密孔菌固态发酵农业废弃物产漆酶活性的研究

分别以玉米秸秆、小麦秸秆和杨树木屑为原料,研究了一株密孔菌在发酵不同农业废弃物时漆酶的活性.结果表明,农业废弃物对密孔菌产漆酶具有良好的诱导效果,且以玉米秸秆的效果最佳,漆酶酶活可达40.92 U·mg~(-1).Cu~(2+)的存在或浓度变化显著影响密孔菌产酶,当添加0.02%Cu~(2+)时,菌株在小麦秸秆和木屑培养基上产酶活分别达到41.24 U·mg~(-1)和57.13 U·mg~(-1);当Cu~(2+)浓度为0.04%时,菌株在玉米秸秆培养基上分泌漆酶酶活达到峰值94.92 U·mg~(-1).p H值对密孔菌产漆酶有明显影响,在中酸性环境中菌株产漆酶酶活较高.菌株在小麦秸秆和玉米秸秆培养基上发酵产酶的最适温度较高,分别为35℃和40℃,且在整个发酵周期能维持较高较稳定的酶活水平.因此,密孔菌有很好产漆酶和降解农作物秸秆的能力,可用于农作物秸秆处理.     

改性凹凸棒石粘土对固态发酵氨化秸秆生产动物饲料影响的研究

采用氨化处理方法对粉碎后的玉米秸秆进行预处理,利用糙皮侧耳Pleurotus ostreatus P5对氨化秸秆进行固态发酵,研究了在发酵过程中添加不同比例的酸改性方法处理的凹凸棒石粘土对固态发酵的影响;固态发酵15 d结束.结果表明,添加改性凹土可以有效提高发酵产物的粗蛋白含量,添加量为2%时粗蛋白含量最高,达19.26%;添加2%改性凹土可以明显增强漆酶酶活,对纤维素酶酶活也有所提高;添加改性凹土可在氨化处理的基础上进一步提高秸秆的消化率,提高其营养水平,具有较高的应用价值.     

一株降解小麦秸秆丝状真菌的筛选、鉴定及初步研究

利用涂布平板法从腐烂秸秆及枯枝烂叶中分离出71株丝状真菌.通过比较菌株秸秆粉降解产物对小麦生长的促进作用,获得一株可有效降解秸秆并促进小麦生长的菌株2-5-2.对其进行形态分析和rRNA序列鉴定,结果显示,该菌株为木霉属真菌.该菌株可产生纤维素酶、木质素酶、半纤维素酶、几丁质酶、蛋白酶、壳聚糖酶.平板对峙培养显示,该菌对多种病原真菌的生长有抑制或阻碍作用.固态发酵培养时,纤维素酶、半纤维素酶酶活在第11d达到最高;第28d,纤维素降解率达到21.13%,半纤维素降解率达到28.53%.     

混菌固态发酵油菜秸秆铜离子和草酸对灵芝木质素酶系分泌的影响

研究了铜离子(1、1.5、2和2.5mmol/L)和草酸(2、4和6mmol/L)对灵芝和产朊假丝酵母混菌固态发酵油菜秸秆产木质素降解酶系的影响.结果表明:与对照相比,添加2 mmol/L的铜离子,可显著提高漆酶和锰过氧化物酶的酶活力,其活力分别为1032.77和840U/L,是不加铜离子的2.53和2.40倍;而与对照相比,添加1mmol/L铜离子可显著提高木质素过氧化物酶活力,其活力为319.89U/L,是不加铜离子的2.08倍,添加1.5、2和2.5mmol/L的铜离子时对木质素过氧化物酶有抑制作用,抑制率分别为30.71%、18.95%和11.11%.与对照相比,添加2、4mmol/L草酸可显著提高漆酶活力,其活力分别为1111.44、1301.89U/L,是不加草酸的2.73、3.2倍.添加4mmol/L草酸可显著提高锰过氧化物酶活力,其活力为693.33 U/L,是不加草酸的1.98倍;而2、4和6mmol/L草酸的添加抑制了木质素过氧化物酶的活性,抑制率分别为43.03%、28.81%和33.73%.     

白腐菌对秸秆中木质素生物降解的研究

研究了白腐菌及其产生的木质素降解酶系对秸秆的木质素生物降解方法，探讨了黄孢原毛平革菌和杂色云芝单一菌株生物降解及双菌株联合降解木质纤维素的规律，白腐菌双菌联合固态培养可使木质素降解率达到47．64％，脱木素选择性为4．74．采用模拟大规模白腐菌堆积培养（厚度30cm）的方法降解秸秆木质素，培养30d，木素降解率为32．54％，表明此方法是一种可行的大规模生物顸处理方法．     

白腐菌产漆酶的发酵条件研究

漆酶(E.C.1.10.3.2)是一类含铜的氧化还原酶,其可以催化对苯二酚(也叫氢醌)氧化生成对苯醌,也常被称为对苯二酚氧化酶。漆酶一般存在于真菌和植物中,由于具有较高的稳定性和较好的底物专一性,在印染和环境有机毒性化合物的降解、专用生物传感器的构建、以及造纸领域有机废弃物的生物加工利用等方面具有实际工业应用。考察了白腐菌的培养和产漆酶条件,对白腐菌产漆酶的培养条件和培养基进行了优选。结果显示,以小麦皮为碳源,硫酸铵和尿素为氮源,白腐菌生长产酶的适宜培养温度为28℃,pH值为3.5~6.0,培养基的C/N比以20合适。当培养基中添加一定的木质素沉淀物和葡萄糖时对白腐菌液体发酵产漆酶具有明显的促进作用,菌体发酵液中加入10 g/L的葡萄糖、6 g/L木质素时发酵产漆酶的活力达到最大值。     

一组高温混合菌对木质素纤维素的降解

对秸秆中木质素纤维素的生物预处理进行研究.采用高温混合菌对滤纸和玉米秸秆进行降解实验.在50℃,第7天滤纸失重率为76.2%;第30天玉米秆失重率为34.23%,玉米秸秆中木质素、纤维素和半纤维素的降解率分别为56.36%,42.88%,62.77%.混合菌在50℃条件下对玉米秸秆中的木质素、纤维素、半纤维素均有较高的降解效果.     

热化学预处理玉米秸秆制备沼气发酵原料

由于木质纤维素原料的特殊结构,导致其在发酵过程中存在发酵启动慢、易结壳、原料利用率低等问题.以玉米秸秆为发酵原料,利用流化床热解反应器在200℃下对其进行了热化学预处理,并对预处理前后玉米秸秆的木质纤维素含量进行了测定.采用扫描式电子显微镜对处理后的玉米秸秆进行了微观结构表征.结果表明:处理后的玉米秸秆其木质素含量远低于未处理玉米秸秆,去除率达到32.57%;经过热化学预处理的玉米秸秆表面结构变得松散且有孔洞产生.实验证明热化学预处理利于发酵,能够提高产气速率,增加产气量.     

白腐菌F8的分离及降解木质素能力研究

从松林土壤中分离得到一株白腐菌F8,经Bavendamn氏显色反应证实其能产生漆酶.在液体培养条件下,该菌株能产生木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶和漆酶.其降解木质素的最佳条件为100 r/min、33℃、pH5.5、接种量5%,在此条件下,木质素降解率达71.98%.     

汽爆玉米秸秆渣诱导产纤维素酶及其水解特性

为提高玉米秸秆的生物降解效率,研究了汽爆处理玉米秸秆渣对纤维素酶的诱导作用及所产纤维素酶的水解特性。结果表明：玉米秸秆采用汽爆处理可以去除大量的半纤维素成分,获得的汽爆渣对里氏木霉NL02合成纤维素酶的诱导作用良好,以10 g/L的汽爆渣为碳源发酵7 d滤纸酶活达到1.90 U /mL。发酵5 d获得的汽爆酶水解效果最佳,当酶用量25 U/g,底物质量浓度50 g/L条件下,水解24 h酶解得率达到95.9%,水解48 h葡萄糖产率为76.4%。当汽爆渣质量浓度为80 g/L,酶用量为15 U/g时,48 h酶解效率达到90.1%,葡萄糖产率为62.9%。     

灵芝漆酶活性测定条件的优化

本研究以2,2’-连氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(简称ABTS)为底物,测定灵芝漆酶活性的方法,探讨了酶反应温度、缓冲液及其pH值等条件对灵芝漆酶催化反应的影响。结果表明,ABTS法测定灵芝漆酶活性的最佳条件为:以pH3的0.05mol/L的磷酸氢二钠-柠檬酸溶液为反应溶液,反应温度65℃。     

灵芝漆酶的分离纯化及其部分酶学性质研究

将灵芝（Ganoderma lucidum）漆酶经过Sephadex G-75和DEAE-Sepharose Fast Flow两步纯化,获得具有3个同工酶的组分,并且纯度提高了81倍,酶活回收率高达83.9%。以ABTS为底物,漆酶最适pH值是2.2～2.6,在pH值4.6～7.8范围内稳定;最适温度45℃,在低于45℃时较稳定。大部分金属离子、酸根离子对灵芝漆酶普遍有抑制作用,除盐可以提高漆酶活力。     

漆酶处理对碱木素热塑加工过程中VOCs挥发量的抑制作用

探讨了漆酶处理碱木素对其热塑过程中VOCs挥发量的控制作用.采用顶空气相色谱仪(HS-GC)和热重分析仪(TGA)对木素热塑过程中VOCs挥发量进行定量分析.HS-GC检测结果表明,经漆酶处理后木素热塑过程中VOCs挥发量减少35.7%.TGA数据分析显示,热塑温度为190,℃时,漆酶处理后木素中VOCs含量比空白样少0.9%(相对于木素质量).进一步采用气相色谱–质谱联用仪(GC-MS)和凝胶渗透色谱仪(GPC)对漆酶作用原理进行探索,结果显示,漆酶处理后碱木素反应滤液中小分子酚类物质含量减少,而碱木素相对分子质量增大,表明在漆酶处理后,碱木素中的小分子酚类物质发生聚合或与木素大分子接聚,导致碱木素热塑过程中VOCs的挥发量减少.     

灵芝液体发酵过程中检测指标的研究

采用液体发酵法研究了灵芝培养过程中发酵液pH值、菌丝体生物量、胞外胞内多糖含量及漆酶和羧甲基纤维素酶活性的变化规律,结果表明:菌丝体生物量、胞外胞内多糖含量及漆酶和羧甲基纤维素酶活性在整个培养过程中均呈先升后降趋势,pH值前3天下降,之后基本不变;菌丝体生物量、胞内多糖含量及漆酶和羧甲基纤维素酶活性具有相同时间效应和变化趋势,均在发酵4d后达到峰值.漆酶和羧甲基纤维素酶活性可以反映灵芝菌丝体生长状况,且相对于其它检测指标更为灵敏、简便,可用于发酵过程指示和控制.     

TREATMENT OF SWEET GUM LIGNIN BY LACCASE AND LMS

INTRODUCTIONLaccaseisakindofcopper-containingoxidase熏whichwidelydistributesinplantsandmostfungi.Laccasecancatalyzetheoxidationofphenolicsubstances熏soitiswidelyusedinmanyfieldssuchaschemical熏environmental熏biologicalandpapermakingetc.laccaseInpapermakin…     

秀珍菇废渣中木质素降解酶系的研究

【目的】重点研究秀珍菇废渣中的木质素降解酶系。【方法】对秀珍菇废渣中可能存在的3种木质素降解酶:锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,MnP)、木质素过氧化物酶(Lignin peroxidase,LiP)及漆酶(Laccase,Lac)进行活力测定,并对漆酶的最适pH值和最适温度进行考察。【结果】在秀珍菇废渣中未检测到锰过氧化物酶活力,检测到漆酶和木质素过氧化物酶活力。漆酶的最适pH值为6.2,最适温度为30℃。【结论】较一般食用菌不同,秀珍菇废渣中同时具有木质素过氧化物酶和漆酶活力,并且木质素过氧化物酶活力还较高。     

金针菇降解木质素的能力及相关酶活研究

通过对10个金针菇菌株研究发现,在液体培养下不同菌株降解木质素的能力有较大差异,其中金针菇J89-6具有一定的降解木质素的能力,降解率达46%.本文还测定了不同菌株的漆酶、木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶三种木质素降解酶的酶活,结果显示漆酶的产量与木质素降解率呈正相关关系.     

不同产地灵芝中16种矿物元素的TXRF测定

了解不同产地灵芝中K、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、As、Se、Rb、Sr和Pb 16种矿物元素的含量。灵芝样品经粉碎后,微波消解处理,采用全反射X射线荧光分析法(TXRF)同时测定灵芝粉中16种矿物元素。仪器检出限(LLD)在0.001~0.011 mg/L之间,方法检出限(LDM)在0.003~0.143 mg/kg之间。各元素加标回收率在92.0%~105.5%之间。灵芝中K、Ca、Zn和Se等元素含量非常丰富,K和Ca元素平均含量分别在2 000 mg/kg和1 000 mg/kg左右。山东和四川产地的Mn略高于其他产地,山东产地的Sr低于其他产地。结论:微波消解-全反射X射线荧光分析(TXRF)法可以应用于测定灵芝中的多种矿物元素。不同产地的灵芝均含有所测的16种矿物元素,这16种元素的含量差异性不显著(p0.05),这些微小差别可能和产地、气候以及采摘期有一定的关系。     

漆酶的分子生物学研究及其应用

白腐菌所分泌的木质素降解酶主要有3种：木质素过氧化物酶、锰依赖过氧化物酶和漆酶．漆酶是近年来研究较多的一种含铜的多酚氧化酶，在白腐菌中普遍存在，也存在于少数低等真菌和植物中．漆酶多为酸性蛋白，含4个铜离子，形成3个活性区域；表面一些氨基酸被不同程度地糖基化．漆酶可催化的底物迭250种，铜离子结合区域在其催化氧化过程中起决定性作用．运用PCR技术cDNA文库技术，越来越多的漆酶基因被克隆，目前已克隆到的漆酶基因有大约20个．许多来源地基因都是以家族地形式存在于染色体上的．已研究的漆酶基因中都含有10个左右的内含子，这些内含子在活性域位置上有比较高的保守性．一些特珠序列存在与否决定了该酶的表达形式-诱导型或组合型．目前已有部分漆酶基因的异源表达获得成功．本文还介绍了漆酶在环境保护、造纸工业、食品工业等方面的应用．对近年来漆酶的研究进展进行了综述．     

土法造纸木素降解之探索──Ⅱ.嫩毛竹自然制浆过程中的化学成分变化及其分析方法

对江西三处嫩毛竹自然制浆过程中的化学成分变化进行了测定，得知在此过程中，嫩竹木素下降50％～70％；半纤维素下降20％～30％；纤维素含量相对提高25％～45％。不同的土法制浆工艺得到不同质量的纸张，其化学成分也有明显差异。同时在实验室模拟了嫩竹发酵过程，对其化学成分变化进行了监测。结果表明，经2．5％石灰液浸泡嫩竹70d（室温），木素含量下降45％左右，半纤维素变化很小；用天然水浸泡嫩竹70d（室温），半纤维素略有下降，木素则几乎没变，先用石灰水预浸3周，再改用自选的芽抱菌液浸泡嫩竹，经1周就达制浆水平，木素下降59％。还对分析方法做了些探索。