MTT法检测Rh-bFGF提高Balb/c3T3细胞酶活性及促细胞增殖作用

以Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞为靶细胞,采用体外细胞培养方法,观察重组人碱性成纤维细胞生长因子的促分裂和提高酶活性作用。结果发现：重组人碱性成纤维细胞生长因子提高Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞酶活性的最佳作用浓度为６．２５ｎｇ／ｍＬ（μｇ／Ｌ）,而促分裂增殖的最佳作用浓度为１００ｎｇ／ｍＬ（μｇ／Ｌ）。两者分别与应的对照组比较Ｐ＜０．０１,具有统计学意义。从而证实了重组人碱性成纤维细胞生长因子具有促分裂和增强酶活性的作用。     

基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子的纯化和鉴定

牛碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＲ）ｃＤＮＡ在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达，高压均质破碎菌体后，上清液以Ｈｅｐａｒｉｎ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ亲和层析、Ｃ１８反相ＨＰＬＣ分高纯化得到一分子量为２．２５×１０￣４的蛋白质，其等电点为９．３４，并能与抗牛ｂＦＧＦＭｃＡｂ反应；其氨基酸组成与ｂＦＧＦ文献值一致；活性分析结果表明此蛋白质不仅能促进ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞增值，ＥＤ＿（５０）＝０．８５ｎｇ／ｍｌ，而且能促进鸡胚尿囊膜微血管增生，所得蛋白为具有生物活性的重组碱性成纤维细胞生长因子。     

亚硒酸钠和硫杂脯氨酸组合对人胃癌细胞的诱导分化作用

以亚硒酸钠和硫杂脯氨酸为诱导剂组合，处理人胃腺癌ＭＧｃ８０－３细胞．通过细胞生长曲线和分裂指数的测定、光镜细胞化学和酶标法检测碱性磷酸酶活性，以及免疫胶体金技术标记ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白等方法，证实诱导剂组合能有效地抑制ＭＧｃ８０－３细胞恶性生长，改变碱性磷酸酶活性和分布，引起ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白表达的变化，具有一定的诱导分化作用．     

成果推介

成纤维细胞生长因子-2结构类似物生产方法及应用一、项目简介该项目由暨南大学生物工程研究所研制。其治疗烧烫伤的重组牛碱性成纤维细胞生长因子(rbbFGF)已获得新药证书,并与长春长生公司合作生产,是我国第二个基因重组一类新药;治疗脑中风的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)现正申报临床批文。碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)是一种促细胞生长作用很强的多肽细胞生长因子,是一种广谱的有丝分裂原,对广泛的来源于中胚层和神经外胚层的细胞具有明显的促增殖作用和促细胞迁移作用。bFGF主要有促进血管新…     

微波等离子体炬原子发射光谱法测定铝铍铬钼钒锆

用微波等离子体炬原子发射光谱法对Ａｌ，Ｂｅ，Ｃｒ，Ｍｏ，Ｖ和Ｚｒ进行了测定，样品用超声雾化法引入。考察了实验条件的影响，建立了测定的最佳条件，测定Ａｌ，Ｂｅ，Ｃｒ，Ｍｏ，Ｖ和Ｚｒ的检出限分别为５．３ｎｇ／ｍＬ，０．４７ｎｇ／ｍＬ，６．０ｎｇ／ｍＬ，３．６ｎｇ／ｍＬ，５．３ｎｇ／ｍＬ和６０ｎｇ／ｍＬ，线性范围为２～４个数量级，考察了一些共存物对测定的影响。     

成纤维细胞静脉注射途径实施血友病B基因治疗的初步探索

将转有报告基因ｌａｃＺ的成纤维细胞３Ｔ３／ＢＡＧ以５×１０＾５量尾静脉注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠体内，７ｄ后在主要脏器检测到３ＴＥ／ＢＡＧ的表达且至少可持续３０ｄ。将转有人凝血因子Ⅸ小基因的正向表达载体Ｇ１ＮａＣｉ’Ⅸ和反向表达载体Ｇ１ＮａＣｉ’ⅨＲ的成纤维细胞ＰＡ３１７／Ｇ１ＮａＣｉ’Ⅸ和ＰＡ３１７／Ｇ１ＮａＣｉ’ⅨＲ分别以１×１０＾５量尾静脉注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠体内，ＥＬＩＳＡ测定小鼠血浆中ｈＦ     

3T3成纤维细胞和巨噬细胞在含rhbFGF培养基血纤维上的共培养

目的：了解３Ｔ３成纤维细胞和巨噬细胞在含重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｈｂＦＧＦ）培养基血纤维上的生长行为。方法：采用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法、相差显微镜观察、吉姆萨染色和扫描电子显微镜观察方法,结果：在低血清含ｒｈｂＦＧＦ的培养条件,３Ｔ３成纤维细胞和巨噬细胞在血纤维上能够良好生长。结论本研究揭示,血纤维不仅可以作为一种低免疫原性或无抗原性的生物支持材料用于三维组织培养,而且也可作为ｒｈ     

重组PAI—2基因在NIH3T3细胞中的活性表达

构建了人ＰＡＩ—２ｃＤＮＡ睥达质粒，以ＮＩＨ３Ｔ３为转染宿主细胞，ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和ＰＡＩ活性扩散试验结果表明人ＰＡＩ—２ｃＤＮＡ可以在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中正确表达出ＰＡＩ—２蛋白，且具有抑制ＰＡ的活性，同时未能检测到ＮＩＨ３Ｔ３细胞表达ＰＡＩ—２蛋白质．为探讨ＰＡ—ＰＡＩ—２系统的调控机制打下基础．     

CTLL—2／MTT法快速测定IL—2基因转移效率的研究

应用包装ＩＬ－２基因的逆转录病毒载体，将ＩＬ－２基因导入小鼠成纤维细胞ＮＩＨ－３Ｔ３和小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，建立了ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－２，ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７和Ｂ１６／ＩＬ－２－４等３个转基因细胞株，应用ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法快速测定各转基因细胞株分泌上清ＩＬ－２的浓度．转染效率最高的ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７其ＩＬ－２分泌量高达１４２２ｕ／（１０６ｃ·２４ｈ），表明这一基因转移系统能有效地将外源基因导入靶细胞．ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法能快速、简便、有效地检测ＩＬ－２的表达．     

两种抑癌基因逆转录病毒载体的重组及包装

将两种分别含抑癌基因ｐ３５,Ｒｂ的逆转录病毒载体（ｐＢａｂｅ－ｎｅｏ）重组,并利用病毒包装细胞ＰＡ３１７对其进行包装,测得两种逆转录病毒ｐ３５－ｐＢａｂｅ－ｎｅｏ,Ｒｂ－ｂＢａｂｅ－ｎｅｏ的滴度分别为４．８×１０５ｃｆｕ／ｍＬ和１．３×１０５ｃｆｕ／ｍＬ,并证实这两种重组逆转录病毒具高效感染性．     

新荧光试剂1－（3－甲氧基水杨醛缩氨基）－8－羟基－3，6－萘二磺酸钠荧光熄灭法测定痕量铬（Ⅵ）

本文用荧光熄灭法研究了１－（３－甲氧基水杨醛缩氨基）８－羟基－３，６－萘二磺酸钠（ＭＳＨＮＤ）－Ｃｒ（Ⅵ）体系的测定方法及条件。在ｐＨ＝４．００的邻苯二甲酸氢钾缓冲体系中，检测限为０．７ｎｇ／１０ｍＬ，线性范围为３．０～２０．０ｎｇ／１０ｍＬ。本法灵敏度高、选择性好，简单快速，用于测定地表水中痕量Ｃｒ（Ⅵ），结果满意。     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取脾细胞,与Ｓｐ２／０ 细胞融合,获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后,复苏生长良好,分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中,所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ     

影响Px细胞微载体培养因素的研究

研究了细胞生长过程中微载体的种类、浓度及细胞接种量对培养Ｐｘ细胞的影响。以ＧＴ－３为微载体，当细胞接种量为２．０×１０＾５细胞／ｍＬ，微载体浓度为２．０ｍｇ／ｍＬ，温度为２８℃时，第６天细胞密度可达１．０×１０＾６细胞／ｍＬ，为接种量的５倍，细胞生长旺盛，形态正常。     

酶光度分析法测定痕量亚硫酸盐

在ｐＨ＝３．６的ＮａＡｃ－ＨＡｃ介质和亚硫酸盐氧化酶存在下，亚硫酸盐被氧化成ＳＯ４＾２－及Ｈ２Ｏ２，在过氧化氢氧化酶作用下，用３，３＇，５，５＇－四甲基联苯胺（ＴＭＢ）显色，在６５０ｎｍ波长下间接测定亚硫酸盐的含量，线性范围为０．１５～２０μｇ／ｍＬ，可用于食品中亚硫酸盐的测定。     

利用转座子Tn917构建杀虫Bt工程菌

利用链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）的转座子Ｔｎ９１７衍生载体ｐＴＶ１Ｔｓ将苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ）的２个杀虫晶体蛋白（ＩＣＰｓ）基因整合进Ｂｔ染色体上,转座频率达５９×１０－５．将对双翅目昆虫有毒效的ＩＣＰｓ基因ｃｒｙ１１Ａ和广谱溶细胞且对蚊子等有毒效的ｃｙｔ１Ａ基因分别克隆到ｐＴＶ１Ｔｓ上,用高压电激法转入对鳞翅目昆虫有毒效的库斯塔克亚种（Ｂｔｓｕｂｓｐｋｕｒｓｔａｋｉ）ＨＤ１菌株,分别筛选到在染色体基因组上整合进这２个基因的突变株ＨＴ２６和ＨＴ４５,整合基因均能在这２株工程菌中获得表达并形成正常的伴孢晶体．生物测定结果显示,表达的Ｃｒｙ１１Ａ和Ｃｙｔ１Ａ晶体蛋白有很高的杀虫活性,对库蚊三龄幼虫的ＬＣ５０分别为８３ｎｇ／ｍＬ和６４ｎｇ／ｍＬ,同时Ｃｙｔ１Ａ晶体蛋白对培养的昆虫细胞有较强的溶解作用．其结果为创造新型基因工程苏云金杆菌杀虫剂提供了新的重要途径     

简易氢化法测定人发中的痕量元素硒和砷

采用简易氢化法应用于电感耦合高频等离子体原子发射光谱仪（ＩＣＰ—ＡＥＳ）同时测定了人发中的痕量元素硒、砷，所用氢化物发生装置，具有结构简单、操作方便的特点。该方法的检出限为硒１．２ｎｇ／ｍＬ，砷１．０ｎｇ／ｍＬ，在１．０μｇ／ｍＬ浓度下，其相对标准偏差分别为３．９％和２．１％，回收率为９５．１％和９２．３％。应用于饮用水、茶叶等环境和生物样品中硒、砷的测定，均取得令人满意的结果。     

人生长激素诱导体外培养的大肠癌细胞株细胞周期动？…

研究人生长激素（ｈＧＨ）对大肠癌细胞增殖和分化的影响，收集人大肠癌细胞株Ｌｏｖｏ和ＬＳ－１７４－Ｔ（简称１７４），以顺铂和／或不同浓度的ｈＧＨ体外培养细胞，２４ｈ后以流式细胞仪测定细胞增殖周期等指标。结果显示ｈＧＨ能诱导１７４细胞Ｓ期数率非常显著地增高（Ｐ〈０．０１）；Ｌｏｖｏ细胞１００ｎｇ／ｍＬ组Ｇ０－Ｇ１期参数下降（Ｐ〈０．０５），Ｓ期参数增加（Ｐ〈０．０１），２００ｎｇ／ｍＬ组Ｇ２－Ｍ期百分     

氢化物—原子荧光法测定人血清中的硒

本文研究了用湿法消化样品，氢化物—原子荧光法测定人血清中硒含量最佳条件。线性范围０—４０．０ｎｇ／ｍＬ．检测限为１．０ｎｇ／ｍＬ相对标准偏差为３．５％，平均回收率为９８．２％。用该法对合肥地区２４１例正常人的血清硒水平做了检测评估。     

催化动力学光度法测定痕量铜

在ＨＡｃ－ＮａＡｃ介质中,以邻菲罗啉为活化剂,铜对抗坏血酸还原乙基橙具有强烈的催化作用,由此建立了测定痕量铜的催化动力学新方法,测定的线性范围为５～３０ｎｇ／ｍＬ,方法检出限为１．０ｎｇ／ｍＬ,直接用于人发中铜的测定,结果满意．     

热敏相分离模拟酶催化荧光免疫分析法测定乙肝表面抗原

以聚Ｎ－ 异丙基丙烯酰胺（ＰＮＩＰ） 作为免疫反应载体, 以铁酞菁作为ＨＲＰ的新型模拟酶来标记抗人ＨＢｓＡｇ 抗体, 建立了基于热相分离技术的夹心型荧光免疫分析ＨＢｓＡｇ 的方法． ＨＢｓＡｇ浓度在２０ ～５０００ｎｇ／ｍＬ范围与体系的相对荧光强度呈良好线性关系． 检测限８ｎｇ／ｍＬ．