抗CD71人-鼠嵌合抗体的制备及其诱导肿瘤细胞凋亡

目的 :研究在液氮中冻存 2年的转染瘤细胞株 (D2C)复苏后其分泌抗CD71人 -鼠嵌合抗体的特异性、分泌量及诱导肿瘤细胞凋亡的效应。方法 :用ELISA方法检测转染瘤细胞培养上清的抗体分泌量。经DEAE SephadexA 5 0离子交换法纯化产生的抗体 ,并采用SDS PAGE电泳鉴定 ;台盼蓝拒染法观察其对K5 6 2细胞生存的影响 ;细胞计数和MTT试验测定嵌合抗体及鼠源性抗体对K5 6 2细胞的作用 ;琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察K5 6 2细胞凋亡。结果 :Balb/c裸鼠腹腔接种转染瘤细胞后 ,每只裸鼠腹水量在 3～ 5mL。抗体经纯化 ,产量约为 1～ 2mg/mL腹水。经SDS PAGE电泳鉴定 ,在分子量 5 5kD和 2 7kD处 ,可见有抗体IgG重链和轻链的染色条带。抗CD71嵌合抗体及鼠源性抗CD71抗体均可抑制K5 6 2细胞的增殖作用 ,且二者抑制作用无显著性差异 (P >0 .0 5 )。经琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察分别可见抗体诱导的K5 6 2细胞DNA梯形条带和细胞凋亡的形态改变。结论 :液氮中冻存 2年的转染瘤细胞体外生长良好 ,抗体分泌稳定 ,特异性高 ,并可诱导K5 6 2人红白血病细胞凋亡     

HMBA诱导红白血病细胞分化作用的研究

目的：研究HMBA对红白血病细胞的抑制及诱导分化作用．方法：绘制HMBA作用下的红白血病细胞生长曲线，计数其分裂指数，联苯胺染色法检测其分化百分率．结果：红白血病细胞在HMBA作用下增殖能力下降，分裂指数减低，联苯胺染色阳性率为76％．结论：HMBA能抑制红白血病细胞生长繁殖并可诱导其分化．     

土贝母苷甲诱导人红白血病细胞K562凋亡

用MTT法检测苷甲对K562细胞生长的抑制作用,分别采用形态学方法(光学显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜)检查在苷甲作用下K562细胞形态的变化以及用流式细胞术观察在苷甲作用下K562细胞凋亡及周期变化的情况.结果显示:苷甲抑制K562细胞的生长,其24、48、72h的IC50值分别为19.7、18.5、15.9μmol/L.苷甲诱导K562细胞出现典型凋亡细胞的形态学特征.20μmol/L苷甲作用K562细胞6 h,流式细胞仪即检出亚倍体峰,G2/M期细胞增多.随着作用时间延长,细胞被阻滞于G2/M期更加明显,细胞的凋亡率也增加.该实验证明:苷甲能抑制K562细胞的生长,把细胞阻滞在G2/M期并诱导细胞发生凋亡.     

吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶对K562细胞增殖的影响

应用MTT实验、细胞计数法检测吲哚乙酸结合辣根过氧化物酶,流式细胞仪(FCM)和DNA末端标记法(TUNEL)检测IAA/HRP对细胞增殖周期和细胞凋亡的作用,研究了吲哚乙酸(indole-3-acetic acid IAA)结合辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase HRP)对K562细胞增殖的影响.结果表明,与对照组相比,IAA和HRP单独处理组对K562细胞的生长具有部分抑制作用,但无显著性差异;而IAA与HRP结合后对K562细胞的抑制作用明显增强.流式细胞仪检测结果表明,K562细胞阻滞于G2/M期.IAA/HRP具有明显的诱导K562细胞凋亡的作用,且诱导凋亡的作用与IAA浓度呈正相关(r=0.971,P<0.01).IAA/HRP能明显抑制K562细胞生长,将细胞周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡.     

福司可林(FSK88)对HL60细胞抑增殖促分化的实验研究

研究了诱导分化剂FSK88对人白血病HL60细胞的抗肿瘤作用，将HL60细胞培养在含不同浓度FSK88的RPMI1640培养液中，测定FSK88对HL60细胞生长曲线、NBT阳性率、ANAE酶活性的影响，探讨了FSK88对HL60细胞裸鼠异种移植瘤体内抗肿瘤作用。结果表明，FSK88能诱导HL670细胞向单核／巨噬细胞方向分化，表现为生长抑制，NBT还原能力提高，酸性非特异性酯酶（ANAE）活性增加；流式细胞仪检测表明FSK88对HL60的诱导作用与细胞所处细胞周期的变化无明显相关性；FSK88可以有效的抑制白血病HL60的致瘤力，可见FSK88能抑制人白血病细胞的生长，促使其进入终末分化及凋亡。     

石蒜碱诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

为研究石蒜碱诱导白血病K562细胞凋亡机制,采用体外细胞培养方式,通过CCK-8法描绘细胞生长曲线,测定细胞增殖活性,CCK-8结果显示石蒜碱能够抑制K562细胞生长,且呈现剂量依赖性,其IC50=4.13μmol/L.倒置显微镜进行细胞形态学观察,石蒜碱作用细胞后,细胞形态学发生改变.PI单染法检测细胞凋亡率,数据显示,石蒜碱诱导K562细胞的凋亡率与给药剂量呈正相关.Western-blot法检测P53蛋白表达情况,随着石蒜碱浓度的增加,P53活性增强(P0.05).结果显示,石蒜碱抑制白血病K562细胞增殖,诱导细胞凋亡,其凋亡诱导作用可能与细胞内P53基因的表达有关.     

C_2-神经酰胺对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的:研究C2-神经酰胺(C2-cer)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA)和离子霉索(Ion)进行刺激,以不同终浓度的C2-cer与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModFit软件分析T细胞增殖相关指数.结果:终浓度为25、50和75 μmol/L的C2-cer可以显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的(60.13±1.18)%,分别降低为(54.56±1.14)%、(48.73±1.26)%和(27.09±1.07)%(P＜0.01);CFDA-SE染色结果显示,各浓度C2-cer对ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用,增殖指数(PI)由ConA组的(1.81±0.25),分别降低为(1.46±0.01)、(1.25±0.04)和(1.18±0.03)(P＜0.05);各浓度C2-cer均可明显抑制PMA+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,增殖指数(PI)由PMA+Ion组的(1.47±0.01),分别降低为(1.27±0.01)、(1.11±0.01)和(1.05±0.01)(P＜0.05).结论:C2-cer能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖.     

几种新的植物甾醇类衍生物对人类癌细胞系增殖的影响

探讨几种新的植物甾醇类衍生物抑制人肝癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7生长及诱导其凋亡的生物学效应.采用形态学观察,溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)还原法和流式细胞仪(FCM)检测3种新的植物甾醇衍生物在不同作用时间、处理浓度时,对HepG2和 MCF-7细胞生长的影响.实验结果表明: 3种新的植物甾醇衍生物对2种细胞系的生长具有明显抑制作用,且呈现一定的对浓度和时间的依赖效应,并具有诱导细胞凋亡的功能.     

砷对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

通过砷(Arsenic)干预3T3-L1前脂肪细胞观察其对该细胞增殖和分化的影响。用药物对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,采用油红O染色方法对脂肪细胞进行鉴定;然后用MTT和细胞计数器检测正常组和砷染毒组3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,并筛选合适砷浓度;正常组和砷染毒组3T3-L1前脂肪细胞,诱导分化为脂肪细胞,提取油红O染液,通过比色定量分析检测两组3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的堆积,检测砷对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果显示:低浓度砷(5μmol/L以下)对3T3-L1前脂肪细胞的生长表现为促进趋势,相反,高于此浓度时抑制其细胞的增殖;不同浓度砷对3T3-L1前脂肪细胞分化表现为抑制趋势并呈一定的量效关系,和对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。由此得出以下结论:低浓度砷(5μmol/L以下)可以促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖,高浓度砷抑制其增殖;不同浓度砷对3T3-L1前脂肪细胞的分化都产生抑制作用。     

不同浓度血红蛋白对小鼠骨髓瘤细胞体外培养的影响

用含不同浓度的牛源性血红蛋白细胞培养液培养小鼠骨髓瘤细胞,通过细胞计数绘制生长曲线,计算最大增殖浓度和倍增时间,并进行比较分析.结果表明:当培养液的血红蛋白浓度在1~5 mg/dL时小鼠骨髓瘤细胞生长较好,细胞最大增殖浓度在1.2×106个/mL以上,倍增时间小于20 h,当培养液的血红蛋白浓度为6 mg/dL时细胞生长抑制,细胞最大增殖浓度和倍增时间为6.7×105个/mL和21.6 h.由此可见,培养液中血红蛋白浓度≤5 mg/dL时不影响细胞生长,达到6 mg/dL时抑制细胞生长.     

小鼠胸腺瘤细胞程式死亡调控的初步研究

通过对小鼠胸腺瘤细胞的筛选,获得了具T_(cR)V_~+CD4~+CD_~+表型的CD11.3-D_2细胞株,钙离子载体lonomycin能够诱导其死亡,而抗CD_3单克降抗体却不能介导它死亡,CD11.3-D_23细胞可作为研究细胞程式死亡(Programmed Cell Death)机理和胸腺细胞发育分化机理的体外模型.     

Exfoliazone通过诱导细胞凋亡抑制HepG2细胞体外增殖

探讨Exfoliazone对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响.采用细胞培养技术,用不同浓度的药物在一定的时间内处理细胞株,应用MTT比色法检测Exfoliazone对HepG2细胞体外生长的抑制作用;4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染料染色,显示凋亡细胞形态;用Western-Blotting检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白的表达;Annexin V/PI双染检测Exfoliazone对HepG2细胞凋亡的影响.Exfoliazone可抑制HepG2细胞的生长,并呈现剂量和时间的抑制,在药物处理24、48和72 h后,半数细胞抑制浓度(IC50)分别为35、16 和8 μmol/L.进一步研究表明,Exfoliazone可诱导PARP切割,细胞出现核质浓集和凋亡小体等典型的凋亡形态学特征,Annexin V/PI染色证实Exfoliazone能诱导HepG2细胞凋亡,并且以早期凋亡为主.Exfoliazone可能通过诱导HepG2细胞凋亡抑制癌细胞的生长.     

中药喘可治注射液对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制.方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20 μL/mL)孵育4 h后, 加入过氧化氢(H2O2)、放线菌酮(CHX)、环磷酰胺(CTX)诱导细胞凋亡,荧光酶标仪结合Sytox Green染色检测细胞凋亡;加药孵育4 h后,加入细菌脂多糖(LPS,终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后Grass试剂盒检测巨噬细胞NO的量;加药孵育4 h后,加入LPS(终质量浓度10 μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后流式细胞仪结合Cytometric Bead Array(CBA)技术检测细胞因子的释放.结果:CKZ能抑制H2O2、CHX、CTX诱导的细胞凋亡;促进非刺激状态下巨噬细胞NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α 5种细胞因子的产生, 抑制LPS和IFN-γ刺激的NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生.结论:CKZ可抑制巨噬细胞凋亡,并对巨噬细胞NO的分泌和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的生成具有双向调节作用.     

HMBA单独或与HMBPA联合作用对MELDS19细胞生长及分化影响的研究

目的研究HMBA单独或与HMBPA联合作用对MELDS19细胞的抑制及诱导分化作用.方法绘制HMBA单独或与HMBPA联合作用下的MELDS19细胞生长曲线,联苯胺染色法检测其分化百分率,成集落实验检测细胞增殖情况.结果 MELDS19细胞在HMBA与HMBPA联合作用下增殖能力下降,联苯胺染色阳性率增高.结论 HMBA与HMBPA联合作用能增强抑制MELDS19细胞的生长繁殖及诱导其分化能力.     

米诺环素对PDB刺激的小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响

为了分析米诺环素(MNC)对小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响,探讨其免疫抑制作用机制.我们通过分离小鼠淋巴结细胞,以佛波醇酯(PDB)刺激,用不同终浓度的MNC与淋巴细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测淋巴细胞早期和中期活化抗原CD69与CD25的表达;以CFSE染色,加入多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析MNC对淋巴细胞增殖的影响;结果,荧光抗体染色显示MNC能显著抑制PDB诱导的T细胞CD69和CD25的表达;CFSE染色结果显示,MNC对佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)诱导48 h的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性.从而我们认为MNC对小鼠淋巴细胞的体外活化和增殖具有明显的抑制作用.具有独立于其抗菌活性的抗炎作用.     

甘肃武都米仓山红芪研究Ⅲ.红芪多糖的免疫作用及其对荷瘤小鼠淋巴细胞内cAMP,DNA含量的影响

用100、300、400、500及700mg/kg的红芪多糖腹腔注射正常及荷瘤小鼠,结果表明,该剂量能显著提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力及循环抗体的含量。(100,300mg/kg P<0.01,500,700mg/kg p<0.05),400mg/kg能使接种2×10~3个HA腹水型肝癌细胞的荷瘤小鼠淋巴细胞内cAMP和DNA含量明显增加,并能抑制小鼠AH细胞的增殖,其抑制率为51％(<0.01)。     

As2O3对脐血红系祖细胞HOXB6基因表达的调控作用

目的：探讨脐血造血干祖细胞向红系祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达及As2O3对HOXB6mRNA表达的影响．方法：①采用外培养技术,以As2O3干扰造血干祖细胞,观察HSPC经促红素诱导后,CFU-E集落生成情况．②采用实时荧光定量HR技术检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达．结果：①造血于祖细胞红系祖细胞增殖过程中,各组细胞HOXB6基因均表达,②与正常对照组比较,As2O3可下调HOXB6基因的表达．结论：①HOXB6可能是造血干祖细胞向红系祖细胞增殖分化中的调控基因之一．②As2O3能下调HOXB6基因的表达．     

量子点（CdTe）诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡与线粒体膜电位的影响

为了探讨量子点(CdTe)诱导小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)凋亡及对线粒体膜电位的影响,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖状况;Hoechst染色进行细胞形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡及线粒体膜电位的变化.结果表明,小鼠腹腔巨噬细胞抑制率随着量子点作用时间延长和浓度增高而增加;形态学观察可见明显的凋亡特征;流式细胞仪检测结果显示剂量组细胞线粒体膜电位均较阴性对照组有所下降且细胞凋亡率显著增高,并呈现一定的剂量依赖关系,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05).因此1.45～5.8 μg/mL剂量范围的量子点(CdTe)能抑制小鼠腹腔巨噬细胞的生长,导致细胞线粒体膜电位显著下降,引起小鼠腹腔巨噬细胞凋亡,从而认为这种凋亡可能是依赖线粒体途径的.     

龙葵浓缩汁对小鼠细胞免疫功能的影响

目的了解龙葵浓缩汁对小鼠细胞免疫功能的影响.方法用3种浓度的龙葵口服液,即高剂量(3 000 mg/kg体质量),中剂量(1 500 mg/kg体质量),低剂量(750 mg/kg体质量)连续灌胃不同组别小鼠,28 d后分别采用Jerne改良玻片法进行小鼠的抗体生成细胞检测试验;MTT法进行小鼠的淋巴细胞转化实验;乳酸脱氢酶测定进行小鼠NK细胞活性测定试验.结果小鼠抗体生成细胞数、NK细胞活性在高剂量组与对照组间比较有显著性差异(P<0.05),中、低剂量组与对照组间比较无显著性差异(P>0.05);吞噬率、吞噬指数及淋巴细胞的增殖能力在低、中、高剂量组与对照组间比较均无显著性差异(P>0.05).结论高剂量的龙葵浓缩汁能明显增加小鼠的抗体生成细胞数,增强小鼠NK细胞的活性;而龙葵浓缩汁对小鼠巨噬细胞吞噬功能及对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化的能力无影响.     

MTT法评价3种鸡腿菇多糖的体外抗肿瘤活性

采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测超声辅助提取后经季铵盐沉淀分级得到的鸡腿菇多糖(UCP-3)、硫酸酯化鸡腿菇多糖(SWCP)和羧甲基化鸡腿菇多糖(CWCP)对人白血病K562细胞体外生长的抑制活性,研究不同的处理工艺对鸡腿菇多糖体外抑制K562细胞增殖活性的影响.结果表明:3种鸡腿菇多糖均可抑制K562细胞的体外生长,抑制作用随着多糖浓度和作用时间的变化而变化;超声处理多糖可能引起单糖之间连接方式变化进而使得其生物活性发生改变;SWCP与CWCP对K562细胞的体外生长抑制作用明显,所以对鸡腿菇多糖进行化学修饰有助于提高其生物活性.