可行的,为检验口红样品提供了一种新的方法.     

产油霉菌油脂提取方法的研究

以产油霉菌雅致小克银汉霉为例进行了前处理及油脂提取方法的研究,采用了酸热法、反复冻融法以及超声波和酶结合法破碎细胞,甲醇-氯仿提取油脂以及乙醚、石油醚索氏抽提法直接提取油脂。结果表明,超声波和酶结合使用破碎细胞,甲醇-氯仿提取油脂的效果较好;索式抽提法采用石油醚为提取剂效果较好。气相色谱-质谱联用仪分析检测油脂脂肪酸组成为棕榈酸25.10%,油酸25.17%,亚油酸20.99%,硬脂酸4.78%。     

五味子药材不同提取方法的HPLC指纹图谱分析

五味子药材分别经氯仿、甲醇、乙醇、50%乙醇、水提取和CO2超临界萃取(SFE)后得6种供试品,采用高效液相色谱(HPLC)法对其进行测定,并对4种木脂素成分进行了定量分析.结果表明该分析方法的精密度、重现性、稳定性较好,可用于五味子药材的指纹图谱测定,为其原料药材和实际应用提供质量控制依据,也为不同提取方法提供参考.     

鳜鱼基因组DNA的提取及PCR-SSCP条件的探讨

采用改良苯酚氯仿法,分别提取鳜鱼冻存血液、新鲜血液、冻存肌肉、新鲜肌肉的DNA并进行了效果比较,发现新鲜及冻存样品提取效果差异不大.以基因组DNA为模板,对鳜鱼生长激素基因第五至第六外显子进行PCR-SSCP分析,在SSCP分析过程中,对温度、电压条件进行了优化,在五组条件中,4℃、160V条件下效果最好.     

柱前衍生化-HPLC测定马氏珠母贝肉中氨基酸的含量

以邻苯二甲醛-9-芴甲基氯甲酸酯为衍生化试剂,对氨基酸进行柱前衍生,建立了35℃下,醋酸钠缓冲液、甲醇及乙腈为流动相,用Eclipse AAA氨基酸分析柱和二极管阵列检测器的氨基酸色谱分析方法,18种氨基酸在36 min内获得了较好的分离,在一定浓度范围内,氨基酸的峰面积与浓度的线性相关系数在0.990 6～0.999 8之间,相对标准偏差为1.96%～5.45%(n=5).并测定了马氏珠母贝肉蛋白中氨基酸的组成和含量.结果表明,马氏珠母贝肉蛋白中含有至少18种氨基酸,其中8种必须氨基酸总含量达39%以上,是一种优质的功能食品原料.     

氨基酸类有机物在硫酸介质中对钢的缓蚀作用

 用失重法研究了各种氨基酸在硫酸溶液中对钢的缓蚀作用.实验表明,L-半胱氨酸和DL-类半胱氨酸硫内酯盐酸盐对钢有较好的缓蚀作用.应用Langmuir吸附方程讨论了产生缓蚀作用的原因.     

反相高效液相色谱法评价烟台苹果中游离氨基酸

利用反相高效液相色谱法对烟台境内多地红富士苹果中游离氨基酸含量进行检测和分析.色谱条件为:Capcell PAK C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,3μm),以10 mmol/L磷酸氢二钠和10 mmol/L硼酸钠的缓冲溶液(pH 8.2)为流动相A,乙腈-甲醇-水(45∶45∶10,V/V/V)为流动相B,梯度洗脱,流速1.5 mL/min,外标法定量,检测波长为338 nm和262 nm.在10¹ 000 pmol/μL浓度范围内,17种氨基酸线性关系良好(R2>0.999),峰面积的精密度(RSD):1.47%1 000 pmol/μL浓度范围内,17种氨基酸线性关系良好(R2>0.999),峰面积的精密度(RSD):1.47%³.84%,回收率91%3.84%,回收率91%¹11%.8种烟台红富士苹果中游离氨基酸总量为47.0111%.8种烟台红富士苹果中游离氨基酸总量为47.0¹40.9μg/g,必需氨基酸的含量比例为6.6%140.9μg/g,必需氨基酸的含量比例为6.6%²9.5%,不同产地苹果中氨基酸含量在极差0.05水平上有显著性差异,对测定值分别进行聚类分析和主成分分析,8种不同产地的苹果样品可分为3类.     

山苍籽核仁油合成生物柴油研究

以山苍籽核仁油为原料,采用固体酸催化酯化-相转移催化酯交换反应合成生物柴油.从固体酸SO_4~2-/ZrO_2为催化剂进行酯化反应降低酸值,以十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)/NaOH为相转移催化剂进行酯交换反应,得到合成牛物柴油的优化工艺条件.研究结果表明,固体酸SO_4~(2-)/ZrO_2催化酯化反应的最佳条件为:油重4%的SO_4~(2-)/ZrO_2,醇油摩尔比为10:1,温度为68℃,反应时间为4 h,原油酸值降到2.52 mg/g:该法相对浓硫酸催化酯化法具有不需耐酸设备、催化剂易回收、无废水排放等优点;相转移催化酯交换反应的最佳条件为:温度为25℃,0.5%的十六烷基三甲基溴化铵,油重1%的NaOH,醇油摩尔比为6:1,反应15 min,原油酯交换率达到97.6%;采用相转移催化技术,反应在常温下进行,大大减少了能耗,缩短了反应时间,具有的产业化前景.     

Using specific secondary metabolites as markers to evaluate allelopathic potentials of rice varieties and individual plants

It is a key of the breeding of allelopathic rice cultivars to evaluate and screen few accessions with allelopathic traits from numerous rice accessions and individual plants. Rice varieties and individual plants with allelopathic traits demonstrated their allelopathic effects by producing and releasing specific secondary metabolites into environment. Therefore, using specific secondary metabolites as markers, the allelopathic potentials of rice varieties and individual plants could be evaluated by HPLC. The allelopathic potentials of 3000 rice accessions and some individual plants of F3 and F4 were evaluated by this method in 1 a. If these accessions and plants were evaluated by the traditional method in the field, it would take more than 10 a, furthermore, the breeding process of allelopathic rice cultivars would be directed and monitored by this method. Isolation and structural identification of specific secondary metabolites was done by LC/MS coupling ¹H and ¹³C NMR. It revealed that allelochemicals of rice tissue were glucosides of resorcinol, flavone and hydroxamic acid, and were not well-known phenolic and fatty acids in previous studies. However, these glucosides could degrade immediately into sugar, phenolic and fatty acids under microbial and acidic medium when they released into the environment.     

毛细管气象色谱法测定新药UP0044中有机溶剂的残留量

建立了测定新药UP0044中甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯、四氢呋喃、乙酸7种有机溶剂含量的方法,以确定它们在药物中的残留量和比例．实验方法采用毛细管气相色谱法,氢火焰离子检测器（FID）,以DB-624色谱柱（30m×250pm×1.4μm）对样品进行分离,采取程序升温,载气为氦气,外标法计算含量．结果显示：在各色谱条件下,7种溶剂的线性良好（R^2〉0．99）,平均回收率为90％～110％,RSD为1．2％～8．8％,最低检出限0．9×10^-8～1．69×10^-4;所测试的4批样品中除甲醇、乙醇有检出外,其他溶剂均未检出．     

冷起动时甲醇掺烧液化气发动机的甲醛和未燃甲醇排放

基于单循环燃料喷射控制策略及冷起动,在一台125mL单缸电控喷射点燃式发动机上,试验研究了LPG(液化石油气)与甲醇循环喷射量的质量比和LPG迟后甲醇喷射时刻对甲醇掺烧LPG发动机甲醛和未燃甲醇排放的影响.甲醇掺烧LPG发动机中LPG仅起辅助起动作用.试验结果表明:增大LPG与甲醇循环喷射量质量比可使甲醇掺烧LPG发动机着火性能改善,未燃甲醇排放减少,甲醛排放增多;合理控制LPG迟后甲醇喷射时刻可显著改善着火性能,减少未燃甲醇排放,而甲醛排放稍有增加;LPG迟后甲醇在曲轴转角为276°时(上止点前)喷射,缸内最大压力达4.46MPa,未燃甲醇的体积分数减小到1173×10-6.甲醇掺烧LPG发动机时起动工况的甲醛和未燃甲醇排放量随LPG与甲醇循环喷射量的质量比和LPG迟后甲醇喷射时刻的变化呈相反的变化趋势.     

犁头草抗菌活性及其有效部位研究

本实验将犁头草全草作为研究对象,采用不同方法对犁头草全草的有效成分进行提取,评价并比较各提取物的抗菌活性。并将粗提物按照极性高低分布在石油醚、乙酸乙酯和水相中,评价不同萃取相的抗菌活性。结果显示,乙醇回流法和甲醇冷浸法获得的提取物抗菌活性明显,而水煎煮得到的提取物几乎未见抗菌活性。此外,乙酸乙酯萃取相的抗菌作用要优于石油醚相,而水萃取相抗菌活性最小。甲醇冷浸法和乙醇回流法获得的乙酸乙酯萃取组对金葡菌ATCC 33591和金葡菌ATCC 43300的抗菌活性最佳,最小抑菌浓度（MIC）值达到0.3125 mg/mL,对其他细菌的MIC值在0.3125~1.25 mg/mL之间;而其他萃取组分对金葡菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌以及耐药菌的MIC值大约在1.25~5 mg/mL之间。本研究确定了犁头草具有广谱的抗菌活性,尤其对耐甲氧西林金葡菌效果较好。研究发现乙醇回流与甲醇冷浸法可用于犁头草的抗菌物质提取,且它的抗菌有效部位为乙酸乙酯萃取相。     

虎杖灌胃大鼠血尿中蒽醌类代谢物的LC-MS分析

通过检测虎杖提取物灌胃后大鼠血浆及尿液中的代谢产物, 建立一种用液相色谱 电喷雾串联质谱（LC-MS）分离鉴定复杂样品中主要蒽醌类代谢物的方法. 液相色谱条件： 色谱柱为Agilent XDB-C18（4.6 mm×250 mm, 5 μm）, 流动相为水 甲醇梯度洗脱, 柱温为25 ℃. 质谱条件： ESI离子源, 毛细管电压3.5 kV, 负
离子检出模式. 结果表明: 在大鼠灌胃虎杖提取物后的血浆样品中检测出大黄素、 大黄酚和大黄素甲醚3种代谢产物; 尿液中检测出大黄素、 大黄素葡萄糖醛酸酯、 芦荟大黄素硫酸酯和芦荟大黄素葡萄糖醛酸酯4种代谢产物.     

牛心朴子提取物对地红蝽毒杀活性的研究

以牛心朴子(Cynanchum komarovii)的水、无水乙醇和甲醇等3种溶剂的粗提物为材料,以地红蝽为测试对象,研究牛心朴子对刺吸式口器昆虫的毒杀作用.胃毒活性采用改进的药剂浸渍法,触杀活性采用微量点滴法.结果表明:(1)牛心朴子的3种粗提物对地红蝽均有较强的胃毒作用,其中,无水乙醇粗提物的毒杀效果最好,质量浓度为15 g/L时,72 h的校正死亡率达到73.3%;(2)在触杀实验中,甲醇粗提物的效果最好,质量浓度为15 g/L时,72 h的校正死亡率为83.3%,与无水乙醇粗提物触杀效果相差不大;(3)牛心朴子水粗提物的毒杀效果均低于其他2种提取物.