VEGF 和 PCNA在乳腺癌组织中表达的意义

为了探讨血管内皮生长因子（VEGF）和增殖细胞核抗原（PCNA）在乳腺癌组织中的表达及其与病理学分级关系，采用免疫组织化学SP法检测102例乳腺癌及其中48例癌旁正常乳腺组织中VEGF和PCNA的表达，实验结果显示VEGF在乳腺癌组织中的阳性表达率为84．31％，癌乳腺组织中则为12．50％，两者间具有高度显著性差异（P＜0．01），PCNA在乳腺癌组织中的阳性表达率为78．43％，癌旁正常乳腺组织中则为8．33％，它们之间的差异有高度显著性（P＜0．01），VEGF和PCNA的阳性表达率与乳腺癌病理学分级呈正相关，说明VEGF和PCNA阳性表达作为乳腺 辅助诊断指标。     

乳腺癌中Fas抗原与C-erbB-2表达及其意义

目的检测乳腺癌中Fas抗原与C-erbB-2表达,探讨两者的相关性及与临床病理参数的关系.方法应用免疫组化SP法检测51例乳腺癌组织中Fas抗原与C-erbB-2表达,结果进行统计学分析.结果Fas抗原阳性率为56.9%,C-erbB-2阳性率为60.8%.结论Fas抗原与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移呈负相关;C-erbB-2与组织学分级、淋巴结转移呈正相关;Fas抗原、C-erbB-2检测对判断乳腺癌预后、淋巴结转移有重要意义.     

UFC1基因在乳腺癌细胞中的表达及意义

目的：泛素结合酶UFC1是一个新鉴定的类似泛素结合酶E2的基因,探讨UFC1基因在不同类型的乳腺癌细胞中是否表达及表达量情况.方法：分别应用RT-PCR法、Western-blot法检测分别检测一系列的乳腺细胞系MCF7、HBL100、MDA-MB231和MDA-MB-453中UFC1基因的表达水平,并进行比较.结果：在正常的HBL100乳腺细胞系中的表达最低,而在乳腺癌细胞系MCF7、MDA-MB231、MDA-MB-453中的表达明显增强,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论：UFC1在乳腺细胞系中的差异表达的结果为将UFC1作为新的靶分子引入乳腺癌的临床预防和治疗提供实验依据.     

RBBP10蛋白的表达纯化、多克隆抗体制备及乳腺癌中的免疫组织化学研究

在E．coli M15中表达RBBP10蛋白,经纯化后制备兔抗人RBBP10多克隆抗体,以免疫组织化学法检测RBBP10在15例人乳腺癌组织、5例乳腺小叶增生组织及2例正常乳腺组织中的表达情况结果显示：乳腺癌组织中,癌巢部分呈深棕色,提示RBBP10高表达,癌旁组织未着色;在乳腺增生组织中RBBP10在增生的乳腺上皮细胞中有低水平表达,而在正常乳腺组织中没有检测到RBBP10表达;检测发现RBBP10蛋白弥散分布于乳腺腺上皮细胞．研究结果提示RBBP10可能在乳腺癌发生和乳腺小叶增生中起一定作用．     

新疆维、汉民族乳腺癌中P53和Ki-67蛋白表达及其意义

用免疫组化Envision法检测125例维、汉民族乳腺癌中P53及Ki-67蛋白的表达。结果表明，P53及Ki-67蛋白在乳腺癌中的阳性表达率明显高于非癌组织；且在浸润性导管癌中P53和Ki-67蛋白阳性表达与分级、转移呈正相关，与民族无关。随组织学分级增高，P53及Ki-67阳性表达增高。淋巴结转移者P53及Ki-67蛋白阳性表达明显高于无淋巴结转移者。提示P53和Ki-67蛋白阳性表达可能在乳腺良性病变恶性转化及乳腺癌的发生中具有重要作用，有可能成为临床预测预后的重要指标之一。     

新基因Splt137在大肠杆菌中的表达及抗体制备

用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒 (SpltMNPV)ORF137全长基因 (Splt137)。将其克隆到原核表达载体pQE30上 ,并转化大肠杆菌M15 ,在IPTG诱导下表达了与预期相对分子质量相符的一个 2 7× 10 7的蛋白质 ,经过聚丙烯酰氨凝胶电泳纯化 ,免疫家兔制备了抗Splt137抗体。Western免疫印迹分析表明 ,该抗体适合用作Splt137蛋白的进一步分析。     

新生物活性肽-daintain/AIF-1在乳腺癌中的表达

采用免疫组织化学两步法分析了乳腺癌组织蜡块切片中daintain／AIF-1的表达．93％的乳腺癌中都有该活性肽的分布,癌旁良性组织中则没有阳性染色或染色很浅．Daintain／AIF-1在乳腺病变级别不同组织中的表达差异很大：增生组织免疫后着黄色,重度不典型增生组织着橙黄色,癌组织则染成了棕褐色．进一步用RT-PCR检测发现,乳腺癌新鲜组织中能扩增出daintain／AIF-1的mRNA,而癌旁良性乳腺组织中的daintain／AIF-1 mRNA极微量,几乎看不到扩增的核酸条带．这些研究表明,daintain／AIF-1在乳腺癌中过量表达,可能在乳腺肿瘤的发展过程起到了促进作用．因此,提示daintain／AIF-1可作为乳腺癌病变早期诊断的一个参考指标。     

乳腺癌患者p185蛋白的表达

目的探讨p185蛋白对乳腺癌的诊断意义.方法采用免疫组化方法对乳腺癌、乳腺增生患者乳腺组织进行p185蛋白检测.结果 30例乳腺癌组织p185蛋白表达,其中12例阳性,阳性率为40%,26例乳腺增生组织未发现p185蛋白表达.结论乳腺癌与乳腺增生组织p185蛋白的表达有显著差异(P<0.05),因此组织p185蛋白表达在鉴别乳腺癌和乳腺增生方面具有重要意义.     

乳腺癌Jab1蛋白调控Nov基因的表达受甲基化水平影响

为探讨癌基因Jab1在乳腺癌发生发展中的功能,首先在乳腺癌细胞MDA231中建立了慢病毒介导的Jab1基因的表达干扰系统,并通过人基因表达谱芯片分析结果以及实时定量PCR实验筛选出受Jab1调控的下游基因;此外,通过实时定量PCR以及Western blot实验证实Jab1干扰表达能降低Nov基因在转录和翻译水平表达,而且Nov启动子区域存在4个高甲基化CpG位点.进一步使用甲基转移酶抑制剂处理Jab1干扰表达细胞,发现与未使用抑制剂处理细胞相比,Nov基因的mRNA和蛋白质表达水平发生明显上调,说明Jab1基因调控Nov表达受甲基化水平的影响,提示Jab1可能是通过表观遗传学水平调控Nov基因的表达.     

PinX1基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

探讨了PinX1 基因在乳腺癌MCF-7 细胞生长和细胞周期中的作用, 初步探讨了该基因用于乳腺癌临床治疗的可行性. 采用RT-PCR 技术从293-T 细胞中扩增PinX1 基因, 将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1 中, 再将重组质粒转染MCF-7 细胞. 通过real-time PCR 检测PinX1 基因的mRNA 表达, 用MTT 法检测转染前后细胞生长曲线的变化, 用流式细胞仪检测转染目的基因后细胞生长周期的改变. 检测结果表明, PinX1 基因已经在转染后MCF-7 细胞的细胞核内稳定表达, 乳腺癌细胞生长明显减缓(P <0.05), 增殖变慢(P <0.05), 细胞生长阻滞于G0/G1 期, 说明PinX1 基因可抑制乳腺癌MCF-7 细胞的生长和增殖.     

HIV-1复合多表位基因的原核表达和多克隆抗体制备

为表达HIV-1复合多表位基因并制备其多克隆抗体.设计引物,以HIV-1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入大肠杆菌.将测序正确的p24MEG基因克隆入原核表达载体pET32a并诱导表达.采用Ni2 -NTA亲和柱纯化目的蛋白,以p24抗体对纯化蛋白进行Western-blot分析.将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体.通过PCR成功获得长度为651 bp的HIV-1的p24片段,获得了与多表位基因连接后的p24MEG基因,通过诱导表达,显示在相对分子量约45 000处有预计大小的特异性条带,表明成功表达出融合蛋白.经此纯化的融合蛋白免疫的家兔能产生特异性抗体,其滴度达到1:3 200.纯化的融合蛋白和多克隆抗体为研究新型HIV疫苗奠定一定的理论和实践基础.     

乳腺癌中CyclinB1表达及临床病理意义

目的:研究细胞周期蛋白B1、癌基因C-erbB-2和雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)在乳腺癌中的表达情况及临床意义.方法:采用S-P免疫组化方法对65例乳腺癌组织和15例乳腺纤维瘤组织进行cy-clinB1、C-erbB-2和ER、PR表达的联合检测.结果:乳腺癌组织中CyclinB1过阳性表达率为84.62%(55/65);乳腺纤维瘤组织CyclinB1表达率为13.3%(2/15);淋巴结转移患者CyclinB1蛋白的过阳性表达率明显高于淋巴结阴性患者;CyclinB1的表达与C-erbB-2表达具有相对的一致性,CyclinB1的阳性高表达伴随ER表达降低,但与PR的表达无显著相关性.结论:CyclinB1的过表达与乳腺癌的发生、发展相关,过表达cy-clinB1可为乳腺癌早期诊断和生物学行为的判断提供帮助.CyclinB1与C-erbB-2和ER、PR的联合检测有利于指导乳腺癌的化疗和判断预后.     

Xenorhabdus nematophila BP品系xptB1基因的克隆和序列分析

采用PCR方法,从该室构建的Xenorhabdus nematophila BP品系粘粒文库的一个对棉铃虫有强口服杀虫活性的粘粒cos83中扩增出全长的xptB1基因,将扩增片段回收纯化后,连接到pMD-18T载体,转化大肠杆菌TG1后进行序列测定和分析。结果显示,该基因全长为3051bp,编码1016个氨基酸,其编码的毒素BP XptB1与X.nematophila PMF1296品系的XptB1的氨基酸序列同源性平均为95.8%,两侧高度一致,中间第607—738位差异明显。结构分析显示,两者在跨膜区,α螺旋等方面也有差异。BP XptB1与Photorhabdus luminescens的TccC毒素,Serratia entomophila的SepC,以及Yersinia pseudotubercusis和Y.pestis等的杀虫毒素均有58%以上的同源性。分析结果预示了XptB1可能是一个杀虫毒素。     

人类新基因CHID1的克隆与功能初步研究

使用生物信息学手段,从人公共蛋白质数据库的蛋白质序列中筛选到新的分泌蛋白基因CHID1(Chitinase domain containing 1),该基因定位于人11号染色体短臂15区5带(11p15.5),cDNA长1 182 bp,其编码蛋白共有393个氨基酸。转染COS-7细胞后Western blot实验显示:在细胞培养液中没有检测到CHID1蛋白。对CHID1基因在mRNA水平上进行组织分布考察发现:它在肺、肾、肝、心、胸腺中都有表达,肝中最高。细胞生长曲线揭示,Lovo-CHID1稳定细胞株有生长抑制的现象,而细胞周期分析发现细胞株在G1期发生阻滞。这表明CHID1有可能是个潜在的抑癌基因。     

人甲状旁腺素的基因表达及活性的初步研究

从人甲状旁腺瘤组织中分离到ｍＲＮＡ,逆转成ｃＤＮＡ后,设计带有突变碱基的引物,通过聚合酶链式反应,扩增ｈＰＴＨ基因,使Ｎ端前５氨基酸的碱基富含腺嘌呤核苷（Ａ）．将该基因克隆到表达载体ＰＥＴＩＣ上,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）表达,实验证实ｈＰＴＨ的表达量占菌体蛋白总量的１１％;细胞粗步处理产物经腺苷环化酶的生物鉴定实验证实,重组ｈＰＴＨ具有生物活性,粗产物５００倍稀释后,ｈＰＴＨ的放免活性为２０６．５ｎｇ／Ｌ,为对照的４１５倍     

BP网络研究及其在肺癌诊断系统中的应用

以三层BP网络为例,讨论了网络的学习算法,并在VC 6.0语言环境下编制了BP算法程序,在这个基础上建立了基于BP网络的肺癌智能诊断系统,深入研究BP网络在实际应用中的结构设计、参数选择和样本数据的来源,应用含有动量参数的BP算法训练网络,并给出了BP算法动态演化过程的训练调试界面和临床测试界面.目的是用训练好的BP网络来识别肺癌细胞的病变情况,实验表明神经网络能够对细胞图像进行正确的分类,证明了该系统对肺癌诊断具有可行性.     

乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达检测及其临床意义的研究

目的探讨锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)在乳腺癌患者和正常人外周血中的表达差异及其临床意义.方法采用实时荧光定量PCR方法检测218例乳腺癌患者和77例正常女性外周血中MnSOD基因表达水平,并进行分析.结果乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达水平为4.38±0.74,正常女性外周血中MnSOD基因表达水平为4.16±0.64,P0.001,有统计学意义.淋巴转移患者组和临床早期患者组与正常女性组比较,P0.001.结论淋巴转移和临床早期乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达水平显著低于正常女性,提示MnSOD的低表达与肿瘤的发生和发展有关.应用荧光定量PCR方法检测外周血MnSOD基因水平对监测乳腺癌有一定意义.     

CYP1A1基因Ile-Val和Msp1位点多态性与结直肠癌易感性研究

目的探讨细胞色素P450(CYP1A1)基因异亮氨酸(Ile)-缬氨酸(Val)位点和Msp1位点多态性和结直肠癌的相关关系.方法以病例对照的研究方法,采用PCR-RFLP和AS-PCR技术检测79例结直肠癌和110例对照者的CYP1A1基因Ile-val位点和Msp1位点多态性.结果 Ile-Va三种多态基因型在结直肠癌组和对照组分布差异有显著性(P<0.05),Ile/Val,Val/Val基因型在结直肠癌组的分布频率明显高于对照组;Ile/Val,Val/Val基因型患结直肠癌的危险分别是Ile/Ile基因型的2.113倍和4.203倍;当按吸烟分层后(将Ile/Val,Val/Val基因型合并分析),吸烟组中Ile/Val、Val/Val合并基因型患结直肠癌的危险是Ile/Ile基因型的2.98倍(P<0.05);Msp1位点多态性在结直肠癌和对照组差异无统计学意义.结论 CYP1A1第7外显子的Ile/Val,Val/Val基因型与结直肠癌的易感性有关,突变基因型增加了结直肠癌的患病风险;尚不能认为Msp1多态性与结直肠癌的易感性有关.     

布鲁氏菌bp26基因的原核表达及BP26-间接ELISA方法的初步建立

为了表达并纯化布鲁氏菌BP26蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。方法：从布鲁氏菌疫苗株M5—90克隆bp26基因,在大肠杆菌E．coli B121（DE3）中表达,纯化BP26蛋白,进行SDS．PAGE、Western—blot检测,将纯化的BP26蛋白包被ELISA板,建立检测布鲁氏菌病的间接ELISA方法,用该方法检测42份绵羊血清,结果与标准试管凝集试验（SAT）进行比较。结果显示：正确表达并纯化了BP26蛋白,布鲁氏菌标准试管凝集试验检测的阳性率为30．85％（13／42）;间接ELISA方法检测的阳性率为35．71％（15／42）,二者阳性符合率为86．67％（13／15）。结论表达、纯化的BP26蛋白能够与布鲁氏菌阳性血清特异性结合,建立的ELISA方法比SAT方法更敏感。为以后M5-90疫苗株bp26基因缺失苗的应用提供配套性血清学检测奠定基础。