新型定性-定量测定血红蛋白氧载体的检测系统III.建立抗人源性氧载体类兴奋剂检测系统的初探

目的构建一种高通量蛋白芯片检测人血清中血红蛋白氧载体类兴奋剂的方法。方法用自制SEC微柱快速地将人血清中血红蛋白聚合体（氧载体）和血红蛋白单体（另外加入的内标）分离,逐滴收集洗脱液作为探针,点样结合在蛋白质基片上,与其相对应的荧光标记的多克隆抗体进行杂交,扫描芯片荧光强度检测人血红蛋白氧载体。结果自制SEC微柱能够将戊二醛聚合的人血红蛋白聚合体和单体有效分离,在蛋白芯片的检测中能较好地检测出人血清中1．5％的聚合体人血红蛋白氧载体。结论以SEC技术和蛋白芯片相结合是一种高通量、灵敏、重现性好的检测人血清中的以人血红蛋白为基质氧载体类兴奋剂新方法。     

猪血红蛋白及戊二醛聚合猪血红蛋白氧载体的研究

目的阐明猪血红蛋白的主要理化特性,并了解戊二醛聚合反应对猪血红蛋白主要性能的影响。方法猪血经多步纯化获取高纯度猪血红蛋白,以戊二醛为交联剂制备聚合猪血红蛋白样品。鉴定猪血红蛋白的纯度、聚合体分子量分布、携氧性能及自氧化等指标。结果猪血红蛋白在生理pH条件下的P50为23．6mmHg,Hill系数为2．86。聚合猪血红蛋白为分子量大小不均一的混合体,聚合体P50和Hill系数均减小,自氧化趋势增大。结论猪血红蛋白具有较高氧亲和力,与人血红蛋白相似,明显高于牛血红蛋白。猪血红蛋白的丰富来源、特殊的氧亲和力和较好的化学稳定性等特点使其可成为一种血红蛋白类氧载体产品制备的有用材料。     

盐酸去氧肾上腺素与人血清蛋白 相互作用及其检测应用

利用荧光光谱法研究了盐酸去氧肾上腺素与人血清蛋白相互作用机理.结果表明,盐酸去氧肾上腺素与蛋白反应生成不发荧光或弱荧光的复合物,荧光猝灭机制为静态猝灭.探讨了介质酸度及时间对猝灭强度的影响.在优化的实验条件了,建立了检测盐酸去氧肾上腺素的标准曲线,并将该荧光猝灭法用于注射液中盐酸去氧肾上腺素含量的测定.     

人白细胞介素24蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活检测

构建人白细胞介素24蛋白酵母双杂交诱饵栽体,并检测其自激活作用.采用PCR技术特异性扩增人白细胞介素24基因IL-24,将其克隆入酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7中,通过PCR扩增、限制性酶切鉴定及序列测定,获得质粒pGBKT7-IL-24.采用PEG/LiAc法将其转入酵母AH109中,经表型筛选检测其自激活作用,同时...     

荧光氧传感纳米粒子的制备

采用模板法将氧敏感的荧光探针-三(2-苯基吡啶)合铱(Ⅲ)[Ir(ppy)3)]包埋在二氧化硅纳米粒子中,并将制得的二氧化硅纳米粒子(SiNP)用于氧的荧光传感检测.实验结果表明所制得的SiNP对氧的浓度响应范围在0～30. 31μg/mL.     

CaSO4的复合载氧体制备及其反应特性

利用浸渍法制备出载氧性能较好及价格低廉的复合型CaSO4载氧体,同时研究其固体燃料化学链燃烧特性.在综合热分析仪中研究复合型载氧体同H2和CO等气体燃料和煤焦固体燃料的反应性能,发现浸渍有微量Fe2O3和NiO的CaSO4复合型栽氧体同气体、固体燃料的反应速率加快,反应时间大大缩短,Fe2O3改善载氧体的反应性能方面优于NiO.SEM照片显示复合型载氧体同固体燃料高温下反应前后颗粒形态发生较大变化,并出现颗粒聚团.XRD分析表明循环反应后浸渍的Ni以Ni3S2形式出现,而浸渍的Fe以Fe3O4化舍物的形式存在,CaSO4的还原产物只有CaS.加入CaCO3颗粒后,大大改善了复合CaSO4栽氧体的循环性能.     

肺癌肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对乳腺癌的诊断价值

目的:研究肺癌肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对乳腺癌的诊断价值。方法:利用双荧光标记的肺癌肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统对15份乳腺癌患者和15份正常对照人群血清样品进行检测,然后从系统中寻找可用于乳腺癌检测的肺癌肿瘤标志物,并根据ROC曲线评估其诊断价值。结果:在肺癌肿瘤标志物检测系统中,除了3E7噬菌体蛋白(P=0.0526,AUC=0.712),没有发现更多与乳腺癌相关的肿瘤标志物。结论:绝大多数的肺癌肿瘤标志物都不适宜作为乳腺癌的检测指标,但是3E7有可能是特异性标志物,对于诊断有一定的诊断价值,有待进一步研究。     

血清中支原体污染的检测及其方法分析

血清作为疫苗生产中的主要原辅材料,很容易被支原体污染.为了更好、更准确地检测血清中支原体的污染情况,本试验对血清中支原体污染的检测及方法进行了分析.分别用直接培养法、DNA荧光染色法和PCR法对17批新生牛血清样品进行了支原体检测.直接培养法检测结果有15批支原体阴性,2批阳性,阳性率为11.8%;DNA荧光染色法和PCR法检测结果均为14批支原体阴性,3批阳性,阳性率为17.6%.以上结果表明培养法与DNA荧光染色法或PCR法之间存在明显差异.对血清支原体进行检测时,应用直接培养法和DNA荧光染色法或PCR法同时联合应用,以提高对血清中支原体检测的准确性.     

胶束电动色谱在线富集检测苯氧酸除草剂残留

为检测粮食样品中苯氧酸除草剂残留,建立了一种采用极性转换大体积进样方式的胶束电动毛细管色谱新方法.研究了缓冲液、进样时间、分离和富集电压对分离和富集的影响,优化的缓冲液由20mmol/L磷酸盐和60mmol/L SDS组成,pH为7.5;分离和富集电压分别为20kV和-20kV;进样量为3.5kPa×200s.最佳条件下4种除草剂的富集倍数为510~620,方法检出限为0.20~0.38μg/kg,粮食样品的加标回收率80.6%~96.7%.方法可用于粮食样品中苯氧酸除草剂残留的检测.     

量子点/硅质体编码纳米载体的制备

采用薄膜水化法制备了包覆绿色油溶量子点和红色水溶量子点的硅质体,红色量子点包覆于硅质体内腔中,绿色量子点包覆于类磷脂双层中.研究不同种类磷脂掺杂对硅质体结构的影响,采用预编码和后编码2种方式构建量子点/硅质体编码纳米载体.实验结果表明:利用硅质体包覆量子点可保持优良的光学性能,提高抗环境干扰能力,增加生物相容性;制备的掺杂25%DSPE的双色量子点/硅质体纳米荧光载体,粒径为100~150 nm,可实现其表面的生物偶联或化学修饰;采用绿色与红色荧光强度比2∶1,1∶1,1∶2的组合方式,制备分别出3种编码量子点/硅质体,为细胞内荧光成像及生物分子检测提供基础.     

基于氧敏感膜的海水溶解氧测定技术研究

提出了一种利用荧光猝灭原理测定海水溶解氧的方法,分别从光电检测电路、LED驱动电路、光电二极管电路、温度检测电路、信号产生采集处理控制电路等方面详细介绍了基于氧敏感膜的海水荧光信号检测系统设计方案,通过实验测试了荧光信号检测系统对荧光相位滞后检测能力、系统的整体稳定性和系统测试数据的准确度。准确度测试中溶解氧测试数据点饱和度从100.00%减小到11.56%,氧敏感膜荧光信号检测系统所测数据与碘量法误差最大为5.15 μmol/L,两种方法变化趋势相同。此系统可以作为一种海水溶解氧测量仪器,具有良好的应用价值。     

肉制品中β-兴奋剂的毛细管电泳-电化学检测方法

首次采用毛细管电泳-电化学检测法（CE-ED）同时测定了肉制品中β-兴奋剂盐酸克伦特罗与沙丁胺醇的含量,考察了缓冲液酸度和浓度、分离电压、氧化电位和进样时间等实验参数对分离检测的影响.在最佳实验条件下,工作电极为直径300 μm的碳圆盘电极,检测电位为+950 mV（vs. SCE）,缓冲液为40 mmol/L硼砂溶液（pH =7.4）,分离电压 18 kV,上述组分在8 min中内即可实现分离.盐酸克伦特罗和沙丁胺醇在两个数量级的范围内呈良好线性关系,检测下限（S/N=3）分别为1.11×10-7和9.80×10-8 mol/L,且抗坏血酸对其检测不产生干扰.该方法已成功地应用于实际样品中β-兴奋剂残留状况的分析,结果令人满意.     

基于多波长数字锁相检测的光学拓扑成像方法

光学拓扑成像方法作为现有脑功能成像模态极为有益的补充,可量化脑组织中血红蛋白的氧合状况,对临床诊断和治疗工作有着非常重要的意义.但目前已推出的光学拓扑成像系统价格昂贵,较难推广,为此设计了一种结构简单、成本较低的基于数字锁相检测技术的光学拓扑成像系统,目的是以设定的源-探测光纤阵列,量化组织体浅层区域的血红蛋白浓度的变化.该系统将两路不同波长的激光信号耦合后作为辐射光源,以数字锁相技术同步检测输出光强;并以修正的Beer-Lamber定律为模型计算每对相邻的源-探测光纤处大脑皮层活动前后血红蛋白的浓度变化量.     

新型单态氧荧光探针的应用研究

单态氧是一种重要的高活性氧自由基,在材料科学,生物以及医学等领域具有重要的研究价值.本文阐述了近年新兴的商品化单态氧荧光探针(Singlet Oxygen Sensor Green reagent,SOSG)的光谱特性和检测原理,并综述了其在单态氧检测应用情况.最后,展望了SOSG在单态氧检测应用研究的发展趋势.     

紫外光辐照有机硅氧烷水解行为的荧光探针法监测

为揭示紫外光辐照对有机硅氧烷加速水解的作用,以芘为荧光探针,分别对紫外光照及非光照条件下3种有机硅氧烷酸水解体系进行了跟踪检测。荧光光谱对比发现:紫外光辐射条件下,在具有明显疏水性取代基硅氧烷水解缩合反应前期,出现明显且不断增长的荧光探针芘的基激缔合物特征发射峰;在具有较弱疏水性取代基硅氧烷水解缩合反应前期,出现明显且不断降低的芘单体特征发射峰;而在非光照条件下,上述相应有机硅氧烷荧光特征峰变化缓慢。结果表明,紫外光辐照不仅对有机硅氧烷水解具有明显促进作用,而且也因此引起分子簇集行为明显变化,这些作用对其溶胶-凝胶过程产生影响。     

等离子体作用结合氧限制模型选育辅酶Q10高产菌株

将常温常压等离子体(Atmospheric and Room Temperature Plasma,ARTP)诱变和无水亚硫酸钠构建的氧限制筛选模型相结合,通过适合辅酶Q10生产菌株的24孔板高通量快速培养技术,选育了类球红细菌Rhodobacter sphaeroides耐氧限的高性能突变株.实验结果表明:该菌株诱变...     

基于核酸适配体的非标记荧光检测技术发展研究

随着指数富集的配基系统进化技术(SELEX)的日益成熟,核酸适配体从最初应用于基础研究发展到多种商业化的用途,在靶向治疗、临床诊断、生物传感器等领域发挥了较大的作用。与此同时,与适配体相结合的荧光技术也广泛地应用于分析检测领域,并且在未来的研究中起着非常重要的作用。由于非标记荧光技术具有灵敏度高、响应时间短等优点,逐渐发展成为一种新型快速检测技术。在此总结了近年来非标记荧光技术的研究进展,并根据荧光产生的机理,将其分为染料嵌入型、信号放大型和纳米颗粒结合型3类,系统地介绍了适配体非标记荧光技术在检测不同靶标中的应用及原理,并对该技术未来的发展趋势和应用方向进行了展望。     

铜基载氧体吸放氧性能的固定床实验研究

以机械混合法制备的铜基载氧体为研究对象,在固定床反应器中研究了反应温度、气体流量、惰性载体种类和惰性载体添加比例对铜基载氧体吸放氧性能的影响.实验结果表明:随着反应温度的升高载氧体的吸氧性能降低,但放氧性能提高;载氧体的吸放氧性能都随气体流量的增大而提高;对于制备的三种不同惰性载体的载氧体,其吸氧性能相差不大,放氧性能为Cu/MgCu/ZrCu/Si.对于制备的三种不同惰性载体添加比例的载氧体,其吸放氧性能均随惰性载体添加比例的增大而提高.     

PCR-Tag荧光技术在检测鲍曼不动杆菌中的初步应用

建立一种自动化、高通量化的PCR产物鉴定方法并应用于临检实验室.对临床分离后经过生化反应鉴定的208例鲍曼不动杆菌,运用PCR-Tag(尾标)荧光技术进行检测分析,阳性率达到92％,与同等条件下所进行的普通引物PCR方法相比,结果无显著差异(P＞0.05).使用PCR-Tag荧光法检测鲍曼不动杆菌,可满足自动化、高通量、高可靠性的现代临床分子检测技术的要求,符合临床分子细菌学快速检测的发展方向.     

一种检测蛋白质相互作用的双荧光共定位系统

自发荧光蛋白以快捷灵敏、即时检测和无需破坏活细胞的特点在蛋白质相互作用的研究中得到广泛应用.从发光水母Aquoria victoria中分离的绿色荧光蛋白(GFP)和从珊瑚Discosoma sp.中分离的DsRed红色荧光蛋白是自发荧光蛋白的典型代表.本研究开发一种基于GFP和红色荧光蛋白(RFP),并可通过待检测蛋白在细胞内表达的空间位移变化产生共定位的双荧光共定位检测系统.该系统为克服两种荧光蛋白光谱渗漏带来的非特异性结果的干扰,将核仁定位信号(NoLS)和出核信号(ABL)分别连接到RFP和GFP.具有定位信号的GFP和RFP的待检测蛋白对可分别在细胞核内和(或)细胞核外表达,伴随它们的相互作用,荧光共定位的现象会产生在细胞内特定的区域.利用抗凋亡蛋白Bc1-2和Bak-BH3短肽作为蛋白对测试该系统,荧光共定位现象明显,系统灵敏可靠.