烤烟品种NC297内生细菌中拮抗烟草黑胫病的生防菌筛选及种群组成分析

 从来自烤烟品种NC297的970株内生细菌中,以烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var. nicotianae) 为靶标,共筛选出165株拮抗菌,这些内生细菌对黑胫病菌的抑菌率在9.55%~55.96%之间.内生细菌的生物量在苗期、团棵期、开花期和成熟期中无显著差异,但拮抗菌数量呈上升趋势.对165株拮抗菌的16S rRNA基因序列进行RFLP分析共产生12种带型.根据RFLP带型选取41株进行16S rRNA基因序列测定和系统发育分析.结果表明这165株生防内生细菌归于3大类群:Proteobacteria,Actinobacteria和Firmicutes.Firmicutes类群中的芽孢杆菌属(Bacillus)是优势属,共6种RFLP带型,159个菌株,包括Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum,Bacillus methylotrophicus,Bacillus tequilensis,Bacillus aryabhattai,Bacillus cereus和Bacillus mycoide.Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum和Bacillus.methylotrophicus是Bacillus中分离频率最高的2种内生拮抗菌,共149株,占该属菌株数的90.30%.其余6个菌株分别属于6个种:Brevibacillus reuszeri,Streptomyces finlayi,Streptomyces atroolivaceus,Erwinia rhapontici,Enhydrobacter aerosaccus和Stenotrophomonas rhizophila.     

拮抗烟草青枯病菌的烟草内生细菌系统多样性及趋化性分析

 从来自3个烤烟品种NC297、红大、K326的600株内生细菌中,以烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)为靶标,共筛出55株拮抗菌,其对烟草青枯病菌的抑菌圈直径在1~16 mm之间.对这55株拮抗性内生细菌的16S rRNA基因序列进行RFLP分析共产生6种带型.根据RFLP带型选取16株进行16S rRNA基因序列测定和系统发育分析.结果表明这55株拮抗性内生细菌属于Firmicutes和Proteobacteria两大类群的6个种:Bacillus amyloliquefaciens subsp.plantarum,Bacillus methylotrophicus,Bacillus tequilensis,Brevibacillus parabrevis,Brevibacillus brevis和Pseudomonas aeruginosa.利用cheA基因检测方法和平板检测方法共筛选到3种具有趋化性的拮抗性内生细菌:Brevibacillus parabrevis,Brevibacillus brevis和Pseudomonas aeruginosa.     

烟草黑胫病与青枯病生防芽孢杆菌筛选

烟草黑胫病与青枯病是贵州省黔西南州安龙县烤烟上主要根茎病害。为筛选防治烟草黑胫病与青枯病的芽孢杆菌,从安龙县烟草黑胫病与青枯病混合发生地块采集健康烟株根际土壤,分离到根际芽孢杆菌662株。采用平板对峙法筛选同时拮抗这2种病菌的芽孢杆菌。结果表明,2株芽孢杆菌具明显拮抗烟草黑胫病菌(Phytophthora nicotianae)与青枯病菌(Ralatonia solanacearum)的能力,通过形态学、生理生化测定及分子生物学鉴定,2株芽孢杆菌均为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。本研究为贵州烟草生防制剂的研发打下基础。     

木霉菌对烟草黑胫病菌的拮抗机制及其生物防治研究

利用诱捕法从土壤中分离得到1株木霉菌株长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum),采用对峙法测定其对云南省烟草黑胫病菌（Phytophthora nicotiana)的拮抗作用,结果表明：该菌对黑胫病菌具较强拮抗作用,拮抗机制主要为竞争作用,重寄生作用,抗生作用,采用温室盆栽,田间试验,分别测定该 对黑胫病的防效,室内防效为97．6％（10^6个／mL浓度级）,田间移栽时,每株施用4克效果较好,田间防效可达67％以上。     

趋化性参与内生细菌336x在小麦根系的内生定殖

变形斑沙雷氏菌336x是一株从健康小麦根系分离获得的对于小麦全蚀病具有有效生防作用的内生细菌.本研究扩增出336x基因组cheW基因的上游和下游片段,连接后构建cheW基因敲除载体,通过接合作用将敲除载体导入336x菌株,获得336x菌株的cheW基因敲除菌株(ΔcheW).比较测定基因敲除菌株ΔcheW及其野生型对于小麦根系分泌物的趋化性和在小麦根系的定殖能力,结果显示,突变体ΔcheW的趋化性丧失,在小麦根系的定殖能力下降.以上结果表明,336x的趋化性参与该细菌在小麦根系的内生定殖.     

青霉菌灭活菌丝体对烟草生长及黑胫病防治的影响

我们在云南的两个地区进行了田间小区试验以检测青霉菌灭活菌丝体(Dry mycelium of Penicillium chrysogenum DM)作为有机肥,在促进烟草生长及防治烟草黑胫病方面的作用.结果表明青霉菌灭活菌丝体(DM),可以显著提高烟草的叶面积、茎围和产量,但留叶数和株高并无显著差异.而且在两个试验地点DM处理组对烟草黑胫病都具有很好的防治效果,防治效果最高可达63.8%.病原菌拮抗试验表明,青霉菌灭活菌丝体(DM)对两种烟草黑胫病病原菌菌株并没有拮抗作用,所以DM的防病作用并不是通过抑制病原体的生长和繁殖,而是诱导烟草病原体对病原体产生抗性发挥作用的.     

几种杀菌剂防治烟草黑胫病试验研究

研究结果表明，8种杀菌剂中绿亨恶霉N4000倍液＋新万生600倍液防治效果最好，第三次施N20d后的相对防效65．7％，优于其它药剂。     

辣椒疫霉菌拮抗细菌的筛选、鉴定及防效测定

从天津、河北、山东、山西、福建、河南及江苏等地蔬菜根际土壤中分离细菌1万余株,从中筛选出对辣椒疫霉菌Phytophthora capsici有明显拮抗作用的细菌802株,进一步用立枯丝核菌Rhizoctonia solani、番茄灰霉菌Botrytis cinerea及瓜果腐霉菌Pythium aphanidermatum为靶标筛选出对以上病原真菌有较好拮抗作用的菌株62株。对辣椒疫病防效温室盆栽实验结果表明,6个菌株防效在70%以上,其中菌株TB1340防效最高,达到82%。菌株TB1340生物学特性测定结果表明其具有较强的产生几丁质酶、纤维素酶和β-1,3-葡聚糖酶活性。经16S rRNA基因序列分子鉴定结合形态学观察,菌株TB1340被初步鉴定为芽孢杆菌Bacillus sp.。     

蓝花楹内生拮抗细菌筛选及对茎腐病的防治研究

【目的】筛选蓝花楹茎腐病的内生拮抗细菌,并探讨其生物防治作用。【方法】采用稀释平板法从健康蓝花楹根茎分离内生菌株; 以蓝花楹茎腐病原菌(Fusarium chlamydosporum)作为供测菌,用5点对峙法进行拮抗作用初筛、平板扩散法复筛获得拮抗菌株,经形态学和16SrDNA序列比对,对其进行鉴定。采用温室盆栽和田间试验检测拮抗菌的生防效果。【结果】分离获得24株内生菌株,其中zhu66抑菌率达到97.8%,鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),GenBank序列登录号为JF899258。盆栽试验结果表明,解淀粉芽孢杆菌能有效预防和治疗蓝花楹茎腐病。在一定浓度下,浓度越高防效越好,以10⁷cfu/mL浓度最佳。灭菌土防效优于自然土; 生防菌先于病原菌施入防效优于生防菌与病原菌同时接种,病原菌先于生防菌接种方式防效较低。菌株能显著促进蓝花楹地径、苗高与冠幅生长,浓度越高,促生效果越好。田间试验进一步验证,蓝花楹茎腐病不同发病程度的生防效果有显著差异,无病区预防作用十分显著,不发生茎腐; 重度发生区几乎没有效果,轻度发生区防效明显,防效达74.1%,中度发生区有一定效果,且随着时间延长,防效增加。【结论】解淀粉芽孢杆菌zhu66对蓝花楹茎腐病有良好的生防潜力。     

抗番茄青枯病内生拮抗细菌的筛选及室内防效测定

从健康番茄体内分离到了93株内生细菌。采用含菌平板抑菌圈测定法，筛选出了3株对番茄青枯菌具有较强拮抗力的细菌菌株ZB—1、ZB-2和ZB-6。温室盆栽防病试验结果表明，内生细菌菌株ZB-6对植株进行预处理后，番茄青枯病防病效果可达63—65％，说明该菌株对番茄青枯病发生具有较好预防效果。     

云南草地贪夜蛾区域生态防控思想与对策

云南是中国草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）危害最严重的省份,统筹云南草地贪夜蛾区域防控对于全国草地贪夜蛾防控具有重要战略意义.作者提出并阐述了云南草地贪夜蛾区域生态防控思想,将云南草地贪夜蛾发生地划分为七大发生区,以边境防控、虫源地防控和通道防控作为典型案例,探讨了区域生态防控对策.研究将为制定云南草地贪夜蛾科学防控方案提供理论依据和科学指导.     

云南江城雪茄烟根结线虫病的病原鉴定及生物源氨气熏蒸的防治效果研究

雪茄产业是近年来中国烟草行业新的经济增长点,雪茄烟种植中根结线虫病危害严重.然而,目前国内外雪茄烟病原线虫的种类尚未明确,对该病害的绿色防控也鲜有报道.基于雌虫、雄虫和二龄幼虫的形态特征、PCR扩增特异性条带及科赫法则验证结果,将普洱市江城县雪茄烟叶“云雪1号”品种上发生的根结线虫病病原鉴定为爪哇根结线虫（Meloidogyne javanica）.评估了4种食用菌（金针菇、杏鲍菇、香菇、姬菇）菌渣脲酶催化尿素释放氨气熏蒸土壤对雪茄烟叶爪哇根结线虫病的防治效果.结果表明：致死100%二龄幼虫（J2）所需的NH3最低质量浓度为136.8 mg/m3;将含4%尿素的4种菌渣分别与土壤按质量比为1∶18的比例混合,在水分含量约60%、28℃下放置3 d时,各处理组释放的氨气质量浓度在130.9～218.7 mg/m3,对根结线虫病的防效在75.7%～92.3%.研究结果显示“菌渣+尿素”熏蒸土壤对防控雪茄烟根结线虫病具有很好的应用潜力.     

苹果内生细菌动态分布及其对斑点落叶病的拮抗作用

采用常规分离法对不同生长季节苹果树的不同部位进行了内生细菌分离．结果表明，内生细菌的分离几率和数量不同．通过平板对峙培养和发酵液抑菌活性测定，在所分离的118个菌株中，筛选出7株对苹果斑点落叶病菌（Alternaria alternata f．sp．Mali）具有较强拮抗作用的菌株，其中菌株B86和B91的发酵滤液在活体上对苹果斑点落叶病的防治效果显著，分别为73．72％和75．32％．两菌株培养滤液对病菌分生孢子萌发具有抑制作用，并造成芽管畸形膨大，呈泡囊状，泡囊消解破裂；两菌株产生的抑菌物质具有热稳定性．表明B86和B91菌株具有一定的生防潜力．