禽畜粪肥对农田蔬菜中抗生素抗性内生菌的影响

选取常食农田茎叶类蔬菜——上海青和芹菜为研究对象,探讨禽畜粪肥对蔬菜抗生素抗性内生菌的影响.结果表明:施加粪肥的农田上海青及芹菜样品的根、茎、叶中抗阿莫西林、头孢氨苄、四环素的单抗性内生细菌的数量均比未施加粪肥组高,它们的相对百分比含量比未施加组高出9~19倍.其中,从施加禽畜粪肥上海青中分离获得的多重抗生素抗性细菌-嗜麦芽寡养单胞菌,可能引起多种人类疾病,尤其值得关注.     

生防菌对黄瓜枯萎病防效及其对黄瓜诱导抗性测定

为确定生防菌对黄瓜枯萎病的防效及其对黄瓜诱导抗性,采用生物测定方法,测定了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌剂、粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)菌剂、棘孢木霉(Trichodema asperellum)及嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)对黄瓜枯萎病的防治效果及黄瓜叶片几种防御酶活性的影响。结果表明:经棘孢木霉菌对黄瓜枯萎病的防治效果达到70.24%。生防菌剂处理后的黄瓜叶片中4种防御酶的活性变化呈现一定的规律:经粉红粘帚霉、枯草芽孢杆菌和棘孢木霉处理的黄瓜叶片POD活性是空白对照的1.26倍、1.11倍和1.40倍;经嗜麦芽寡养单胞菌和棘孢木霉处理的黄瓜叶片SOD活性分别是空白对照的3.92倍和2.66倍;经粉红粘帚霉、枯草芽孢杆菌、棘孢木霉和嗜麦芽寡养单胞菌4种生防菌处理的黄瓜叶片PAL活性分别仅为空白对照处理的43.01%,69.11%,33.81%,34.70%;经枯草芽孢杆菌、粉红粘帚霉、棘孢木霉和嗜麦芽寡养单胞菌4种生防菌处理的黄瓜叶片CAT活性分别是空白对照的1.04倍、1.88倍、1.07倍和1.07倍。说明黄瓜经生防菌诱导处理后的一部分防御酶活性会升高。     

运动发酵单胞菌RecET重组系统的构建及应用

为了提高外源基因整合到染色体的效率,在已构建的运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体基础上,构建了RecET表达质粒pSUZM3a-RecET.选取乙醇脱氢酶Ⅰ(adhA)基因作为靶基因,四环素抗性基因(Tcr)作为筛选标记基因,检测RecET重组系统在Z.mobilis中进行基因重组的可行性.将两端带有60bp adhA基因同源臂的四环素抗性基因片段电击转化含有RecET重组系统表达质粒的运动发酵单胞菌ZM4,获得adhA基因缺失突变菌株.对突变菌株adhA基因的PCR产物进行测序发现,adhA基因已被置换为四环素抗性基因.上述结果表明:RecET重组系统在运动发酵单胞菌中具有高效、便捷和可操作性,只需60bp同源臂即可完成同源重组.     

一株嗜麦芽寡养单胞菌对结晶紫的脱色条件研究

从福州某印染厂废水处理池的活性污泥中筛选分离得到8株对结晶紫染料有脱色能力的菌株.对其中脱色效果最好1株菌F7进行了鉴定及脱色条件的研究,结果表明,该菌为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomnas maltophilia),在pH7.0、温度为35℃、盐度为0.5%、摇床转速为150 r/min条件下,其脱色效果最好,培养8 h对60 mg/L结晶紫溶液的脱色率达95.7%.     

猪源嗜麦芽窄食单胞菌的分离鉴定与耐药性研究

从临床上疑似嗜麦芽窄食单胞菌感染的病猪,进行病原分离、生化鉴定、特异性PCR鉴定和耐药性试验。结果获得了猪源嗜麦芽窄食单胞菌分离株20个．其中16株来源于病猪的呼吸系统;该菌对大多数抗生素具有耐药性且呈现多重耐药性．对复方新诺明最敏感。本研究从病原学角度证实猪嗜麦芽窄食单胞菌的临床感染并对临床用药有指导意义。     

XapR蛋白在嗜水气单胞菌抗生素耐药性的功能

研究嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila） LysR型转录调节因子中XapR蛋白抗生素耐药的调控机制。通过测定嗜水气单胞菌ATCC 7966（野生型菌株）与嗜水气单胞菌ATCC 7966 xapR基因缺失株（ΔxapR）对34种抗生素的最低抑菌浓度,系统地评价xapR基因抗生素耐药性;进一步利用定量蛋白质组学技术,探讨xapR参与嗜水气单胞菌调控的生物过程。结果表明：xapR基因缺失后细菌对头孢孟多的耐药性减弱;xapR基因可调控细菌碳代谢、TCA循环等多种代谢途径,此外还与外膜蛋白、TonB、ABC转运系统等抗性基因的表达密切相关。综上,XapR蛋白可通过调节细菌中心代谢途径以及多个抗性基因改变嗜水气单胞菌的耐药性。     

以抗生素抗性为选择标记的毛壳菌种间原生质体融合

以抗生素抗性为选择标记进行角毛壳菌和球毛壳菌种间原生质体融合。角毛壳菌CH21-I-402菌株对潮霉素有抗性、对G418敏感,球毛壳菌CH08对潮霉素和G418敏感。根癌农杆菌介导的新霉素磷酸转移酶基因转化球毛壳菌,得到成功转化新霉素磷酸转移酶基因的球毛壳菌菌株,转化子对G418抗性提高3~4倍,对潮霉素仍然比较敏感。以耐潮霉素、不耐G418的角毛壳菌和不耐潮霉素、耐G418的球毛壳菌为出发菌株,以PEG6000为助融剂进行原生质体融合,用G418和潮霉素抗性进行筛选,获得再生菌株。经AFLP分析表明:再生菌株PF1、PF26为融合菌株,融合菌株菌落形态均与亲本存在明显差异。     

耐铅微生物筛选及其铅去除能力的初步研究

从铅锌尾矿厂周围土壤样品中分离出4株耐铅菌。4株耐铅菌均能在Pb²⁺浓度范围为100~1000 mg/L的培养液中生长。在pH 6, 25℃, 160 r/min及初始Pb²⁺浓度为600 mg/L时, 菌株Pb-X-1, Pb-Z-3和Pb-Z-4的Pb²⁺去除率分别为78.31%, 77.8%和87%。菌株Pb-X-2在初始Pb²⁺浓度为100~400 mg/L时, 去除率均高于95%。16S rRDA基因序列分析表明, Pb-X-2属于嗜麦芽寡养单胞菌。菌株Pb-X-2对溶液中铅离子的去除机理为细胞表面吸附与胞内富集。     

嗜麦芽寡养单胞菌菌株间羟基化烟碱类杀虫剂吡虫啉的机制差异

嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophilia CGMCC1.1788,R551-3和K279a菌株均具有羟基化烟碱类杀虫剂吡虫啉IMI的能力,其中CGMCC1．1788菌株的羟基化能力明显高于其他两个菌株．细胞色素P450酶抑制剂胡椒基丁醚抑制CGMCC1,1788菌株的IMI羟基化活性,但不抑制R551-3和K279a菌株的IMI羟基化活性;黄素单加氧酶抑制剂甲硫咪唑均抑制3个菌株的IMI羟基化活性．上述结果表明在S．maltophilaCGMCC1．1788中存在细胞色素P450和黄素单加氧酶催化的两种IMI羟基化机制．R5513和K279a蛋白组比较分析表明,K279a菌株中没有细胞色素P450酶,其催化的IMI羟基化只有黄素单加氧酶参与．由此可见,不同S．maltophilia菌株中具有不同的IMI羟基化机制．该研究对于了解IMI的羟基化机制有一定的理论意义．     

一株固氮菌的筛选、鉴定及混菌发酵制备复合型菌糠菌肥的研究

为了利用固氮菌和溶磷微生物制备复合型菌糠菌肥,从辣椒根际处采集的土样中,根据Ashby无氮琼脂平板上的菌体长势,筛选出一株固氮菌YX.经形态学、生理生化特征和系统进化分析,确定菌株YX归属于嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia).YX菌固氮量可达28.27±2.4 mg/L,溶磷量...     

Physiological Study of Stenotrophomonas maltophilia DHHJ in Feather Biodegradation:Structural Remodeling of Cell Surface and Dynamic Change in Kerastinase Activity

Poultry industry produces a vast amount of feather waste annually, which forms a burden for environment protection.However, feathers are valuable bio-resources with high keratinaceous protein content and can be converted into more valuable materials through some approaches such as biodegradation by microorganism-derived keratinases. The characters of keratinases in microorganisms remain largely undetermined. In this study,it is reported that the morphological change of cell surface and the activities of intracellular and extracellular keratinases in Stenotrophomonas maltophilia( S. maltophilia) DHHJ. S. maltophilia DHHJ was cultured on lysogeny broth( LB) and feather broth(FB) through fermenter technology,and ultrastructure of cell and keratinase activity including extracellular and intracellular enzyme were observed respectively. Ultrastructural change on the cell surface was only observed for the bacteria cultured on FB medium,but not on LB,suggesting that the change could be induced by feather keratin. Therefore, the results showed that extracellular keratinase is a kind of induction enzyme while intracellular keratinase is a kind of constitute enzyme in S. maltophilia DHHJ.     

嗜麦芽糖寡养单胞菌H002对铀的生物吸附

为处理铀元素造成的大规模水体污染,本研究拟采取生物治理的策略,以微生物吸附的方法来达到去除铀污染的目的.本实验从142株具有辐射抗性的细菌分离物中,筛选并鉴定到一株对重金属铀具有高度耐受能力的菌株H002;经16s rRNA和生理生化鉴定,确定H002属于嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia).通过不同参数条件下的吸附实验表明,该菌在TGY培养基中培养12 h的细胞,对铀的吸附量最大;其中细胞表面的羧基参与铀的吸附;此外,不同阴、阳离子和表面活性剂会影响H002细胞对铀的吸附,其中十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate)可以促进对铀的吸附,而高浓度CO22-和HCO3-离子则抑制铀的吸附.本研究最终得到了一株具有铀耐受能力并能吸附铀的菌株H002,具有作为清除铀污染生物材料的潜力.     

产酶苦豆子内生细菌筛选及其活性菌株鉴定

对苦豆子健康植株和种子内的内生细菌进行分离,共分离获得41株内生细菌.对41株菌株进行了分泌胞外淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶特性的研究.结果表明,有80.5%的菌株具有蛋白酶活性;有78.0%和61.0%的菌株具有淀粉酶和纤维素酶活性;具有几丁质酶和葡聚糖酶活性的菌株则较少.经16SrRNA基因序列分析鉴定,6株高活性产酶菌株与枯草芽孢杆菌属(Bacillus subtilis)、韩国丛毛假单胞菌(Pseudomonas koreensis)、固氮阴沟肠细菌(Enterobacter cloacae)、苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)和嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)亲缘关系较近,核苷酸序列一致性在98%以上.     

2007～2009年某儿童医院住院患儿细菌对抗茵药物敏感性分析

目的了解某儿童医院住院患儿药敏现状,为临床合理用药提供资料。方法统计湖南省郴州市第一人民医院儿童医院2007～2009年住院患儿5种检出菌对19种抗菌药物药敏试验结果并与其他地区比较。结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、嗜麦芽窄食假单胞菌对氨苄两林、氨苄西林一舒巴坦、头孢噻吩、头孢呋辛、头孢噻肟敏感率均低于20％,对头孢哌酮、头孢他啶、环丙沙星、阿米卡星、复方甲基异恶唑、氯霉素敏感率介于20％-95％之间,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对亚胺培南敏感率大于96％,嗜麦芽窄嗜假单胞菌对亚胺培南敏感率为0;金黄色葡萄球菌对青霉素、克林霉素敏感率低于20％,对万古霉素、利福平敏感率高于85％,对头孢呋辛、头孢噻肟、四环素、庆大霉素敏感率介于60％～90％之间;肺炎链球菌对头孢呋辛、头孢噻肟、万古霉素敏感率大于85％,对青霉素、苯唑西林、克林霉素、四环素敏感率介于40％～75％之间。结论要加强临床分离菌对抗菌药物的敏感性监测。     

重症监护室非发酵菌的检出率及其耐药性分析

目的:回顾性分析某医院重症监护室(ICU)2010年1月1日-2010年12月31日之间感染病原菌中非发酵菌的分布及其耐药情况。方法:用VITEK-32仪鉴定细菌,K-B纸片扩散法做体外药敏试验,统计、分析非发酵菌的检出率和药敏结果。结果:560份ICU标本,医院感染分离菌株335株。其中,非发酵菌181株。非发酵菌的阳性检出率为32.32%,其中,铜绿假单胞菌最为常见(65株,19.40%),其次为鲍曼不动杆菌(53株,15.82%)、洋葱假单胞(31,9.25%)和嗜麦芽窄食单胞菌(28,8.36%)。分离菌中标本来源以口痰最常见,其次为静脉导管、静脉血和胸腹水。铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、洋葱假单胞和嗜麦芽窄食单胞菌对多种抗菌药物均具有较高的耐药性。结论:医院感染病原菌中非发酵菌的检出率较高且耐药性强;治疗非发酵菌感染应根据体外药敏试验结果选用敏感的抗菌药物,以减低耐药率。     

嗜麦芽糖寡氧单胞菌H002的基因组分析及对铀胁迫的转录组响应

为探究嗜麦芽糖寡氧单胞菌H002响应金属铀冲击的分子机制及生物修复铀污染的潜力，本研究从基因组和转录组两个层面进行了分析.基因组测序结果表明，H002基因组大小为5 099 056 bp,预测编码4780个蛋白；与其他6个近缘菌株相比，H002拥有344个独特的编码基因，涉及膜转运、细胞运动和分泌等功能.转录组分析显示，在铀胁迫的早期(1 h),差异基因主要富集于细胞运动、分泌、蛋白质和肽聚糖合成等KEGG途径.部分分泌通道相关基因的表达下调，可降低细胞对铀离子的摄取，进而减轻铀离子对细胞的毒性.在铀胁迫的后期(2 h和4 h),参与铀生物矿化的磷酸酶相关基因和能够提供还原电子的细胞色素c基因的表达上调，能以主动方式降低铀的细胞毒性.     

Spectrofluorimetric determination of tetracycline using Eu3+ chelation and cetyltrimethylammonium bromide

The fluorescence of tetracycline was greatly enhanced by chelation with Eu³⁺ in Tris-HCl buffer (pH8.5). The addition of cetyltrimethylammonium bromide, a cationic surfactant, further enhanced the fluorescence of tetracycline-Eu³⁺ chelates. This spectrofluorimetric method for the determination of tetracycline yielded a linear responses in the range of 10 nmol/L–10 μmol/L. The detection limit was 5 nmol/L (or 2.22 ng/mL). The recovery of tetracycline spiked in serum at levels of 1 and 0.09 μg/mL was 97.9% and 97.8%, respectively. This method is fast, sensitive and suitable for the determination of tetracycline in biological specimens. Foundation item: Supported by the National Natural Science Foundation of China Biography: Huang Zu-yun (1963-), male, Ph D.     

插入Tn21质粒的分离和链霉素抗性基因质粒的组建

在携带R100.1和pSO101质粒的Lc2640细胞中分离到重组质粒pXZ2712,该质粒对链霉素、氯化汞、磺胺和四环索有抗性。用仅带有Tn21两个末端的质粒pXZ2作为探针进行分子杂交,发现两者有同源性,说明质粒pXZ2712是由Tn21插入质粒pSC101所组成的。以pXZ2712质粒中分离到的带有链霉素抗性基因的片段,组建了带有抗链霉素基因的pXZ6(14.5kb)、pYP1(9.7kb)、pYP22(9.1kb)和pYP4(4.0kb)等质粒载体。