酶解制备牦牛乳酪蛋白降血压肽的初步研究

目的:牦牛乳富含酪蛋白,其经酶解制备的降血压肽以安全性高、无副作用等优点已成为乳品开发和高血压防治药物研究的新热点.方法:本实验对从牦牛乳中提取的酪蛋白,依据复合蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及胰蛋白酶各自的最适pH及温度采用酶解方法制备降血压肽,并且以ACE抑制活性为指标初步筛选最佳水解酶.结果:五种酶ACE抑制肽抑制率分别为:复合蛋白酶为39.02%,中性蛋白酶为67.48%,碱性蛋白酶为56.10%,木瓜蛋白酶为71.54%,胰蛋白酶为8.94%.结论:说明,在最适pH及温度条件下,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为制备降血压肽的最佳酶选,这为后续进一步的制备降血压肽实验提供依据.     

猪鼻软骨硫酸软骨素双酶法提取工艺研究

以猪鼻软骨为原料,用双酶法提取硫酸软骨素。用酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、2号酶、脂肪酶分别与胰酶组合提取硫酸软骨素,分析不同种类酶对硫酸软骨素提取的影响。通过正交试验得到的最佳提取工艺为：料液比1：1.5,第1类酶使用碱性蛋白酶,用量为2.5%,第2类酶（胰酶）用量为1.2%,成品收率达到16.740%。     

酶解牦牛乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

目的:乳清蛋白是牦牛乳中的重要成分,其经酶解制备的乳源性ACE抑制肽以安全性高和无副作用等优点在高血压的防治中具有重要的研究和应用价值.本实验研究利用乳清蛋白制备ACE抑制肽的工艺技术.方法:本实验对从耗牛乳中提取的乳清蛋白,分别根据碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶各自的最适pH及温度,采用酶解法制备ACE抑制肽,以ACE抑制活性为指标初步筛选出最佳水解酶,并探究最佳酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳反应条件.结果:碱性蛋白酶为制备ACE抑制肽的最佳水解酶,英最佳反应条件为:pH8.5、温度60℃、E/S为5.5％、水解6h.制备的ACE抑制肽抑制率可达到85.2％.结论:碱性蛋白酶为最佳酶选,用碱性蛋白酶制备的ACE抑制肽体外抑制率较高,符合工业生产要求.这为进一步优化乳清蛋白降血压肽的制备工艺提供依据.     

用响应面法优化酶水解法制备葵花盘小分子肽

为提取并利用葵花盘中具有降尿酸和溶解痛风石作用的小分子肽, 以小分子肽得率为指标, 通过酶水解法优化提取条件, 确定碱性蛋白酶为最理想的酶. 通过单因素实验考察料液比、 时间、 温度、 pH值和加酶量对小分子肽得率的影响, 利用响应面Box-Behnken实验, 优化酶水解法提取葵花盘小分子肽的工艺, 得到其最佳工艺条件为： 加入碱性蛋白酶, m(料)∶V(液)=1∶15, 酶的用量为2%, pH=9.0, 温度为55 ℃, 时间为2 h, 葵花盘小分子肽的得率最高为(42.41±0.01)%.     

用响应面法优化酶水解法制备葵花盘小分子肽

为提取并利用葵花盘中具有降尿酸和溶解痛风石作用的小分子肽, 以小分子肽得率为指标, 通过酶水解法优化提取条件, 确定碱性蛋白酶为最理想的酶. 通过单因素实验考察料液比、 时间、 温度、 pH值和加酶量对小分子肽得率的影响, 利用响应面Box-Behnken实验, 优化酶水解法提取葵花盘小分子肽的工艺, 得到其最佳工艺条件为： 加入碱性蛋白酶, m(料)∶V(液)=1∶15, 酶的用量为2%, pH=9.0, 温度为55 ℃, 时间为2 h, 葵花盘小分子肽的得率最高为(42.41±0.01)%.     

龟皮胶原蛋白的提取及结构表征(Ⅰ)

采用酶法从乌龟皮中提取胶原蛋白,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法检测龟皮胶原蛋白多肽产品分子量的分布,并将龟皮胶原蛋白和Ⅰ型胶原蛋白样品进行液相色谱分析(HPLC),比较其氨基酸成分和含量.SDS-PAGE电泳结果分析表明龟皮胶原为Ⅰ型胶原蛋白,分子量约为288ku.龟皮胶原蛋白中,甘氨酸的含量最高,占总量的24.69%;其次是谷氨酸、精氨酸和丙氨酸,分别为9.95%、8.08%和9.31%;天冬氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、酪氨酸等含量在5.58%～1.28%之间;组氨酸和蛋氨酸的含量最低,仅占0.79%和0.09%.由于龟皮胶原蛋白的含量高于Ⅰ型胶原蛋白,且与Ⅰ型胶原蛋白的氨基酸含量差异显著,因此,龟皮胶原蛋白可以作为一种重要的皮胶原进行开发和利用.     

铬革屑的酶法提取蛋白质新工艺

研究了用碱性和中性蛋白酶水解铬革屑以提取蛋白质的新工艺。对前处理方法的选择和影响酶作用的各种因素进行了试验，得到的工艺条件如下：用CaO进行前处理，再用碱性和中性蛋白酶的协同作用进行酶解，将水解液进行过滤后经过脱铬和浓缩干燥，得到了铬含量为10．1μg／g、粗蛋白含量达82．1%的水解蛋白，铬革屑蛋白质的回收率为60．7%.     

超声波辅助复合酶提取鸡软骨中硫酸软骨素

以鸡软骨为原料,采用超声波辅助碱-双酶法提取硫酸软骨素,以硫酸软骨素得率为考察指标,选取最优提取方法,并对最优方法进行单因素试验和响应曲面优化.试验结果表明,最佳工艺参数为超声波功率500 W,超声时间120 min,碱性蛋白酶添加量为1%,木瓜蛋白酶添加量为2%,硫酸软骨素得率可达到36.08%.超声波辅助碱-双酶法耗时短,操作简单且得到的产品纯度高.     

紫贻贝多糖酶法制备工艺研究

用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶分别提取紫贻贝粗多糖,以及木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合酶提紫贻贝粗多糖,木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶复合酶提紫贻贝粗多糖。并分析研究加酶量、料液比、pH和温度对紫贻贝提取率的影响。结果显示:木瓜蛋白酶最佳加酶量1%,料液比1:15 g/m L,pH为7,温度为60℃。提取率为6.65%。中性蛋白酶最佳为加酶量2%,料液比1:15 g/m L,pH为7,温度为50℃,提取率为5.52%。碱性蛋白酶最佳加酶量为2%,料液比1:15 g/m L,pH为10,温度为50℃,提取率为6.89%。木瓜蛋白酶与中性蛋白酶两步联合酶提取最佳提取条件为加酶量1%,料液比1:20 g/m L,pH为7,温度为50℃,此条件下提取率为6.86%。木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶两步联合酶提最佳提取条件为加酶量1%,料液比1:20 g/m L,木瓜蛋白酶缓冲液pH为7,碱性蛋白酶缓冲液pH为10,温度为50℃,此条件下提取率为7.27%。     

超声波辅助酶解制备东海海参胶原蛋白低聚肽及其活性的研究

以东海海参胶原蛋白为原料,采用超声波辅助酶解制备低聚肽(分子量小于1 kDa),并对其抗氧化性进行了研究。研究结果表明,超声波辅助对胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解东海海参胶原蛋白均有显著促进效果,低聚肽含量和收率均有大幅提高。当超声波功率为100 W时,中性蛋白酶酶解的低聚肽含量最高,达70.5%。采用单因素试验,对超声波辅助下中性蛋白酶酶解工艺进行优化,确定最佳酶解工艺为:超声波功率100 W,酶解温度60℃,酶解pH 7.0,酶添加量5%(w/w),酶解时间20 min。在最佳工艺条件下,低聚肽含量和收率最大达75.4%和52.9%。抗氧化试验表明,该低聚肽对DPPH和ABTS清除的效果均随低聚肽浓度的增加而增强。该低聚肽对ABTS的清除快速高效,对DPPH的清除则随着处理时间的延长而缓慢增加。当低聚肽浓度为8 mg/mL,处理时间为30 min时,DPPH和ABTS的清除率分别为19.0%和87.2%。     

鲍鱼内脏多糖的提取、纯化及其抗氧化和抑菌活性

以皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)内脏为实验材料,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶6种蛋白酶对其进行酶解提取多糖,结果显示碱性蛋白酶酶解所得多糖得率最高,为6.66%,进而由单因素试验和正交试验确定了碱性蛋白酶提取鲍鱼内脏多糖的最佳工艺条件.将得到的鲍鱼内脏粗多糖进行体外抗氧化活性测定,结果显示:100%清除羟自由基、100%清除2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐(ABTS)自由基以及700 nm处吸光度(A_(700))为0.485时代表的还原能力对应的鲍鱼内脏粗多糖质量浓度分别为9.6,7.5,8.2 mg/mL,表明所得粗多糖具有较好的抗氧化活性.采用双酶解法以提高多糖含量,结果显示胃蛋白酶二次酶解所得的多糖含量最高,且多糖样品在3种抗氧化活性模型中均具有很好的效果.采用Sevage法和反复冻融法去除蛋白,过氧化氢脱除色素,进一步纯化得到高纯度的鲍鱼内脏多糖,并采用双层平板法测定其抑菌活性,结果表明其对金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、大肠杆菌(Escherichia coil)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)都具有较好的抑制作用.     

B.cereus MBL13-U产牛骨胶原蛋白酶工艺优化

为了获得能够高效降解牛骨胶原蛋白的新型胶原蛋白酶,以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus MBL13-U)为出发菌种,以胶原蛋白酶活力为检测指标,对影响发酵的4个因素(菌种接种量、发酵温度、p H、发酵时间)进行单因素试验。通过四元二次正交旋转组合试验,确定了B.cereus MBL13-U菌株发酵制备胶原蛋白酶的最佳工艺。当菌种接种量4%(体积分数)、发酵温度35℃、初始p H6.4、发酵时间46 h时,胶原蛋白酶活力达(92.31±1.13)U/m L。将其作用于牛骨胶原蛋白,通过扫描电子显微镜对酶解过程中的牛骨胶原蛋白进行结构分析。分析结果表明:酶解破坏了牛骨胶原蛋白原本完整的表面结构,使其所含的Ⅰ型胶原蛋白更多地暴露在表面,加快水解。     

荸荠皮多酚的提取及脂质抗氧化活性

采用超声方法提取荸荠皮多酚,通过单因素试验和正交试验确定其最佳提取工艺条件,同时研究了荸荠皮多酚粗提物对亚油酸脂质过氧化体系的抑制作用。结果表明:提取剂为60%的乙醇,pH为3.5,料液比为1∶30(W/V),超声时间为50 min。在此条件下,荸荠皮多酚得率1.8%,且有较强的脂质抗氧化活性。     

鱿鱼皮胶原蛋白模拟鱼鳔加工工艺技术研究

以废弃物鱿鱼皮为研究对象,通过对鱿鱼皮提取前处理,胶原蛋白提取,最后模拟加工成鱼鳔的研究。研究结果表明:鱿鱼皮前处理最佳条件为,Na OH浓度为0.12 mol/L,Na OH作用时间5 h,异丙醇浓度为11%,活性炭浓度为0.9%;通过极差分析表明,Na OH浓度影响最为显著,其次异丙醇浓度,Na OH作用时间,活性炭浓度;胶原蛋白提取最佳条件为中性蛋白酶酶解温度50℃,酶解时间55 min,料液比1:13;模拟鱼鳔最佳配比条件为:维生素A 2 160 mg/kg,维生素E 175 mg/kg,K 930 mg/kg,Ca 1 400 mg/kg。     

复合酶法提取冬瓜多糖的研究

采用蛋白酶、果胶酶、纤维素酶复合处理冬瓜多糖溶液,通过对复合酶的作用温度、作用pH值、作用时间进行单因素实验,对复合酶配比、复合酶的提取工艺进行正交试验,确定了复合酶法提取冬瓜多糖的最佳工艺条件:复合酶按纤维素酶1.5%,果胶酶1.5%,蛋白酶1.5%配比,酶作用温度40℃,酶作用pH值为5.0,酶作用时间为40 min,多糖提取率最高.     

裂殖壶菌菌株FJU-512油脂提取的细胞破壁工艺

裂殖壶菌(Schizochytrium)是目前用于商业化生产二十二碳六烯酸(DHA)的高产菌种之一,由于DHA属于胞内油脂,因此对其进行充分破壁是工业化提取DHA的关键工序.研究了酸热法、碱热法、超声波法以及酶法对裂殖壶菌细胞破壁的影响,考察了不同破壁方法提取得到的总油脂及DHA产量,结果表明酶法是最优破壁方法.继而探讨不同单一酶破壁的总油脂产量,并将破壁效果最好的碱性蛋白酶和其他酶进行比较,确定最佳用酶为碱性蛋白酶.为进一步完善酶法破碎裂殖壶菌细胞的效果以提高总油脂产量,对碱性蛋白酶酶解的温度、pH、时间以及酶用量等条件进行优化.正交试验结果表明,碱性蛋白酶最佳酶解条件为酶用量2.0%,温度55℃,pH 10.0,酶解时间2.0h.在此优化条件下,裂殖壶菌菌株FJU-512的每克菌体细胞总油脂产量达到0.458 6g.     

硫酸软骨素提取工艺优化及抑菌活性研究

实验以硫酸软骨素得率为指标选择超声波提取时间、碱质量浓度、碱性蛋白酶添加量和胰蛋白酶添加量4个因素结合响应曲面优化设计最佳提取方案,并选取大肠杆菌、枯草芽孢杆菌进行抑菌实验,采用平板计数法,确定其抑菌效果以及最低抑菌浓度.研究结果显示,超声波辅助碱-双酶法提取硫酸软骨素的最佳工艺条件为:料液比为1∶15(g/m L),碱添加量为30 g/L,提取温度50℃,超声时间为40.6 min、碱性蛋白酶添加量为3.01‰、胰蛋白酶添加量为3.53‰,硫酸软骨素得率为18.88%.抑菌实验表明硫酸软骨素对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌有抑制作用,最低抑菌浓度均为200 mg/m L.     

响应面法优化酶解提取鳊鱼鱼鳞胶原蛋白的工艺研究

采用响应面法对酶解提取鳊鱼鱼鳞胶原蛋白的工艺进行优化。在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken实验设计的原理,以酶解温度、pH值、酶解时间为自变量,以胶原蛋白含量为响应值进行响应面优化分析。结果表明:设定的3个影响鱼鳞胶原蛋白提取效果的因素,其影响大小依次为pH值酶解温度酶解时间;优化分析获得鱼鳞胶原蛋白的最佳工艺条件为:酶解温度31.32℃、pH值4.24、酶解时间1.95 h、加酶量1.5%,胶原蛋白的含量为883.64 mg/g。为了方便实际操作,将鱼鳞胶原蛋白的最优工艺条件修正为:酶解温度31℃,pH值4.2,提取时间2 h、加酶量1.5%,实际得到胶原蛋白含量为881.78 mg/g,实验结果与理论值基本吻合,说明模型的可靠性较高。     

响应面法优化乳酸辅助提取菠萝皮果胶的工艺研究

为优化乳酸辅助提取菠萝皮果胶的工艺,在单因素实验的基础上,利用响应面法建立了菠萝皮果胶提取工艺的二次响应面方程。实验证实提取时间、乳酸浓度、液料比、提取温度对菠萝皮果胶提取率有不同的影响。结果表明,在实验范围内,各工艺条件对菠萝皮果胶提取率的影响大小顺序为:提取温度乳酸浓度提取时间液料比。菠萝皮果胶提取的最佳工艺参数:提取时间96 min,乳酸浓度8.25%,液料比25 m L·g-1,提取温度74℃,在此条件下,菠萝皮果胶提取率达8.47%,与预测值相对误差为0.58%,验证了该模型的有效性,表明该提取工艺条件合理可行。     

膜酶结合制备玉米多肽的工艺研究

玉米黄粉是玉米提取淀粉的副产物,常被当作废物处理。以此为原料制备玉米肽以提高其附加值。研究运用酶法制备玉米多肽,确定了添加半胱氨酸对其预处理。用碱性蛋白酶对其酶解,并用膜技术对玉米多肽液进行浓缩和纯化的工艺流程。碱性蛋白酶的最佳水解条件为:底物浓度2.0%,酶与底物浓度比为3.0%,温度50℃,pH为8.5。经过膜处理后,玉米多肽液可浓缩4.9倍,脱盐率达90.52%。