耐酸性α-淀粉酶的分离提取及性质研究

目的 以选育得到的耐酸性α-淀粉酶生产菌株黑曲霉Tx-78为出发菌株.对耐酸性α-淀粉酶的分离提取方法 及其性质进行研究.方法 通过液体发酵、减压浓缩及进一步提取得到粗酶制剂,对其最适宜反应温度、pH进行测定,对其稳定性及动力学性质进行研究.通过薄层层析对其水解淀粉的最终产物进行分析.结果 该酶最适宜反应pH为4.0,最适宜反应温度为70℃.当Ca2 浓度为7 mmol/,L时其作用最明显.动力学研究表明该酶的Km值为7.89 g/L.薄层层析结果 表明,该酶制剂水解淀粉最终产物为麦芽糖和葡萄糖.结论 该酶具有良好的耐酸性和耐热性.Ca2 对其有促进作用,能够实现在酸性条件下淀粉液化和糖化的同步进行,具有良好的应用前景.     

单宁微球固定化酶的应用性能

以单宁微球为载体制备固定α-淀粉酶.探讨了温度、pH值、淀粉初始质量浓度、淀粉种类等对单宁微球固定化α-淀粉酶催化淀粉水解性能的影响.结果表明,固定α-淀粉酶在25,60,90℃催化水解淀粉17h后,淀粉的水解百分率均达到95%以上,说明温度对固定α-淀粉酶的催化性能影响不大;pH对固定α-淀粉酶的催化性能影响大,最佳pH值为8;固定α-淀粉酶对可溶性淀粉、番薯淀粉、芭蕉芋淀粉的催化水解率均大于96%;固定α-淀粉酶重复5次后仍具有较好的催化效果.     

虎杖鞣质的分离纯化及其糖苷酶抑制活性

使用有机溶剂萃取、明胶沉淀及大孔吸附树脂一次层析组合技术,分离纯化了中药虎杖组分鞣质;并研究了虎杖鞣质对-αD-葡萄糖苷酶、蔗糖酶、乳糖酶和α-淀粉酶的抑制活性,以探讨其降血糖机理.     

日本鳗鲡胰蛋白酶的分离纯化及性质分析

通过硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、Phenyl-Sepharose疏水柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析等方法,从日本鳗鲡（Anguilla japonica）肝胰腺中分离纯化得到胰蛋白酶,SDS-PAGE显示其分子质量为21.5 ku。以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物,胰蛋白酶最适温度和最适pH值分别为40 ℃和8.5。动力学实验表明,Km值和kcat值分别为3.1 μmol/L和59.9 s-1。丝氨酸蛋白酶抑制剂Pefabloc SC、PMSF、benzamidine、STI等对其有特异抑制效果。底物特异性结果显示,该酶特异分解Arg和Lys残基的C端。肽质量指纹图谱获得5个片段,共76个氨基酸残基,与基因文库中的日本鳗鲡胰蛋白酶氨基酸序列完全相同。说明本研究所纯化的蛋白质为胰蛋白酶。     

濒危植物桫椤过氧化物酶的分离纯化与性质

将齿叶黑桫椤叶片提取液经硫酸铵盐析、透析、DEAE-琼脂糖凝胶柱层析和Sephacryl S-200凝胶柱层析分离得到纯化的POD,其纯化倍数为26.29,回收率为27.04%;通过SDS-PAGE法测得POD的分子量为43000D;通过IEF-PAGE法测得POD的等电点为4.55;齿叶黑桫椤POD最适pH在4左右;最适温度在45℃左右;Km值在最适温度45℃、最适pH4的条件下为0.07 mol/L。     

植物算盘子三萜化学成分研究

目的：为了寻找算盘子（Clochidion puberum）的活性成分,对其化学成分进行研究。方法：采用硅胶柱层析和葡聚糖凝胶柱层析分离纯化技术,通过理化性质和波谱特征分离并鉴定化合物。结果：从乙醇提取物的石油醚萃取部位分离得到了2个化合物：3β,19α,23α-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸（Ⅰ）,2β,3β,23α-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸（Ⅱ）。结论：以上化合物是从该植物地上部分中分离得到三萜化合物。     

广西血竭中α-葡萄糖苷酶活性抑制剂有效组分的萃取分离

通过α-葡萄糖苷酶活性抑制实验和高效液相色谱(HPLc)分析,利用有机溶剂的极性大小不同,对广西血竭进行了萃取分离,发现极性大和极性小的组分无α-葡萄糖苷酶抑制活性,极性中等的组分有较强的抑制活性,与广西血竭全粉相比,其活性提高了35．5％,为分离得到α-葡萄糖苷酶抑制剂单体化合物打下了基础．     

温泉来源地芽孢杆菌耐热α-淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究

以Geobacillus sp.WQJ-1基因组DNA为模板,利用PCR扩增获得成熟α-淀粉酶基因amy WQJ,构建重组质粒p ET-28a(+)-amy WQJ,转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达.用镍柱亲和层析对粗酶液进行分离纯化,获得相对分子质量约为59 ku的重组酶r Amy WQJ.研究表明,该酶最适pH值为6.0,具有较好pH稳定性,最适温度为70℃;Ca~(2+)能提高该酶的热稳定性;Hg~(2+)、EDTA、SDS、Cr3+、Mn~(2+)、Cu~(2+)和Pb~(2+)对该酶活力具有不同程度的抑制作用,而Co~(2+)、Na+和β-Mercaptoethanol则具有促进作用.以可溶性淀粉为底物,该酶动力学参数Km为6.62 mg·m L-1,vmax为2 197.80μmol·(mg·min)-1;降解最适作用底物木薯淀粉的终产物为寡聚糖.     

荔枝果肉多糖级分的抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

为了探究不同荔枝果肉多糖级分的理化性质、抗氧化能力和α-葡萄糖苷酶抑制活性差异,采用DEAE-52离子交换树脂分离纯化得到2种荔枝果肉多糖级分LPI和LPII,比较两者的中性糖、糖醛酸和蛋白质含量,并采用氧自由基清除能力(ORAC)和细胞抗氧化(CAA)评价其抗氧化活性,采用对-硝基酚-α-D吡喃葡萄糖苷(PNPG)法探究其 α-葡萄糖苷酶抑制活性。研究结果表明LPII含有较多的中性糖和蛋白质,较少的糖醛酸,表现出更强的抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性,其中LPI和LPII的 ORAC和CAA值分别是24.51,30.08μmol/g和5.36,8.72μmol/g,其抑制α-葡萄糖苷的IC₅₀值分别是0.33,0.26mg/mL。荔枝果肉多糖的生物活性与其中性糖和蛋白质含量密切相关。     

不同温度和pH值对瘤背石磺(Onchidium verruculatum Cuvier)消化酶活性的影响

研究了温度和pH值对瘤背石磺(Onchidium verruculatum Cuvier)肠淀粉酶、肝胰腺淀粉酶和胃淀粉酶以及相应的纤维素酶活性的影响.不同温度和pH值对瘤背石磺消化酶活性的影响显著(P<0.05).当温度在5-75℃时,肠淀粉酶和纤维素酶分别在35℃和30℃时活性较高;肝胰腺淀粉酶和纤维素酶分别在35-45℃和50℃时活性较高;胃淀粉酶活性在25-45℃维持较高水平,随后随温度的升高而下降,纤维素酶活性在50℃时较高.在pH为3.0-8.0范围内,肠淀粉酶和纤维素酶的最适pH值均为6.0;肝胰腺淀粉酶和纤维素酶的最适pH值分别为6.9和5.4;胃淀粉酶和纤维素酶的最适pH值分别为6.5和6.0.在适宜温度和pH条件下,肠淀粉酶、肝胰腺淀粉酶和胃淀粉酶活性均远大于肠纤维素酶、肝胰腺纤维素酶和胃纤维素酶.     

应用于粉刺治疗的植物单体5α-还原酶抑制剂活性筛选

建立一种简单的5α-还原酶抑制剂体外筛选模型, 用于20种植物单体物质的5α-还原酶抑制活性检测, 以寻求对粉刺治疗有效的药物. 以睾酮为底物、NADPH为供氢体, 对5α-还原酶体外测定体系进行了优化, 并测定了20种中草药标准品的5α-还原酶抑制活性. 确定了5α-还原酶反应的最适底物浓度为25 μmol/L, 最适反应温度为37 ℃, 最适反应pH值为6.5. 确定了知母总苷、连翘素、蛇麻酮对5α-还原酶有抑制作用, 其半数抑制常数(IC50)分别为12.4、20.8和45.6 μg/mL. 知母皂、连翘素和蛇麻酮在抗粉刺领域具有潜在应用价值.     

一种麦芽酸性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

经硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose CL 4B和DEAE-Sepharose CL 4B离子交换柱层析等步骤,从麦芽中分离提纯到一种酸性磷酸酶(ACPase,E．C．3．1．3．2),纯化倍数为33．06,酶液比活为88．27 U/mg．通过动力学方法测得其最适pH为5．4,酸碱稳定性较差,仅在pH 6．0左右的缓冲液中较稳定;最适温度为50 ℃,40 ℃以下有较好的稳定性;在最适条件下,该酶催化pNPP的米氏常数(Km)为4．696×10-4 mol/L．同时研究了一些金属离子和有机化合物对该酶     

阿卡波糖抑制Ⅲ型α-葡萄糖苷酶动力学研究

以马铃薯淀粉为底物,用3,5-二硝基水杨酸法研究阿卡波糖对Ⅲ型α-葡萄苷酶(提取自根霉)的抑制效果.经过实验,找到了准确测定Ⅲ型α-葡萄苷酶酶促催化反应初速度的条件.在反应体系的温度为40℃和pH=4.5的条件下,当反应时间在30 min内,反应速度为一次反应曲线.用规定的条件研究阿卡波糖对Ⅲ型α-葡萄苷酶的抑制效果,得到IC50=6.56×10-6mol/L.用双倒数曲线作图法作图,通过计算得到α-葡萄糖苷酶的Km=13.16 mmol/L,并且判断出阿卡波糖的抑制类型为非竞争性与竞争性抑制混合型.     

Aspergillus sp.1-13菌株β-木糖苷酶的提纯和部分性质

通过80 %饱和度硫酸铵沉淀、DEAE -SephadexA -50离子交换柱层析和SephadexG -100凝胶过滤柱层析等方法从Aspergillussp .1 -13菌株的白酒丢糟固体培养物的抽提液中分离纯化到一种 β-木糖苷酶。通过SDS -PAGE分析测定其分子量为110.9KD。该酶最适反应pH值为3.2～3.8之间,最适反应温度为70℃。该酶具有较宽的 pH稳定性 ,并且在60℃以下较稳定。     

白芸豆α-淀粉酶抑制剂在低GI方便粥中的应用

以淀粉水解率为指标,分析白芸豆α-淀粉酶抑制剂对淀粉水解的抑制作用,并进一步对白芸豆α-淀粉酶抑制剂对不同方便粥血糖生成指数(GI值)的影响进行研究.结果表明:随着大米粥中白芸豆α-淀粉酶抑制剂添加量由0%升到5.0%,大米粥的淀粉水解率不断下降,且其GI值由86.63降至32.03;进而将白芸豆α-淀粉酶抑制剂按3.0%的添加量添加到方便粥(燕麦粥、青稞粥和莲子粥)中,方便粥的GI值均降低至55以下,属于低GI食品范畴.     

木榄内生真菌Penicillium sp. GXIMD00006的次级代谢产物及其降血糖活性研究

为挖掘木榄内生真菌的降血糖功效，对木榄内生真菌Penicillium sp. GXIMD00006进行扩大培养，采用柱层析技术对其次级代谢产物进行分离纯化，利用NMR、MS等技术结合文献对比对分得的化合物进行鉴定。结果表明：共获得11个化合物，分别为：(+)-sclerotiorin (1)、 sclerotioramine (2)、 isochromophiloneⅧ(3)、 terretonin (4)、 terretonin A (5)、 chrodrimanin A (6)、 chrodrimanin B (7)、 chrodrimanin E (8)、 3,5-二羟基麦角甾醇-7,22-二烯-6-酮(9)、麦角甾醇(10)和过氧化麦角甾醇(11),其中，2个萜类衍生物4和5均为首次从青霉属中分离得到。该研究首次发现化合物1具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，IC₅₀值为3.30μmol/L,表明木榄内生真菌的次级代谢产物具有开发成为新的α-葡萄糖苷酶抑制剂的潜力。     

α-淀粉酶的研究与应用

介绍了α-淀粉酶的分离纯化和活力测定方法,耐高温α-淀粉酶和耐酸性α-淀粉酶的研究状况及α-淀粉酶在食品和医药工业中的应用,并指出α-淀粉酶具有很大的经济、社会和环境效益。     

真菌来源的乙酰胆碱酯酶抑制剂F01-2076A的研究

利用自建的乙酰胆碱酯酶抑制剂的高通量筛选模型,从大量真菌中筛选到1株阳性菌株F01-2076.该菌株的发酵液经有机溶剂提取、硅胶柱层析及HPLC ODS反相柱层析分离,得到1个活性化合物F01-2076A,该化合物对乙酰胆碱酯酶的IC50为23.4μmol/L.通过对该化合物的紫外、质谱、核磁等理化分析,得知该化合物与已知化合物Altenusin结构相同.     

南美白对虾丝氨酸蛋白酶的分离纯化及性质研究

通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose、Phenyl-Sepharose、Hydroxyapatite、Superdex 75等方法,从南美白对虾消化腺中分离得到一种丝氨酸蛋白酶.SDS-PAGE结果显示,其分子质量约为28 ku,最适pH值与最适温度分别为9.0和40℃,且pH值在7.0~10.0之间以及温度在40℃以下有较高的稳定性.底物特异性实验与抑制剂实验结果表明,该酶属于类胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶.动力学实验显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,Km=0.69μmol/L,Kcat=0.33 S-1,Kcat/Km=4.78×105(mol/L)-1S-1.     

中国黑白花优良种公牛精子透明质酸酶的分离纯化及部分性质研究

中国黑白花优良种公牛精子透明质酸酶经硫酸铵分级沉淀和 Sephadex 柱层析分离纯化,得到一个电泳纯品,活力纯化40倍.用 sephadexG-150凝胶过滤和 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为65000.该酶的最适 pH 为3.5～4.5,最适温度为37℃～45℃,在室温下较稳定,用 Limeweaver-Burk 作图法求得 Km 值为6.06×10~(-4)mol/L.