一种简易的昆虫基因组DNA提取方法

报道了一种改进的昆虫基因组DNA 的提取方法.结果表明,该方法可在常温条件下,对多种昆虫及人体组织进行酚/氯仿抽提,DNA 得率较高,OD260/280 的值在1.6～1.9 之间.     

中国漠王族干标本DNA提取及部分类群发育关系

为了降低昆虫分子系统学研究中的成本,提高资源利用率,本实验利用干制标本提取基因组DNA.通过对河北大学馆藏30年的漠甲亚科不同保存期干标本与液浸标本DNA的提取和特定基因片段PCR(聚合酶链式反应)扩增,获得一致效果.通过细胞色素B(Cytb)基因片段序列信息构建系统树并与传统分类学做比较,探讨了漠王族部分种类的系统进化关系,研究结果支持Reitter(1893)建立的Platyopini和Pimeliini是2个独立族的观点,而不同意Beutle等(2005)将它们合并为1个族的观点.研究结果为利用鞘翅目昆虫干标本进行分子系统学研究提供了借鉴.     

不同预处理对酒精浸制标本DNA提取效果比较

为解决昆虫样本在保存和运输过程中因DNA降解而导致DNA提取效果差的问题。研究采用0.9%NaCl溶液、Tris-EDTA盐水缓冲液(STE)、磷酸缓冲盐溶液(PBS)、无菌水对朽木甲酒精浸制标本进行预处理,提取基因组DNA后,比较分析基因组DNA的质量、浓度及PCR的扩增效果。结果表明：0.9%NaCl溶液、STE缓冲液、PBS缓冲液这3种预处理方式均可在一定程度上提升朽木甲酒精浸制标本DNA的得率和PCR扩增的质量,其中使用PBS缓冲液进行预处理对朽木甲酒精浸制标本DNA提取的综合提升效果最佳;使用无菌水进行预处理对样本DNA提取没有任何提升作用,反而会使PCR扩增的效果更差;相较于线粒体基因片段的PCR扩增,除无菌水外的其他3种预处理方式对核基因的PCR扩增提升效果均较佳;此外,不同预处理均对提取到的DNA的OD_260/280值没有显著的影响。本研究结果为朽木甲酒精浸制标本的基因组DNA提取提供了更好的预处理方式,大大提高了其DNA提取的得率和扩增质量,减少了在DNA提取过程中标本数量的消耗和浪费。为后续的分子研究工作奠定了基础,同时也为其他昆虫酒精浸制标本...     

3种不同方法对标本基因组DNA固定和抽提效果研究

利用常规基因组DNA抽提方法,对分别用甲醛、乙醇、聚乙二醇3种固定液固定的鲫(Carassius auratus)肌肉样品基因组DNA提取进行了比较研究。结果表明:5%甲醛保存的样品很难提取到完整的基因组DNA,乙醇95%和聚乙二醇(分子量为600)保存的样品均能成功提取出基因组DNA,并能成功地进行18S rDNA的扩增。同时探讨了不同固定方法对基因组DNA提取的影响。     

基于Chelex-100和蛋白酶K的蚊虫足样本DNA提取技术

【目的】探索出一种蚊虫附肢(如单只足)微量DNA的提取方法,用于蚊虫分子鉴定和基因型研究。【方法】采用Chelex-100溶液和蛋白酶K结合的方法用于单只蚊虫足的微量DNA的提取。基于该方法,将不同方法保存的不同蚊种的足作为实验材料,从中提取蚊虫基因组DNA;以之为模板,扩增核糖体DNA的D2,D3,ITS2区以及线粒体COI和COII基因,并对PCR扩增产物进行测序。【结果】提取到了高质量的基因组DNA,PCR扩增获得了高质量的DNA扩增片段,进一步测序获得了高质量的序列。【结论】该方法价格便宜,操作简单方便,减少了对蚊虫样本的依赖。单只足用于DNA提取不影响对剩下的部分开展形态学等研究,可以作为蚊虫分子生物学研究中微量DNA样本提取的重要方法,也为其他昆虫微量DNA的提取提供理论依据。     

基于Chelex-100和蛋白酶K的蚊虫足样本DNA提取技术

【目的】探索出一种蚊虫附肢(如单只足)微量DNA的提取方法,用于蚊虫分子鉴定和基因型研究。【方法】采用Chelex-100溶液和蛋白酶 K 结合的方法用于单只蚊虫足的微量 DNA 的提取。基于该方法,将不同方法保存的不同蚊种的足作为实验材料,从中提取蚊虫基因组 DNA ;以之为模板,扩增核糖体 DNA 的 D2 , D3 , ITS2 区以及线粒体 COI 和COII 基因,并对 PCR 扩增产物进行测序。【结果】提取到了高质量的基因组DNA,PCR扩增获得了高质量的 DNA 扩增片段,进一步测序获得了高质量的序列。【结论】该方法价格便宜,操作简单方便,减少了对蚊虫样本的依赖。单只足用于DNA 提取不影响对剩下的部分开展形态学等研究,可以作为蚊虫分子生物学研究中微量 DNA 样本提取的重要方法,也为其他昆虫微量 DNA 的提取提供理论依据。
     

用改进的CTAB法提取肉苁蓉基因组DNA

研究了肉苁蓉(Cistanche deserticola)基因组DNA的分离提取方法.由于肉苁蓉组织内含有大量的多糖类及蛋白等物质,严重干扰DNA的抽提,在对其进行若干预处理之后,采用改进的CTAB法提取基因组DNA.根据外观、琼脂糖凝胶电泳检测、D260/D280的测定和PCR扩增表明,用改进的CTAB法提取肉苁蓉基因组DNA,所得DNA无论是纯度还是完整性都比较好,可以直接用于RAPD反应体系.     

适用于SSR分析的半粒水稻干种子DNA快速提取

 为了寻找操作简便、耗时短、成本低,适用于简单重复序列(SSR)分析的水稻基因组DNA快速提取方法,以水稻沈农265的半粒干种子为材料,采用SDS提取液进行一步裂解,并将RNA去除操作融入抽提过程,SDS浓度为0.5%(W/V),水浴10min,氯仿/异戊醇抽提,简单快速地获得了高质量水稻基因组DNA。经琼脂糖凝胶电泳检测,DNA纯度较高,完整性较好,能够满足SSR扩增模板的需求。该方法可大大缩短水稻种子DNA提取时间,为SSR标记在水稻种子遗传多样性分析、分子标记辅助选择等方面的应用奠定基础。     

昆虫全基因组DNA的保存及提取

以蚂蚁、天牛、蝗虫等昆虫为实验材料,建立了75%酒精常温浸泡密封保存和福尔马林常温浸泡密封保存昆虫样品2~4周后进行全基因组DNA提取的方法。基因组DNA经紫外分光光度法(260 nm、280 nm)、琼脂糖凝胶电泳、PCR检测,结果表明:从两种方法保存的样品中均能提取到纯净完整的基因组DNA,适用于分子生物学实验。     

蚜蝇科昆虫研究现状及展望

综述了21世纪初国内外蚜蝇科昆虫的研究现状:由于蚜蝇科昆虫物种多样性丰富,且各地区种类调查程度不一,种类调查仍是目前研究的热点之一;在国外,蚜蝇科昆虫分子系统学研究深入而且广泛,几乎涉及现生蚜蝇科昆虫的各个类群;生物学特性、生态防治等研究重点涉猎几个有益种类。国内蚜蝇科昆虫研究目前仍集中在物种多样性的调查方面,其他方面研究明显不足。因此,国内应加大对蚜蝇科昆虫研究的力度,特别是分子系统学研究,以便缩短与世界蚜蝇科昆虫研究之间的差距。