鲤鱼NOD1基因克隆与组织特异性表达分析

利用RT-PCR技术在鲤鱼(Cyprinus carpio)中首次克隆得到了NOD1基因编码序列全长。生物信息学分析发现,鲤鱼NOD1具有3个保守结构域和相应的保守位点,在进化中与草鱼亲缘关系最近;半定量RT-PCR分析NOD1基因在鲤鱼不同组织中分布发现,NOD1在头肾和血液中表达最高,在肌肉、皮肤和性腺中表达量最少;鳗弧菌(V.anguillarum)刺激后NOD1基因在肝脏、脾脏、头肾和前肠中表达量都有明显上升。研究结果显示NOD1在鲤鱼应对鳗弧菌刺激天然免疫过程中可能发挥着重要作用。     

创伤弧菌触发吞噬细胞细胞骨架重排和诱导细胞凋亡的研究进展

创伤弧菌(Vibrio vulnificus,V.vulnificus)感染是一种少见而又致命性的重要疾病.由于起病急、死亡率高,创伤弧菌感染的有效预防和治疗受到严峻的挑战,促使人们对创伤弧菌的致病机制进行更为深入地研究.吞噬细胞在机体抗感染免疫中起着重要的作用.由于感染后触发宿主吞噬细胞骨架改变及诱导其凋亡是多种病原菌入侵的机制之一,与疾病的发生、发展和结局有着密切关系.本文就创伤弧菌感染后,触发吞噬细胞细胞骨架改变及诱导细胞凋亡的研究进展作一综述.     

舟山海域海泥细菌的分离及抗水产病原弧菌的筛选

采集中国东海舟山海域海底不同层次9个海泥样品,通过稀释培养分离纯化得到海洋细菌78株。采用滤纸片琼脂扩散法测定上述分离所得海洋细菌对鳗弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、费氏弧菌等5种水产病害常见病原弧菌的抑制作用,获得具有抑弧菌作用的海洋细菌17株,占21.8%。其中6株菌株对费氏弧菌有明显的抑菌作用,占7.7%。7株菌株对哈维氏弧菌的抑菌作用较显著,占9.0%。2株菌株对创伤弧菌有明显的抑菌作用,占2.6%。2株菌株对溶藻弧菌和鳗弧菌显示一定的抑制作用,各占1.3%。研究结果表明:通过稀释培养法能分离到一定数量和种类的海洋细菌;来自海底泥的海洋细菌中存在较多的具有水产病原弧菌拮抗活性的菌株。     

对虾病原体鳗弧菌抗血清制备及其血清反应

对鳗弧菌抗血清学制备及其血清反应的研究结果表明，应用免疫注射法，先去除鞭毛抗原，可以获得对虾“黄鳃病”鳗弧菌的高效价的抗血清，其血清效价可以达到５１２０，这为对虾病原菌制备抗血清，提供了一个很好的技术和方法．     

基于斑马鱼模型的鳗弧菌减毒活疫苗的生物安全性评价

利用疫苗对养殖鱼类进行疾病预防正得到逐步应用,而减毒活疫苗通过浸泡方式也能使鱼体获得较高的免疫保护力。利用模式动物斑马鱼对鳗弧菌减毒活疫苗MVAV6203的生物安全性进行了评价。首先进行了疫苗对斑马鱼毒性实验,每条鱼注射免疫的半致死量为9．26×10^4CFU;其次分析了鳗弧茵在水体中的存活情况,菌体浓度在1．0×10...     

对虾病原体鳗弧菌抗血清制血及其血清反应

对鳗弧菌抗血清学制备及其血清反应的研究结果表明，应用免疫清射法，先去除鞭毛抗原，可以获得对虾“黄鳃病”鳗弧菌的高效价的抗血清，其血清效价可达到５１２０，这为对虾病原菌制备抗血清，提供了一个很好的技术和方法。     

鳗弧菌和副溶血弧菌对短蛸感染的病理学研究

为了今后养殖病害的防治,了解病原微生物在养殖过程中对头足类动物产生的影响,选择在海水养殖中发病频率较高的弧菌,包括鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus),研究它们对短蛸的毒力水平。通过将稀释菌液直接注射短蛸腕部的方式,观察感染后短蛸的致死率、半致死时间,以及各菌对短蛸肝脏、鳃、鳃心、白体等器官结构的影响。结果显示:鳗弧菌和副溶血弧菌均对短蛸有较强的致病性,分别在60、48 h时达到半致死,且发病的短蛸活性减退,虚弱无力,腹部肿大,解剖可见部分内脏肿胀明显,如肝脏;通过对病变组织和健康组织的石蜡切片和HE染色,以及超显微结构的观察,发现患病短蛸的肝脏、鳃、鳃心和白体均出现不同程度组织、细胞结构上的破坏。以上结果表明这两种弧菌对短蛸均具有明显的致病性,副溶血弧菌更强一些,合适条件下将会成为短蛸规模化养殖的重要威胁之一。     

仿刺参硫氧还蛋白基因在灿烂弧菌和鳗弧菌刺激下的应激表达特征

分别用灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和鳗弧菌(V.anguillarum)对仿刺参(Apostichopus japonicus)进行注射感染试验,取注射后0、3、6、9、12、24 h的仿刺参体壁、肠道、呼吸树、触手和体腔细胞5种组织或细胞进行了实时荧光定量PCR检测,分析硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因在这5种组织或细胞中的表达特征,探讨了硫氧还蛋白在仿刺参先天免疫中的作用。结果显示,Trx基因在仿刺参体壁、肠道、触手、呼吸树及体腔细胞中均表达;在灿烂弧菌刺激下各组织或细胞中Trx基因变化趋势相似,呈现一种"突增-下降-再突增"的双峰型模式;鳗弧菌刺激下Trx基因表达量变化同样呈现先升高后降低的趋势,但与灿烂弧菌组相比反应时间与上调幅度都不同。总而言之,Trx基因在仿刺参体内有组成型和诱导型两种表达模式,并存在表达的组织特异性和病原特异性;Trx基因参与了仿刺参对病原感染的免疫应答,使机体免受氧化胁迫,在抵御外界病原入侵、维持胞内氧化还原状态方面起到重要作用。     

牙鲆fibrinogen β基因的克隆及表达分析

通过mRNA差异显示发现一个鳗弧菌刺激后在牙鲆肝脏中表达量显著增加的片段,结合RACE技术得到了该差异片段1 856 bp的全长cDNA,包含一个1 479 bp的开放阅读框,编码的蛋白质含有fibrinogen β的C末端签名序列.同源性分析表明其氨基酸序列与鱼类以及哺乳类的fibrinogen β都具有高度的相似性,因此可断定此基因为牙鲆的fibrinogen β基因(GenBank登录号为EF581895).RT-PCR分析表明,在注射鳗弧菌后,该基因在肝脏、肾脏、脾脏、腮、肠、心脏中的表达量呈现逐渐增加的趋势.推测其可能在鳗弧菌侵染中,起到了促进伤口愈合的作用,或通过和其他细胞因子结合在防御细菌的侵染中发挥免疫调节作用.     

牙鲆fibrinogen β基因的克隆及表达分析

 通过mRNA差异显示发现一个鳗弧菌刺激后在牙鲆肝脏中表达量显著增加的片段,结合RACE技术得到了该差异片段1 856 bp的全长cDNA,包含一个1 479 bp的开放阅读框,编码的蛋白质含有fibrinogen β的C末端签名序列。同源性分析表明其氨基酸序列与鱼类以及哺乳类的fibrinogen β都具有高度的相似性,因此可断定此基因为牙鲆的fibrinogen β基因(GenBank登录号为EF581895)。RT-PCR分析表明,在注射鳗弧菌后,该基因在肝脏、肾脏、脾脏、腮、肠、心脏中的表达量呈现逐渐增加的趋势。推测其可能在鳗弧菌侵染中,起到了促进伤口愈合的作用,或通过和其他细胞因子结合在防御细菌的侵染中发挥免疫调节作用。     

兽药阿昔洛韦复方制剂工艺研究及药效评价

用抗病毒西药与天然中草药配伍，制成复方制剂，预防和治疗家禽病毒性感染疾病。结果表明：复方制剂对雏鸡的新城疫(ND)强病毒感染有一定的预防和治疗作用。     

牙鲆的疾病

综述当国内外报道的养殖牙鲆危害严重的主要疾病及其防治方法，按牙鲆的病毒病，细菌病，寄生原虫病，吸虫病等顺序分别叙述了各主要病在，尤其对危害严重的病害种类如：牙鲆弹状病毒病，肠道白浊病，鳗弧菌病，腹胀病，腹水病，牙鲆出血性败血病等进行了较为详细的记述，以期对牙鲆疾病的研究提供参考材料。     

鳗弧菌质粒编码的铁吸收系统的分子调控

鳗弧菌是鱼类弧菌病的主要病原菌，该菌中质粒编码的铁吸收系统是重要的毒力因子．在铁吸收系统中，铁转运体系以及弧菌素合成基因受到AngR、TAF、Fur、反义RNAs、铁离子以及弧菌素等调控因子的调节，这些调控因子分别在转录或后转录水平参与铁吸收系统的正负调控、     

蛭弧菌指示和净化海水的研究

厦门近岸海水海洋噬菌蛭弧菌的数量与海水中弧菌类的数量成正相关．灭菌海水中只加蛭弧菌，其数量出现负增长．若同时加入蛭弧菌和宿主菌鳗弧菌８９２７菌株，则蛭弧菌数增加、增加速率随宿主菌浓度增加而增加，并导致宿主菌数减少，此时宿主菌随培养时间延长而减少，但减少速度缓慢，１５ｄ仅减少２６％．     

38种中草药对大菱鲆源副溶血弧菌的抑杀效果

为确定中草药对大菱鲆源副溶血弧菌的抑杀效果,选择鱼腥草、黄芪和甘草等38种中草药,采用牛津杯打孔法和改良二倍稀释法测定了中草药对大菱鲆源副溶血弧菌的敏感性。结果显示:副溶血弧菌对黄连、五倍子、秦皮、诃子、石榴皮、黄芩等6种中草药高度敏感,其抑菌范围为20～27 mm,其中以五倍子的抑菌作用最强,抑菌直径为27 mm;对青蒿、苏木、淫羊藿、乌梅、丁香、赤芍、地榆、栀子、地锦草、连翘、女贞子、黄柏、虎杖、白头翁、川棘子等15种中草药敏感,其抑菌圈直径为11～19 mm;对其他中草药不敏感。同时,采用改良微量二倍稀释法以及涂布法测定了具有抑菌作用的上述21种中草药对副溶血弧菌的MIC和MBC,结果表明:秦皮、诃子、石榴皮、黄连、五倍子、黄芩的抑菌和杀菌能力最强,其MIC和MBC分别为1.56 g/L和3.13 g/L;其次为淫羊藿、丁香、地榆、栀子、连翘、地锦草、苏木、赤芍、乌梅和青蒿,其MIC和MBC分别为3.13 g/L和6.25 g/L;白头翁的抑菌和杀菌效果最差,其MIC和MBC分别为25.00 g/L和50.00 g/L。     

杂色蛤中副溶血弧菌的定量风险评估

基于国际食品法典委员会关于微生物定量风险评估的理论框架,研究了从水产品批发市场到各零售点(主要为超市)杂色蛤中副溶血弧菌的动态变化情况,对因食用杂色蛤感染副溶血弧菌而引发疾病的风险进行预测,预测出每年、每人因消费生杂色蛤而导致由副溶血弧菌引发的食源性疾病的可能平均值被估计为1.65×10-8.同时对杂色蛤的另一种食用模式——烧烤,也进行了分析研究,确定因其所导致的风险十分小,可以不作为评估的对象.最后根据研究的结果提出针对政府监管部门的管理以及商业运营者和消费者的建议,这些风险管理措施、控制程序和安全食用规范的实施,均可大大降低因食用杂色蛤而感染副溶血弧菌并引发疾病的风险.     

双抗原夹心ELISA检测抗鳗弧菌抗体效价的研究

建立检测抗鳗孤菌抗体效价的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。采用高碘酸盐法对鳗孤菌抗原进行辣根过氧化物酶标记,并通过血清抗体效价比较双抗原夹心ELISA与微量凝集法的优越性。结果显示：标记蛋白含量为2．5mg的抗原所需HRP的最适量为0．20rag。以超声破碎后鳗弧菌离心上清为最适标记抗原,其工作浓度为12．25mg／L．并且双抗原夹心ELISA操作简易具有较高的敏感性和特异性。     

对虾养殖中弧菌数量与对虾“红腿病”“黄鳃病”关系研究

对虾养殖中弧菌数量与对虾“红腿病”“黄鳃病”关系研究苏永全，蔡心一，翁卫华，王军（厦门大学海洋学系，亚热带海洋研究所）黄淑莘（马尾水产饲料公司福州）弧菌是养殖虾池和对虾消化道的正常菌群之一￣［１］，但其中的某些种如鳗弧菌（Ｖ．ａｎｇｕｔｌ－ｌａｒｕｍ...     

四种海洋致病弧菌对抗生素敏感性的测定

测定了4种海洋致病弧菌对8种常用抗生素药物的敏感性．测试结果表明，鳗弧菌对氯霉素、庆大霉素具有敏感性，但对其他所测药物均表现出耐药性；副溶血弧菌对四环素、卡那霉素、青霉素表现出耐药性，而对氯霉素、头孢娄新、庆大霉素、红霉素和链霉素则表现出敏感性；河流弧菌对四环素、链霉素表现出耐药性，对氯霉素、卡那霉素、头孢娄新、庆大霉素、青霉素和红霉素则表现出敏感性；溶藻弧菌仅对四环素表现出耐药性，对其他7种抗生素均表现出敏感性．同时针对表现出抗药性的药物，相应地确定了它们的最小抑菌质量浓度值．     

蛭弧菌对草鱼池水质及细菌类群的影响

研究了蛭弧菌对草鱼池水质及细菌类群的影响,结果表明:蛭弧菌对养殖环境的主要水化指标具有明显的改善作用,实验组的平均COD、NH3-N、硫化物值显著低于对照组(P＜0.05),实验组的DO显著高于对照组(P＜0.05),而实验组与对照组的pH值差异不显著(P＞0.05);池水细菌总数及致病菌的数量也随着蛭弧菌浓度的增加而发生几何级数减少.