肠毒素大肠杆菌LT—B基因转基因马铃薯口服免疫原性研究

探讨马铃薯表达的产肠毒素大肠杆菌热敏肠毒素B亚基口服免疫原性,选择4周龄的昆明白小鼠。转基因马铃薯块茎经冷冻干燥后,研磨成粉状,以灌胃给药的方式对小鼠进行免疫。分0.2 g、0.4 g和0.6 g三个剂量组,免疫三次,每周一次。对照组用5μg细菌中表达的抗原蛋白腹腔注射免疫小鼠,空白组小鼠饲喂普通鼠粮。利用ELISA方法对小鼠血清、粪便特异性抗体表达进行分析。结果有45%小鼠经转基因马铃薯口服免疫后可诱导特异性的免疫应答。与细菌表达的抗原免疫反应相比,血清IgG反应和黏膜sIgA反应略强或相当。说明产肠毒素大肠杆菌转基因植物疫苗免疫动物可诱导特异的系统免疫应答和黏膜免疫应答。为利用植物生产预防大肠杆菌性腹泻可食用的口服疫苗,保护儿童免受细菌性腹泻的侵染奠定了基础。     

大肠杆菌肠毒素的免疫学研究进展

大肠杆菌肠毒素分为耐热肠毒素（ＳＴ）和不耐热性肠毒素（ＬＴ），ＳＴ不具有抗原，而ＬＴ具有抗原性。ＳＴ是引起人、畜腹泻的重要致病因子。人们希望通过基因体外融合技术和化学偶联方法，使ＳＴ成为一种良好抗原。本文对此研究进展作了概述。     

大肠杆菌热敏肠毒素的检测及纯化

采用平板免疫溶血试验、兔回肠结扎试验,探讨了大肠杆菌耐热肠毒素制备的方法和检测方法。试验表明：平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素．并具有很强的特异性,比肠结扎试验灵敏度高,而且简便易行;试验将细菌接种到产毒素培养基上培养．进行增菌,然后离心取上清液,沉淀溶于PBS液中用多黏菌素B浸出,均用80％饱和度的（NH4）2SO4盐析,之后用SephadexG-100凝胶层析分离纯化,最后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测热敏肠毒素的纯度。     

大肠杆菌耐热性肠毒素（ST）的分子生物学研究进展

大肠杆菌的耐热性肠毒素（ST）在产肠毒素性大肠杆菌引起的腹泻中扮演重要的角色,对人类和家畜的健康构成很大的威胁。文章从ST的理化特性、致病机理等一般生物学特性到基因克隆、定点突变以及分子结构与功能的关系等分子生物学特征,全面概述了ST的分子生物学研究进展,对于从分子水平全面了解ST的结构、性质、致病机理以及免疫原性等生物学性状具有重要意义。     

川西北牦牛源产肠毒素大肠杆菌的分子流行病学调查

为调查川西北地区牦牛源产肠毒素大肠杆菌的流行情况,对采自川西北甘孜州和阿坝州的26份腹泻牦牛粪便样品进行大肠杆菌分离,分别以分离的大肠杆菌DNA和牦牛腹泻粪便样本提取的总DNA为模板,采用PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌黏附因子K99+菌毛基因片段,分析产肠毒素大肠杆菌在牦牛腹泻中存在情况,同时比较两种DNA提取方法对产肠毒素大肠杆菌PCR检出率的差异;以分离自外表健康牦牛粪便的105株大肠杆菌DNA为模板,采用PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌黏附因子K99+菌毛基因片段,比较牦牛源产肠毒素大肠杆菌在外表健康牦牛和腹泻牦牛中的携带情况.结果:从26份牦牛腹泻粪便样本中共鉴定出84个大肠杆菌菌落携带K99菌毛基因,这些菌落分别来自所有26份牦牛腹泻样品,因此,牦牛腹泻样本100%分离并检测到携带K99+菌毛基因的产肠毒素大肠杆菌;而粪便总DNA检测结果为K99+菌毛基因阳性率84.62%(22/26),粪便中提取的总DNA模板K99+菌毛基因PCR检出率略低于分离鉴定的细菌DNA检出率;105株外表健康牦牛粪便样本分离株中检测到携带K99+菌毛基因的产肠毒素大肠杆菌34株,检出率为32.38%(34/105),产肠毒素大肠杆菌在牦牛腹泻样本中的检出率显著高于外表健康牦牛粪便的检出率(P0.001).结果表明,产肠毒素大肠杆菌在牦牛粪便中存在广泛,是引起牦牛腹泻的一种重要病原菌;以粪便中提取的总DNA为模板,可快速检测牦牛粪便中产肠毒素大肠杆菌的存在.     

不同培养基对肠毒素大肠杆菌载体疫苗株免疫原性的影响

分别采用固体CFA培养基和液体LB培养基培养,全菌ELISA,口服免疫Balb/c抗体测定,评价肠毒素大肠杆菌抗原CFA/I,CS6和载体志贺氏痢疾杆菌LPS的免疫原性.结果表明:LB培养基培养不影响疫苗株抗原免疫原性.由此提示,LB培养基对肠毒素大肠杆菌载体疫苗生产是行之有效的.     

大肠杆菌不耐热肠毒素及其分子生物学

产肠毒素大肠杆菌是与腹泻相关的一类大肠杆菌 ,肠毒素可分为耐热肠毒素和不耐热肠毒素。文章从肠毒素免疫性与作用机理 ,不耐热肠毒素的基因质粒、定位、亚基因克隆及表达 ,以及牛源大肠杆菌不耐热肠毒素等方面内容的国内外进展进行了讨论     

大肠杆菌菌毛抗原K88与热稳定肠毒素ST融合基因植物表达载体的构建及其在烟草中的初步表达

利用DNA重组技术,将编码大肠杆菌黏附素蛋白K88与热稳定肠毒素ST的融合基因的序列片段克隆到植物表达载体pCANBIAl3O2中,成功地构建了植物重组表达质粒pCANBIA—K88-ST,并将其转化农杆菌EHAl05．利用农杆菌介导法转化烟草,并初步获得转化体。为K88-ST基因的进一步研究奠定了基础。     

鸡大肠杆菌病致病因素及其研究进展

对鸡大肠杆菌致病力或毒力因子等相关致病因素作了简要概述,讨论了相关领域的研究进展.1）大肠杆菌的菌毛抗原是一种特异蛋白质,可以被免疫系统所识别,因此在疾病的免疫预防和相关疫苗研制等方面有着重要意义.2）鸡大肠杆菌肠毒素中LTB和STn亚单位具有良好的免疫原性,认为在降低ST的生物毒性有所突破的前提下,借用基因重组融合技术以及优化重组基因表达,是利用该毒素因子免疫防治的发展趋势.3）诸多实验研究表明,提纯的大肠杆菌OMP或通过基因工程表达的OMP同样具有良好的免疫原性和保护作用.某些细菌的不同血清型间有相同的OMP免疫原,这为OMP亚单位疫苗以至于基因疫苗的研发都提供了理论基础.     

大肠杆菌热稳定肠毒素的攻毒最佳模型的确定

用致病性大肠杆菌C83916菌株,通过腹腔注射和经口灌胃两种途径感染小鼠,并且每一种途径分别按照体重给菌和按照分组给菌两种方式,最后确定最佳的给菌方式。结果:经腹腔注射并按照体重给菌可诱导小鼠腹泻,大便培养阳性,半数致死量为9.2×109个细菌/10g体重。最后确定经腹腔并按照体重注射致病性大肠杆菌C83916菌株是引起小鼠腹泻最佳模型。     

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在干酪乳杆菌中的分泌表达

以大肠杆菌和乳酸菌穿梭表达型载体pMG36e为基本模型,采用重叠延伸PCR方法拼接相关调控元件构建一种乳酸杆菌组成型分泌表达载体;将编码LTB蛋白的eltb基因片段插入干酪乳杆菌分泌型表达载体中,构建重组质粒pMG36e-UP/L-LTB,电转化于干酪乳杆菌393中,筛选获得重组干酪乳杆菌,应用westernblot方法鉴定LTB表达情况.Western-blot分析显示,约有12 KDa的目的蛋白以分泌形式表达,可被LTB阳性血清识别.表明LTB蛋白在重组干酪孔杆菌获得了表达,并且具有免疫反应活性和佐剂活性,为以LTB为分子佐剂研制乳酸菌黏膜疫苗奠定基础.     

重组大肠杆菌发酵生产核酸疫苗的初步研究

初步摸索大肠杆菌DH 5α生产核酸疫苗的发酵条件。通过均匀试验设计确定,当胰蛋白胨与酵母粉的质量比为1∶1.2,并且磷酸盐的加量较大时菌体的质粒产量较高。在菌体生长刚进入对数生长期时采用指数式流加葡萄糖与采用恒速流加葡萄糖,菌体得率相同,而产物收率前者高于后者。在菌体生长进入平稳期时将温度由37°C升高到42°C,在菌体密度没有改变的情况下,质粒产量得到提高,达到75 m g/L。     

Immune response in cattle inoculated with the recombinant complete polyprotein of foot-and-mouth disease virus from Bombyx mori larvae

The intact open reading frame (ORF) of foot-and-mouth disease virus (FMDV) Asia I/XJ strain was am- plified by RT-PCR and inserted into the transfer vector pVL1393 to generate plasmid pVL-ORF. Bm-N cells were transfected with pVL-ORF and linearized Bm-BacPAK6 DNA, and the recombinant silkworm baculovirus Bm-ORF containing the full ORF of FMDV was obtained. The results of indirect im- munofluorescence assay (IFA) showed that Bm-ORF could be expressed efficiently in Bm-N cell. After inoculating the early 5th instar larvae of silkworm, the polyprotein of FMDV could be detected by sandwich ELISA and empty capsid-like particles could be observed under the electron microscope. Expression products from silkworm were used as the antigen to immunize the cattle. The specific an- tibody was induced in all vaccinated animals. The immunized cattle were challenged with the virulent FMDV Asia I/XJ strain, two of the four cattle were completely protected and clinical symptoms were alleviated and delayed in the others. The results suggest that this strategy might be used to develop the new subunit FMDV vaccine.     

微小隐孢子虫表面抗原CP23DNA疫苗免疫山羊诱导免疫应答及保护性研究

观察微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum)子孢子表面抗原CP 23 DNA疫苗免疫山羊诱导其产生免疫应答和保护性作用。将重组质粒pCR3.1-23经鼻粘免疫怀孕山羊，用ELISA测定IgG和IgA抗体滴度，用C.parvum卵囊经口对其后代攻虫感染。抗CP23抗体存在于免疫山羊的血浆和初乳中，且抗体滴度随免疫时间延长而增高。C.parvum卵囊经口感染后代，试验组山羊后代与对照组相比，卵囊排出数量减少，排出时间缩短，微小隐孢子虫表面蛋白CP 23 DNA疫苗能诱导山羊产生特异性免疫应答并对其后代有一定免疫保护作用。     

盆炎净颗粒对大肠杆菌所致大鼠慢性盆腔炎模型的影响

目的观察盆炎净颗粒对大肠杆菌所致大鼠慢性盆腔炎动物模型的作用。方法采用大肠杆菌所致大鼠慢性盆腔炎动物模型,观察盆炎净颗粒对慢性盆腔炎模型大鼠的影响。结果盆炎净颗粒有改善大肠杆菌所致大鼠慢性盆腔炎的血瘀状态、明显减轻大肠杆菌所致大鼠慢性盆腔炎动物模型子宫炎症肿胀度、改善大肠杆菌所致大鼠慢性盆腔炎模型子宫内膜病变程度。结论盆炎净颗粒对大肠杆菌致大鼠慢性盆腔炎有显著的治疗作用。     

乙肝免疫球蛋白联合乙肝疫苗阻断母婴传播136例疗效分析

孕妇乙型肝炎或表面抗原阳性者对胎儿的影响已得到公认,本文通过对乙型肝炎病毒表面抗原阳性的孕妇在妊娠期间应用乙肝免疫球蛋白(HBIG)进行母婴传播的阻断疗效观察,显示HBIG联合乙肝疫苗对治疗组的阻断成功率为97.1%,疫苗接种成功率为82.4%,而未接种母婴阻断的乙肝病毒感染为15.96%,疫苗接种成功率为57.1%,明显低于治疗组.     

大肠杆菌S12无细胞系统合成AgrA蛋白的研究

利用无细胞合成方法,对AgrA蛋白进行了生物体系外合成,且研究了不同反应温度和时间对蛋白合成的影响。结果表明,AgrA蛋白在无细胞系统中成功被合成,且30℃、4h条件下蛋白合成效果较好。