人血清白蛋白与叶酸相互作用的荧光光谱法研究

基于荧光光谱技术,研究了人血清白蛋白与叶酸的相互作用.结果表明:人血清白蛋白与叶酸共存时会发生相互作用;叶酸对人血清白蛋白荧光光淬灭机制为静态淬灭,且在发生荧光淬灭的同时生成了蛋白质与药物的复合物;人血清白蛋白是通过疏水性作用力与叶酸发生相互作用的,叶酸在血清白蛋白中仅有一个结合位点.     

流动注射分光光度法测定蛋白质的含量

在pH2.20的Clark-Lubs缓冲介质中,刚果红与蛋白质作用,在室温下能迅速结合形成复合物,其最大吸收波长为500nm.用流动注射分光光度法研究了该结合反应的最佳条件,并在此基础上建立了测定蛋白质的新方法.检测牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HAS)的线性范围均为2～90μg.mL-1,检测限分别为0.42μg.mL-1和0.44μg.mL-1,测定频率达65次.h-1.本方法具有简便、快速、选择性好、灵敏度高等特点,应用于尿液及人血清中总蛋白的测定,结果与考马斯亮蓝G-250法基本一致.     

硫脲新试剂探针测定唾液中蛋白质含量研究

基于N-戊基-N′-(对氨基苯磺酸钠)硫脲(APT)与血清白蛋白(HSA)相互作用引起血清白蛋白的同步荧光发生特异性变化,且体系的同步荧光强度和溶液中血清白蛋白的浓度呈良好的线性关系,建立了以APT为分子探针,运用固定波长同步荧光光谱分析测定生物样品中蛋白质含量的新方法.在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度与人血清白蛋白在2.0～479.0mg·L-1范围内呈良好的线性关系,方法的检测限可达1.6mg·L-1.本实验对人唾液中的蛋白质进行了测定,回收率在96.4%～98.1%之间.对11份空白溶液进行平行测定,相对标准差为0.86%.实验结果表明:该方法具有简单快速、灵敏度较高、线性范围宽、精密度高、选择性和回收率较好等优点.     

Pichia酵母宿主细胞DNA残留量检测方法的建立

为检测重组人血白蛋白中外源性DNA残留量,以宿主酵母工程菌基因组DNA为模板,使用地高辛标记探针进行点杂交.结果证明:该方法检测灵敏度较好,特异性较强,操作安全简便,可用于重组人血白蛋白的检测.     

咖啡因与牛血清和人血清白蛋白相互作用:荧光光谱“内滤光效应”的校正

用荧光光谱和紫外吸收光谱法研究咖啡因与牛血清白蛋白和人血清白蛋白的相互作用.实验结果表明,咖啡因与牛血清白蛋白的结合主要是静态猝灭过程,而与人血清白蛋白的结合则是动态猝灭过程.获得了不同温度下,咖啡因与血清白蛋白作用的结合常数以及ΔH、ΔG和ΔS等热力学参数.由于咖啡因在荧光激发波长处有吸收,其猝灭行为中包含有"内滤光效应",因此我们对荧光实验数据进行了校正,结果显示"内滤光效应"使咖啡因与血清白蛋白的结合常数升高.另外,用紫外光谱和圆二色谱考察了咖啡因对血清白蛋白二级结构的影响,位点竞争实验表明咖啡因与牛血清白蛋白的结合主要发生在siteⅠ(sub-domainⅡA)位.     

光谱法研究螯合剂对人血清白蛋白中络合铜的影响

本文在溶液中研究了人血清白蛋白和铜络合物的吸收光谱。观察了螯合剂EDTA促排人血清白蛋白中络合铜的行为。基于DSCPCF配位场模理对吸收光谱作了理论解析。     

免疫丙种球蛋白的缔合与分离及其动态性质

用凝胶渗透色谱法研究了聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、血清白蛋白和医用明胶等稳定剂对免疫丙种球蛋白(IgG)的作用和效果,结合准弹性激光光散射法研究了它们对IgG分子平移扩散系数和流体力学尺寸的影响。结果表明,PVP和血清白蛋白对IgG单体起着屏蔽稳定作用而防止其自身凝聚,但并不与IgG形成复合物,因而不会改变IgG单体的分子结构与构型。     

超滤质谱法研究人血清白蛋白与甘草提取物的相互作用

为研究和筛选甘草提取物中的活性成分,采用超滤质谱法(UF-MS)研究了人血清白蛋白和5种甘草提取物(甘草苷、甘草酸、甘草素、甘草呋喃酮和甘草利酮)的相互作用.结果表明:这5种甘草提取物均与人血清白蛋白有不同程度的结合,其中甘草酸的结合能力最强,其次是甘草苷、甘草素、甘草呋喃酮和甘草利酮.说明超滤质谱法可准确识别与受体蛋白质结合的活性小分子配体,实现天然产物活性成分的快速筛选.     

药物分子与血清白蛋白结合反应的荧光法研究进展

综述了荧光法对药物分子与血清白蛋白相互作用的研究进展。介绍了测定药物分子在蛋白质上的结合部位、结合数、结合常数和结合力类型的基本理论和实验方法，讨论了药物对蛋白质构象的影响以及共存金属离子对结合反应的影响，列表总结了某些药物与血清白蛋白结合反应的实验结果，简要讨论了研究中存在的问题以及本领域的发展方向。     

2′-脱氧胞苷探针测定血清样品中蛋白质含量

白蛋白在血浆总蛋白中占有很大的比例,高达40%~60%,它在人体内起着至关重要的作用,可以通过分析蛋白质的含量来反映人体的健康状况.人血清白蛋白表面具有多样化的结合位点,2′-脱氧胞苷能够与人血清白蛋白(HSA)相结合,但由于这种结合改变了HSA的结构,其荧光性质也就随之发生了改变.发明了一种新的测定蛋白质的方法,用2′-脱氧胞苷作荧光探针分子结合固定波长同步荧光光谱法对蛋白质的含量进行分析.在一定的条件下,当HSA的浓度满足在1.38~276μg·mL-1这一条件时,溶液的同步荧光强度(ISF)与HSA的浓度具有确定的线性关系.通过测定11份空白溶液发现检出限为0.024μg·mL-1(n=11).对实验条件进行了探究,发现溶液的pH值、扫描波长的变化量(Δλ)、试剂的加入顺序以及溶液的离子强度等因素都会影响体系荧光光谱特征及强度.还测量了人血清中的蛋白含量,回收率在98.4%~104.3%范围内.     

偶氮胭脂红G分光光度法测定蛋白质的研究

 偶氮胭脂红G在酸性介质中与蛋白质迅速结合,生成一紫红色复合物,该复合物在570nm处有最大吸收,且其吸光强度与牛血清蛋白(BSA)、人血清蛋白(HSA)、免疫球蛋白(IgG)的质量浓度至少在15.0μg/mL范围内有线性关系.依此建立的测定蛋白质的光度分析新方法不受蛋白酶和大部分其它共存物质的影响,具有较好的选择性和较宽的线性范围,同时方法快速、稳定,用于人血清样品中总蛋白含量的测定,所得结果与测定蛋白质的经典方法考马斯亮蓝G-250法基本一致.     

离子交换层析分离纯化重组人血清白蛋白

通过层析实验，比较了几种阴离子交换剂在不同温度、pH值、离子强度、进样流速、进样浓度下对人血清白蛋白的吸队与脱附性能，研究了它们对人血清白蛋白和卵清蛋白的分离能力，并考察了桩层析过程中吸附载体对重组人血清白蛋白和杂蛋白的分离选择性，实验结果表明：版号为DEAE Sepharose FF的载体不仅对重组人血清白蛋白具有良好的分离度，而且有较高的回收率。     

探针N-戊基-N'-(对氨基苯磺酸钠)硫脲快速测定血清样品中蛋白质含量的光谱法研究

研究了N-戊基-N'-(对氨基苯磺酸钠)硫脲(APT)与人血清白蛋白(HSA)体系的三维荧光光谱,证明了两者可以发生相互作用,APT的加入导致HSA疏水微环境极性和构象的变化.考察了△λ值,pH值、离子强度、试剂加入顺序及APT用量等因素对APT与HSA体系的同步荧光强度的影响.在最佳实验条件下,体系的同步荧光强度与H...     

共振光散射光谱法测定微量蛋白质

利用光吸收和共振光散射(RLS)光谱研究了铝试剂(ATA)与蛋白质在水溶液中的相互作用.在pH2.50时,蛋白质可使弱的ATA光散射信号曾强.基于这种现象,我们运用RLS技术,建立了测定纳克级蛋白质的方法.该方法简单、实用、灵敏.BSA的线性范围为0.010~27.4μg/mL,HSA的线性范围为0.010~30.5μg/mL.BSA的检测限为10.7 ng/mL,HSA的检测限为10.2 ng/mL.对实际人血清样品中的蛋白质进行了测定,其结果与临床方法一致.氨基酸、金属离子或其它共存化合物的干扰很小.     

锌试剂-蛋白质体系的共振光散射光谱研究

 在pH 3.0的B-R缓冲溶液中,锌试剂能与蛋白质结合形成复合物.此结合反应能显著加强锌试剂的瑞利光散射信号.详细研究了此结合反应的最佳反应条件,并以此反应为基础,利用共振瑞利散射光技术,建立了一个测定蛋白质的新方法.该方法对牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)以及免疫球蛋白测定的线性范围分别为0.25~12.5,0.10~15.0μg/mL和0.10~12.5μg/mL,检出限均小于0.05μg/mL,且大量的常见金属离子、氨基酸等共存物质不干扰测定.方法具有很高的灵敏度、很好的选择性及重现性.用于血清样品中蛋白质的测定,结果满意.     

无机离子,蛋白质以及精清对番鸭（Cairina moschata）精子活力的影响

本文研究了K~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)、Cl~-等无机离子、卵清白蛋白、血清白蛋白等蛋白质以及番鸭精清对精子活力的影响,研究结果表明,稀释液中,缺少K~+时,精子很快失去活力;K~+浓度为10或20mmol/L时,精子活力最高,K~+浓度增至40mmol/L时,精子活力降低;稀释液中Ca~(2+)浓度为1或3.5 mmol/L时,精子活力明显提高;稀释液中Mg~(2+)浓度在0～4mmol/L之间变化时,对精子活力无明显影响,但浓度大于10mmol/L时,精子活力明显下降;高浓度Cl~-对精子保存不利,精清以及血清白蛋白能消除由于洗涤而造成的精子粘附现象,提高精子活力,稀释液中精清所占比例较低时,有利于精子保存。     

用荧光法研究维生素B6与白蛋白的相互作用

本文来分析用荧光碎灭法研究维生素Ｂ_６与人血清白蛋白和牛血清白蛋白间的相互作用，并对作用机理进行了分析．     

分子探针N6-羟基乙基腺苷同步荧光测定人血清中蛋白质

在模拟人体生理条件下,基于N6-羟基乙基腺苷(HEA)与人血清白蛋白(HSA)相互作用生成的复合物,导致血清白蛋白的内源荧光产生特异性变化,研究HEA-HSA体系的同步荧光光谱特征;同步荧光光谱特征及强度与Δλ值、反应温度等因素有关.在此基础上,建立了以HEA为探针测定蛋白质的新方法.在最佳实验条件下,HEA-HSA体系的同步荧光强度分别在0~331.2μg.mL-1和331.2~579.6μg.mL-1的浓度范围内与蛋白质浓度呈良好的线性关系,方法的检测限为4.43 ng.mL-1.实验结果表明:该法具有简单、快速、灵敏度高等优点,可直接用于人血清样品中蛋白质总量的测定,结果令人满意.     

Crumbs, the Drosophila homologue of human CRB1/RP12, is essential for photoreceptor morphogenesis

The apical transmembrane protein Crumbs is a central regulator of epithelial apical-basal polarity in Drosophila. Loss-of-function mutations in the human homologue of Crumbs, CRB1 (RP12), cause recessive retinal dystrophies, including retinitis pigmentosa. Here we show that Crumbs and CRB1 localize to corresponding subdomains of the photoreceptor apical plasma membrane: the stalk of the Drosophila photoreceptor and the inner segment of mammalian photoreceptors. These subdomains support the morphogenesis and orientation of the photosensitive membrane organelles: rhabdomeres and outer segments, respectively. Drosophila Crumbs is required to maintain zonula adherens integrity during the rapid apical membrane expansion that builds the rhabdomere. Crumbs also regulates stalk development by stabilizing the membrane-associated spectrin cytoskeleton, a function mechanistically distinct from its role in epithelial apical-basal polarity. We propose that Crumbs is a central component of a molecular scaffold that controls zonula adherens assembly and defines the stalk as an apical membrane subdomain. Defects in such scaffolds may contribute to human CRB1-related retinal dystrophies.     

Pb2+与HSA或BSA的结合平衡研究

用平衡透析法详细研究了模拟生理pH值为6．3条件下,Pb^2＋与人血清白蛋白（HSA）或牛血清白蛋白（BSA）的结合平衡。Scatchard图分析表明,Pb^2＋在BSA和HSA中分别有1．6和1．8个强结合位点,通过非线性最小二乘法拟合Bierrum方程,得到了Pb^2＋-HSA体系和Pb^2＋-BSA体系的逐级稳定常数,其中K1,K2均明显大于其余K值。Hill系数分析表明,Pb^2＋与HSA或BSA的结合存在弱负协同效应。