大鼠肝星形细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（pafital hepatectomy，PH）模型，用两步灌流法分散肝脏细胞，用60％Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞，用结蛋白（desmin，DES）和波形蛋白（vimentin，vIM）的免疫组织化学定性、定位再生肝（regenerating liver，RD、分散的肝脏细胞及分离的肝星形细胞，用RT—PCR定量肝星形细胞的DES和VIM mRNA，用蛋白免疫印迹定量肝星形细胞DES和VIM．初步证实，分离的肝星形细胞中DES和VIM阳性细胞占95％以上，从PH后各时间点分离的肝星形细胞的DES和VIM mRNA量稳定，相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离肝星形细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点，值得采用．     

酵母细胞中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分离纯化及性质

报道了葡萄糖-6磷-酸脱氢酶（G6PDH）的分离纯化和酶学性质研究．以溶胀法从酵母细胞中提取胞内酶，粗抽提液再经过硫酸铵盐析和Sephadex G-100凝胶柱层析．酶学性质研究结果表明：G6PDH的酶促反应最适温度和pH值分别为37℃和pH8．8．考察了金属离子对G6PDH荧光光谱的影响，发现Cu^2＋和Hg^2＋对G6PDH具有荧光猝灭作用，且符合荧光静态猝灭的Stern—Volmer公式，因此可利用荧光猝灭的性质进行痕量金属离子测定．     

大鼠肝卵圆细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心给合免疫磁珠分离方法卵圆细胞（oval cell,OC）.用卵圆细胞标志蛋白OC2和OV6的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RL）、分散的肝脏细胞及分离的卵圆细胞,用RT-PCR定量卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量卵圆细胞的OC2和OV6蛋白.初步证实分离的肝卵圆细胞中,OC2和OV6阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的肝卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝卵圆细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用.     

大鼠原代肝星形细胞的分离与鉴定

本文通过二步原位灌注的方法分离得到大鼠肝脏,随后通过机械剪切,用0.2g/L链霉蛋白酶E,0.2g/L胶原酶Ⅳ以及0.1g/L DNaseⅠ消化和分散,筛网过滤、经130g/L Nycodenz密度梯度离心后收集肝星状细胞,经台盼蓝染色后用细胞计数仪鉴定细胞存活率,α-SMA(平滑肌动蛋白)免疫细胞化学染色法鉴定肝星状细胞纯度。结果显示,肝星状细胞的得率为每个肝脏3.5×107个细胞以上,肝星状细胞纯度为95%左右,肝星状细胞存活率为(97.0±3.2)%,满足实验需要。     

简易经济的肝星状细胞的分离培养方法

为建立一种简易、经济的肝星状细胞(hepatic Stellate Cell,HSC)分离方法,为肝纤维化研究提供一种细胞模型。采用胶原酶、链霉蛋白酶灌注肝脏,单层密度梯度离心方法分离HSC。Desmin免疫组化染色鉴定。HSC的得率为1×107~3×107,纯度为90%以上。该方法简化了HSC的分离过程,简单、经济,适合广泛开展。     

大鼠肝陷窝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％ Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离陷窝细胞（pit cell）,用分化抗原簇8（cluster of differentiation 8,CD8）和分化抗原簇56（cluster of differentiation 56,CD56）的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RD、分散的肝脏细胞及分离的肝陷窝细胞,用RT—PCR定量肝陷窝细胞的CD8和CD56mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝陷窝细胞的CD8和CD56蛋白．初步证实,分离的肝陷窝细胞中,CD8和CD56阳性细胞占95％以上;PH后各时间点分离的陷窝细胞的CD8和CD56的mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离陷窝细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用．     

大鼠肝库普弗细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（partial hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离库普弗细胞（Kupffer cell,KC）,用外胚层发育不良抗原2（ectodermal dysplasia antigen2,ED2）和溶菌酶（lysozyme,LYZ）的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RL）、分散的肝脏细胞及分离的库普弗细胞,用RT—PCR定量库普弗细胞的ED2和LYZmRNA,用蛋白免疫印迹方法定量库普弗细胞的ED2和LYZ蛋白．初步证实,分离的肝库普弗细胞中ED2和LYZ阳性细胞占96％以上,从PH后各时间点分离的库普弗细胞ED2和LYZmRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定。表明改进的分离库普弗细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用．     

酶法测定1-磷酸葡萄糖的含量

建立反应液中1-磷酸葡萄糖（G-1-P）的测定方法.分别在样品中加入PGluM（EC5.4.2.2）、G6P-DH（ECl.1.1.49）和氧化型辅酶Ⅱ（β-NADP）,通过测定还原型辅酶Ⅱ（β-NADPH）吸光值的变化（△A）来确定样品中G-1-P的含量.G-1-P在0～400 mg/L范围内与△A呈线性关系,r2=0.999 8,其平均回收率为100.88%（RSD=0.52%）.该法快速、灵敏、准确.     

葡萄糖浓度波动对人肝L02细胞损伤的实验研究

研究了葡萄糖浓度波动对于体外培养的人肝实质L02细胞的影响以及可能的机制.利用人肝实质细胞株L02进行传代培养.实验共分为4组:正常组(N)、持续高糖组(HG)、波动组(GF)和渗透压对照组(OP).各组细胞培养72 h后,测定培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活力,肝细胞内糖原含量,谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化酶歧化酶(SOD)、Na~+K~+-ATP酶和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶的活力,胞内游离钙离子([Ca~(2+)]_i)浓度以及细胞膜的流动性.高糖组和波动组细胞培养液中ALT,AST和LDH活力上升,细胞内GSH,SOD,Na~+K~+ATP酶和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶活性均下降,MDA和糖原含量上升,细胞膜流动性下降;高糖组和波动组与正常组比较均差异显著(p0.001),波动组较高糖组也有显著差异(p0.01).葡萄糖浓度波动能够导致细胞膜通透性的改变和细胞内酶的严重泄漏,同时对肝细胞有明显的氧化损伤和毒性作用,而且比单纯的高糖对肝细胞的损害更为明显和严重.     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分离纯化

报道了葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的分离纯化. 在0.1 mol/L的碳酸氢钠溶液中,以溶胀法从酵母中提取胞内酶.粗抽提液经过60 %～75 % 饱和度的硫酸铵盐析, Sephadex G-100凝胶柱层析.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的收得率为12.4%,纯化倍数达51.2.     

大鼠正常肝和再生肝的肝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll密度梯度离心分离肝细胞,用免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝细胞中白蛋白(albumin,ALB)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-P),用蛋白免疫印迹方法定量肝细胞的ALB和G-6-P,用RT-PCR定量肝细胞的ALB和G-6-P mRNA.初步证实纯化的细胞中,ALB和G-6-P阳性细胞占96%以上;PH后各时间点纯化的肝细胞的ALB和G-6-P mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进后的分离肝细胞方法具有收率高、纯度高、活性好等特点.     

太行山猕猴和大鼠中肝细胞之间的连接方式特例的扫描电镜观察

应用扫描电镜对太行山猕猴和Sprague-Dawley大鼠肝细胞表面进行了观察。发现在猕猴和大鼠的部分肝细胞表面都存在特征性的凹陷，该凹陷内分布有微毛，有的存在胆微管，同时，还发现细胞表面存在突出结构，该突出结构端部膨大，颈部稍细，由此认为这有可能是哺乳动物肝细胞表面的固有结构，端部膨大结构和表面凹陷极可能为一对特殊的肝细胞连接方式。     

建立基因协同作用算法解析大鼠肝再生中基因表达丰度预示的细胞增殖活动

随着生物高通量分析技术的发展,获得基因组／蛋白组数据已较易实现．然而解析这些数据的生物学意义尚有不少困难,亟待克服．从生理反应的多样性、多步骤性、可逆性、循环性、重复性、网络性、可控性、适应性等特点入手,以基因表达丰度为基础,根据时间序列分析原理,应用皮尔森相关系数建立了两种描述基因协同作用的谱函数E。（￡）和巨,用它们分析基因表达丰度、表达变化预示的大鼠肝再生中肝细胞的增殖活动．结果显示,大鼠肝再生的进展阶段,即PH后12～72h肝细胞的增殖活动显著强于对照．进一步分析相关文献资料发现,上述结果与文献报道一致,表明在解析生物高通量分析数据的生物学意义方面,基因协同作用算法有一定应用价值．     

大鼠肝再生中肝细胞基因表达与DNA裸露的相关性研究

为了解大鼠肝再生中肝细胞的基因表达与DNA裸露的相关性,分离大鼠肝细胞,提取裸露DNA,用SOLEXA方法对DNA测序,用BWA软件拼装测序片段,用IPA软件分析拼装的基因种类和作用,用Rat Genome230 2.0芯片检测基因的转录情况.研究表明,大鼠肝再生的12h(PH后12h),肝细胞的裸露DNA涉及16 912个基因,1 701个基因发生了有意义裸露量变化.其中,25个基因的裸露量上调,1 676个基因的裸露量下调.与Rat Genome 230 2.0芯片的检测的基因转录比对表明,肝细胞的AKR7A3,BMYC,CDC25B等26个基因的裸露量和表达量均下调,表明大鼠肝再生12h时,这些基因的表达可能受染色体结构调控.     

糖皮质激素对雌性大鼠再生肝细胞核仁组织区的影响

以肝细胞核仁组织区相关噬银蛋白(AgNORs)颗粒数目为指标,研究了大鼠部分肝切除(PH)后皮质酮对再生肝细胞转录活性的影响.结果显示:①无论何种处理方式,在PH后不同时期,肝脏门管区的肝细胞Ag-NORs数目均高于中央静脉区,大多差异极显著;②PH后24 h,各处理组(假手术、去肾上腺、去肾上腺+皮质酮)肝细胞AgNORs颗粒数均下降.除了高剂量皮质酮(40 mg/kg体重)处理组在PH 24 h后肝细胞AgNORs数持续升高外,其余各组均在PH后36 h达到最高值,随后又下降;③在PH后24~48 h,给去肾上腺大鼠注射的皮质酮剂量越高,AgNORs数目越少.以上结果表明:在PH后不同时间,大鼠肝脏门管区肝细胞的转录活性始终高于中央静脉区肝细胞;皮质酮对肝细胞的转录活性具有抑制作用,但抑制时间主要表现在PH 24 h以后.     

利用不同冷冻方法建立大鼠胚胎保种库的研究

采用程序冷冻、玻璃化冷冻和OPS法对大鼠囊胚进行了冷冻保存,探讨了不同冷冻方法对胚胎存活率的影响,解冻后存活率分别为82．4％,76．9％,85．7％;孵化率分别为47.1%,46.1%,53.6%。3种方法所得的囊胚存活率及孵化率均无显差异,均可作为对大鼠囊胚进行冷冻保存的有效方法,可用于胚胎建库。     

大鼠多次采血常用的三种方法探讨

目的 探讨大鼠在1天内或者短时间内需要多次采血常用的三种方法,提高大鼠实验的成功率.方法 采用90只雄性Wistar大鼠,分别用眼眶后静脉采血法、颈静脉采血法及心脏穿刺采血法进行采血实验.结果 眼眶后静脉采血法：采血0.2-0.3 mL/次,每只大鼠3-4次/d.颈静脉采血法：采血0.2-0.4 mL/次,每只大鼠6-8次/d.心脏穿刺采血法：采血0.3-0.4 mL,每只大鼠3-5次/d.结论 三种采血方法取血量相对比较大,血液标本质量高,更利于大鼠的动物实验,但各有应注意的事项.     

不同采血方法对Wistar大鼠血常规的影响

摘要:目的　探讨不同采血方法对Wistar大鼠血常规测定结果的影响。 方法　40只SPF级Wistar大鼠顺序进行断尾采血、眼内眦采血和腹主动脉采血,用光电血细胞分析仪进行检测,3种采血方法的检测结果两两比较,进行配对t 检验。 结果　断尾采血白细胞计数最高,其次为眼内眦采血,腹主动脉采血白细胞最低,约为断尾采血的1/3,3种采血途径相互之间差异都极显著(P 0.05),而雌性大鼠断尾采血和眼内眦采血间差异极显著(P0.05)。血小板计数方面,末梢血(断尾、眼内眦采血)极显著低于腹主动脉(P0.05)。 结论　不同采血方法血常规检测结果具有较大统计学差异,应建立各自的背景数据以进行统一比较。