成都地区60株铜绿假单胞菌中第I类整合子的鉴定及特性分析

采用两种PCR法(整合酶PCR法和长片段整合子PCR法)检测60株成都地区4家医院分离的铜绿假单胞菌的第Ⅰ类整合子,并对扩增产物进行序列分析.对60株铜绿假单胞菌第Ⅰ类整合酶基因的检测,发现有28株扩增结果为阳性(46.7%),所扩增片段的大小为110 bp.测序结果与GenBank中已报道的ⅠntI1基因核酸序列同源性为100%.长片段PCR法扩增Ⅰ类整合子的可变区,60株铜绿假单胞菌中有18株检测到不同大小的Ⅰ类整合子基因盒,占标本总数的30.0%.插入的基因盒大小从300 bp到超过2000 bp不等,18株整合子阳性菌中,有两株菌同时含有2种大小不同的整合子.序列分析结果表明,菌株R03的1900 bp 整合子携带aacA4基因盒,菌株W13的1900 bp整合子中含dfr17和aadA5基因盒.     

肺炎克雷伯菌第1类整合子的鉴定和耐药性分析

目的 了解来源于不同临床标本的肺炎克雷伯菌的耐药性、携带第1类耐药整合子的特征及基因盒的种类.方法 使用常规方法分离肺炎克雷伯菌;运用法国梅里埃VITEK细菌分析系统进行鉴定;应用纸片扩散法对15种抗生素进行耐药性监测和分析;应用PCR法扩增第1类整合子;对PCR产物纯化、测序,并对结果进行分析.结果 来源于不同临床标本的64株肺炎克雷伯菌100%耐药,32株(50%)表现多重耐药,9株耐4种抗生素,耐药谱为氨苄西林-链霉素-复方新诺明-四环素;20株(31.2%)为第1类整合子阳性株,其中17株整合子大小为1.0 kb,2株为1.6 kb,1株含有1.0 kb和1.6 kb两个整合子;PCR产物测序显示1.0 kb整合子携带pse-1-aadA1基因盒,1.6 kb整合子插入了pse-1-aadA2,pse-1-aacA1基因盒,双重整合子株插入了pse-1-aadA1和pse-1-aacA1基因盒.结论 第1类整合子存在于各种临床标本分离的肺炎克雷伯菌中,且与多重耐药性相关,主要决定着对β内酰胺类和氨基糖苷类抗生素的耐药性.     

一株新铜绿假单胞菌噬菌体SRT6的分离以及全基因组序列分析

分离一株新铜绿假单胞菌噬菌体,进行生物学特征分析,全基因组测序和比较基因组学分析.了解该噬菌体与其他假单胞菌噬菌体之间的亲缘关系以及它的潜在应用价值.利用双层平板法分离纯化噬菌体,利用酚氯仿抽提基因组,利用Illumina Hiseq测序平台对基因组测序,利用生物信息学进行基因组和比较基因组学分析.分离到一株新的烈性铜绿假单胞菌噬菌体SRT6,其基因组全长91 364bp,G+C含量49.3%,存在182个蛋白质编码基因,其中的96个与已知功能的蛋白质具有相似性,无tRNA和tmRNA.比较基因组分析发现,噬菌体SRT6属于一个新物种.分离鉴定出一株烈性铜绿假单胞菌噬菌体SRT6,并发现它属于一个新种噬菌体,为未来利用噬菌体治疗耐药铜绿假单胞菌感染打下坚实的基础.     

540株铜绿假单胞菌12年耐药情况分析

目的：分析导致临床感染的540株铜绿假单胞菌的临床特点及耐药情况,为临床预防感染及合理用药提供依据。方法：回顾性分析12年来540株铜绿假单胞菌的耐药情况。结果：住院患者铜绿假单胞菌检出率明显高于门诊患者,且以重症病房（ICU）尤为显著;下呼吸道感染是主要的临床感染来源;中老年人及慢性病患者,重症患者为易被侵袭人群;铜绿假单胞菌对多数抗生素有较高的耐药性及多重耐药性,且耐药性有逐年上升的趋势。结论：铜绿假单胞菌是临床常见条件致病菌,耐药性严重。治疗中应根据分离株耐药特点选择合理用药方案,避免多重耐药铜绿假单胞菌的出现。     

重症监护室非发酵菌的检出率及其耐药性分析

目的:回顾性分析某医院重症监护室(ICU)2010年1月1日-2010年12月31日之间感染病原菌中非发酵菌的分布及其耐药情况。方法:用VITEK-32仪鉴定细菌,K-B纸片扩散法做体外药敏试验,统计、分析非发酵菌的检出率和药敏结果。结果:560份ICU标本,医院感染分离菌株335株。其中,非发酵菌181株。非发酵菌的阳性检出率为32.32%,其中,铜绿假单胞菌最为常见(65株,19.40%),其次为鲍曼不动杆菌(53株,15.82%)、洋葱假单胞(31,9.25%)和嗜麦芽窄食单胞菌(28,8.36%)。分离菌中标本来源以口痰最常见,其次为静脉导管、静脉血和胸腹水。铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、洋葱假单胞和嗜麦芽窄食单胞菌对多种抗菌药物均具有较高的耐药性。结论:医院感染病原菌中非发酵菌的检出率较高且耐药性强;治疗非发酵菌感染应根据体外药敏试验结果选用敏感的抗菌药物,以减低耐药率。     

双重PCR法快速检测欧鳗鲡嗜水气单胞菌

采用已知的嗜水气单胞菌编码溶血素(Hemolysin)和外膜蛋白(Ompts)的基因序列为目的基因,依据其保守序列设计两对相应引物,用双重PCR方法检测了32株从发病欧鳗鲡分离的细菌,将检测结果与试剂盒快速生化鉴定结果进行比较.以嗜水气单胞菌为阳性对照,以大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞菌、鳗弧菌、溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌为阴性对照检测了嗜水气单胞菌溶血素与外膜蛋白基因的特异性.结果表明:被检测的32株欧鳗鲡致病菌中,检测到的4株既有溶血素基因又有外膜蛋白基因的细菌,其生化鉴定结果全部为嗜水气单胞菌,而仅具有外膜蛋白基因的13株细菌中只有5株生化鉴定结果为嗜水气单胞菌.证明双重PCR法可用于快速检测部分嗜水气单胞菌.     

烧伤病房感染患者铜绿假单胞菌的分离及耐药性分析

目的 了解烧伤病房感染患者铜绿假单胞菌耐药谱的变化,为防治烧伤病区患者感染铜绿假单胞菌提供合理用药依据.方法 常规方法收集同一时间烧伤病房9名感染患者的患部浓汁和血液标本,分离鉴定出9株铜绿假单胞菌,K-B法进行药敏试验及统计学分析.结果 9株铜绿假单胞菌对氨苄西林、哌拉西林、亚胺培南/西司他丁、头孢他啶、氨曲南、阿米卡星、复方磺胺等11种抗菌药物耐药率均为100%.结论 烧伤病房感染患者铜绿假单胞菌耐药现象严重,应注意铜绿假单胞菌耐药性的监测.     

铜绿假单胞菌多重耐药性分子机制的研究

铜绿假单胞菌是重要的医院感染条件致病菌.由于各种抗生素的广泛使用,细菌耐药问题日趋严重,导致了铜绿假单胞菌产生了很强的耐药性而且多重耐药,铜绿假单胞菌通过多种途径产生耐药.而从分子水平对其耐药性机制进行研究具有重要意义.     

标本中铜绿假单胞菌的临床分布及耐药情况

目的分析我院铜绿假单胞菌临床分布及耐药情况,为临床合理选用抗生素提供依据。方法采用K-B纸片扩散法对临床分离的铜绿假单胞菌进行抗生素敏感性测定,对检测结果进行对比统计分析。结果分离出的27株铜绿假单胞菌主要来源于痰,临床主要分布于脑外科与呼吸内科,对铜绿假单胞菌保持抗菌活性较强同时耐药率<30%的抗生素有亚胺培南(IPM),阿米卡星(AMK),头孢他啶(CAZ),左氧氟沙星等,但复方新诺明(SXT)耐药率为92.6%,头孢噻肟耐药率为60.6%,原来被认为抗铜绿假单胞菌较为有效的头孢呱酮耐药率也升至60.0%。结论铜绿假单胞菌对常用抗生素耐药率高,建议根据药敏结果,采用有效药物单一或联合疗法,以控制细菌耐药性的增长。     

铜绿假单胞菌的耐药现状及外膜孔蛋白分析

目的:总结分析我院2007年-2009年铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药状况,以指导临床合理选用抗生素,同时探讨外膜孔蛋白缺失介导的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制.方法:采用PCR方法检测外膜孔蛋白OprD的编码基因,利用Whonet 5.4 软件对药敏资料进行统计分析.结果:3年中铜绿假单胞菌每年的分离数量分别为13...     

铜绿假单胞菌的分布及耐药分析

目的：分析江汉大学附属医院病人铜绿假单胞菌的耐药率,指导临床用药.方法：对2009年1月-2010年12月临床分离的138株铜绿假单胞菌进行回顾性分析,采用WHONET 5.4软件统计耐药率.结果：铜绿假单胞菌在呼吸道标本中的检出率最高,占86.9％;对阿米卡星(87.0％)、头孢哌酮/舒巴坦(83.8％)、头孢吡肟(...     

中草药对铜绿假单胞菌及其群体感应抑制作用

为了筛选对多重耐药铜绿假单胞菌具有抑菌作用的中草药,并筛选铜绿假单胞菌的群体感应蛋白LasR的抑制剂,本实验利用纸片扩散法对59株临床分离的铜绿假单胞菌和1株PAO1进行抗生素药敏试验,并对其中3株菌进行中草药提取物体外抑菌试验,通过检测报告质粒中β-半乳糖苷酶的活性来筛选LasR蛋白抑制剂。实验发现,丁香、赤芍等中药粗提物具有良好的抑菌效果,部分中草药可通过影响LasR蛋白的水溶性或信号分子与受体蛋白的结合来实现对细菌群体感应的调控。     

肾移植术后感染致病菌的整合子分类及耐药分析

目的:探讨肾移植患者病原菌的整合子基因分类与耐药的相关性,以期控制和预防院内感染,合理使用抗生素。方法:收集我院19例肾移植患者的19株细菌培养结果和药敏试验的资料,用多重PCR方法进行病原菌整合子的基因检测,并用K-B法与M IC法对其进行药敏分析。结果:①19株致病菌在体外药敏实验中都对抗生素产生严重的多重耐药。②产整合酶基因的菌株共12株,占63%;其中革兰阳性球菌3株,占25%;革兰阴性杆菌9株,占75%;其中2株为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCON),4株为产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的大肠杆菌,1株为产ESBL的肺炎克雷伯菌,其余为肠球菌1株、肠杆菌3株和洋葱伯克霍尔德菌1株。③产整合酶均为Ⅰ类整合酶,其中检测出耐药基因盒为1 009 bp的5株,1 664 bp 1株。结论:肾移植患者的病原菌都存在严重的多重耐药性并与整合酶基因有密切相关。对肾移植患者病原菌进行整合酶基因与药敏分析是控制和预防病区交叉感染、合理使用抗生素治疗多重耐药细菌,降低病死率的关键因素。     

多重耐药鲍曼不动杆菌携带金属酶与整合酶基因特征及同源性分析

目的了解吉林地区多重耐药鲍曼不动杆菌(Multidrug-resistant Acinetobacter baumanni,MDRAB)金属酶与整合酶基因的类型,并对菌株进行同源性分析.方法收集吉林地区2所三级甲等医院临床标本分离鉴定的鲍曼不动杆菌38株.多重耐药株携带金属酶的初筛实验-双纸片协同试验:金属酶与整合酶基因的检测-聚合酶链反应(PCR),并对其进行同源性分析.结果在所有MDRAB菌株亚胺培南-EDTA协同试验中,15株(39.4%)阳性,16株(42.1%)携带整合酶基因Ⅰ,2株(5.2%)携带整合酶基因Ⅱ,2株(5.2%)携带blaVIM型金属酶基因,1株(2.6%)携带blaNDM-1型金属酶基因,未检测出金属酶基因blaIMP,blaSIM-1和整合酶基因Ⅲ.结论该地区临床分离的MDRAB耐药率高,可能与其携带金属酶基因和整合酶基因有关,A型MDRAB为医院感染主要流行株.     

150株铜绿假单胞菌的细菌分布及耐药分析

目的探讨150例铜绿假单胞菌的细菌分布及耐药性,为临床监测和控制感染提供依据。方法BIOMERIEAX公司的全自动细菌鉴定仪V1TEK2-COMPACT鉴定。结果铜绿假单胞菌在儿科ICU的检出率和脑外科ICU的检出率最高分别为28％和41％。铜绿假单胞菌对哌拉西林的耐药率为93．3％。对头孢哌酮一舒巴坦的敏感率为100％。结论建议临床合理运用抗生素,控制耐药菌的传播避免医院感染。     

临床分离铜绿假单胞菌病区分布及耐药性分析

目的:了解铜绿假单胞菌各病区分布情况及耐药性变迁,预防和控制院内感染的发生,减缓耐药菌株的出现,延长现有抗生素的使用期限。结果:临床分离铜绿假单胞菌103株,38株来自呼吸科,81株来自痰标本,产金属酶的有7株,占分离菌株的6.8%,其中4株分离自神经外科昏迷伴器官切开的患者痰液中,3株分离自ICU病房。结论:分离的铜绿假单胞菌科室以呼吸科居多,标本类型以痰居多;耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对许多抗生素的耐药率均高于敏感株。     

标本中铜绿假单胞菌的临床分布及耐药情况

目的分析我院铜绿假单胞菌临床分布及耐药情况,为临床合理选用抗生素提供依据。方法采用K-B纸片扩散法对临床分离的铜绿假单胞菌进行抗生素敏感性测定,对检测结果进行对比统计分析。结果分离出的27株铜绿假单胞菌主要来源于痰,临床主要分布于脑外科与呼吸内科,对铜绿假单胞菌保持抗菌活性较强同时耐药率〈30%的抗生素有亚胺培南（IPM）,阿米卡星（AMK）,头孢他啶（CAZ）,左氧氟沙星等,但复方新诺明（SXT）耐药率为92.6%,头孢噻肟耐药率为60.6%,原来被认为抗铜绿假单胞菌较为有效的头孢呱酮耐药率也升至60.0%。结论铜绿假单胞菌对常用抗生素耐药率高,建议根据药敏结果,采用有效药物单一或联合疗法,以控制细菌耐药性的增长。     

110株铜绿假单胞菌的来源分布及耐药性分析

目的 :分析 110株铜绿假单胞菌的临床来源分布及耐药现状 ,为临床预防感染及合理用药提供依据。方法 :回顾性分析近 3年来从各类标本中分离到的铜绿假单胞菌 ,采用K -B法进行药敏试验。结果 :从痰、脓性分泌物、胸腹水、尿液、血液中均分离出铜绿假单胞菌 ,病人多为呼吸内科患者及术后感染者 ;对氟喹诺酮类 ,丁胺卡那、三代头孢及泰能耐药性低 ,对氯霉素、庆大霉素及青霉素类药物耐药性高。结论 :铜绿假单胞菌呈多分布及多重耐药 ,应加强消毒防御 ,控制其感染发生 ,并应在药敏试验结果指导下进行治疗     

铜绿假单胞菌医院感染流行病学分子研究及基因分型

目的建立随机扩增多态性DNA（RAPD）基因分型方法检测铜绿假单胞菌（PA）,调查铜绿假单胞菌医院感染流行病学的情况,为控制院内感染提供直接可靠的参考依据。方法对2008—2009年分离的180株铜绿假单胞菌进行统计分析其临床分布;通过抗生素敏感性试验进行抗菌谱分型;再采用PAPD基因分型方法进行分析。结果标本主要来自ICU、烧伤科、呼吸内科等。从痰液标本中分离的铜绿假单胞菌占58．9％,其次伤口分泌物标本占18．9％、中段尿16．7％,其它类型标本占5．5％。抗菌谱分型分为5型。180株铜绿假单胞菌用RAPD分型共得178株,分型率98．9％（178／180）,分为9种类型：Ⅰ～Ⅸ。结论RAPD分型技术对铜绿假单胞菌临床分离株分型率较高;同一抗菌谱型的基因型可能不同,同一基因型的抗菌谱也可能不同。     

铜绿假单胞菌耐药机理

铜绿假单胞菌是耐药性十分突出的一类院内感染条件致病革兰氏阴性细菌．本文从生物被膜、细胞密度依赖式毒力因子、外排系统、基因盒一整合子系统及铜绿假单胞菌噬菌体几方面对其耐药性机理进行了概述，并提出了未来对微生物耐药性研究和应用的一些策略。