稻瘟病抗性基因Pi36的表达分析

为研究稻瘟病抗性基因Pi36的表达模式,利用半定量RT-PCR对抗病亲本Kasalath和感病亲本丽江新团黑谷(LTH)进行了接种前和接种后24 h和48 h的表达分析.结果表明:Pi36无论在接种前还是接种后以及无论在抗病亲本Kasalath还是感病亲本LTH中均有表达,并且各个时间段的表达量没有大的差别.由此说明,Pi36属于组成型而不是诱导型表达的基因.     

小麦条锈菌实时荧光定量PCR检测方法的建立

为了研究青海省小麦条锈菌在小麦潜育期叶片菌源量,文中以小麦条锈菌延伸因子EF1为引物,利用实时荧光定量PCR技术建立了小麦条锈菌潜育期菌源量检测体系。结果表明:(1)小麦条锈菌延伸因子EF1引物能从小麦叶片gDNA中扩增出特异性目的片段243 bp。(2)实时荧光定量PCR检测体系的灵敏度是常规PCR灵敏度的100倍。(3)铭贤169叶片接种小麦条锈菌后第1天到第8天均检测到条锈菌,且菌源量随着天数的变化呈指数型增长趋势。本研究建立的检测体系可检测到小麦条锈菌在小麦潜育期叶片菌源量,为早期小麦条锈病的发生和防治提供理论依据。     

水稻幼苗叶片应答稻瘟病侵染的差异蛋白谱分析

为了探讨水稻感病基因型种质响应稻瘟病侵染的蛋白质表达谱的变化规律和作用途径,以水稻感稻瘟病种质日本晴为材料,采用接种稻瘟病菌分生抱子悬浮液,24,48和72 h后提取叶片蛋白质,采用i TRAQ蛋白质组学技术研究稻瘟病胁迫下水稻叶片蛋白质组的变化.结果表明,稻瘟病侵染诱导了水稻幼苗叶片内涉及氧化还原平衡、防御、信号传导、糖和能量代谢、氨基酸代谢、光合作用,以及蛋白质代谢等代谢途径相关的53个蛋白质的表达量发生了改变.GO分析表明稻瘟病主要调控了植株体内细胞内平衡、代谢过程和蛋白质代谢等生物学过程.稻瘟病侵染激活了活性氧代谢、防御,以及热休克蛋白等相关的途径,而抑制了蛋白质生物合成过程.结合这些差异表达蛋白的丰度变化结合它们可能的功能,描绘了水稻应答稻瘟病侵染的蛋白质代谢网络,有助于在蛋白质水平上了解其应答过程.     

适用于小麦叶片总蛋白分析的双向电泳技术

双向电泳技术越来越成为植物蛋白质组研究中的关键技术,样品制备、固相预制胶条水化、等电聚焦及SDS—PAGE都是影响双向电泳结果的重要步骤,本研究以晋麦47号小麦叶片为研究材料,在样品除盐、预制胶条水化方式、第二向SDS—PAGE电压选择方面进行了探索与优化,通过比较双向电泳图谱,建立适用于小麦叶片总蛋白质分析的双向电泳技术体系．结果表明：样品经多步除盐并加长除盐时间后进行双向电泳,蛋白能较好地被分离,2-DE图谱蛋白点较多,分辨率较高;IPG胶条先后经被动水化与主动水化比仅主动水化的2-DE图谱蛋白点损失少;第二向SDS—PAGE中电压选择120V较200V的2．DE图谱蛋白点拖尾少,纹理现象少．     

甘蔗叶片蛋白质组双向电泳技术优化

为了建立适合甘蔗叶片蛋白质组研究的双向电泳技术,对甘蔗叶蛋白质的溶解方法、IEF电泳、上样量等关键步骤进行了优化.结果表明:裂解液中有2 mmol/L的硫脲才能更充分地溶解蛋白;上样量1.0 mg时得到质量较好的凝胶图谱;甘蔗叶片蛋白质主要分布在pH4～7范围.通过对甘蔗叶片蛋白双向电泳技术的优化,提高了双向电泳图谱分...     

美洲黑杨×毛果杨NDR1基因表达对E4锈菌侵染的响应

【目的】非小种专化抗病因子1(non-race-specific disease resistance 1,NDR1)可将病原入侵信号传入细胞膜内,继而激活含有CC结构域的CC-NBS-LRR抗性蛋白,介导植物抗性反应。探究杨树NDR1基因功能,克隆获得美洲黑杨×毛果杨(简称杂交杨)的PdtNDR1基因,并对PdtNDR1抗叶锈病基因表达进行研究。【方法】采用接种试验鉴定杂交杨和欧美杨与落叶松-杨栅锈菌E4强致病生理小种。采用PCR技术克隆杂交杨和欧美杨的NDR1基因(PdtNDR1和PndNDR1),并通过生物信息学分析其编码蛋白的结构与功能。采用荧光定量PCR技术分析锈菌接种后7个时间点PdtNDR1和PndNDR1的表达量变化。【结果】接种试验表明欧美杨是E4锈菌的感病品种,与E4锈菌构成亲和型互作关系。杂交杨是低感病品种,与E4锈菌构成非亲和型互作关系。生物信息学分析表明PdtNDR1和PndNDR1属于NHL家族。氨基酸序列分析表明PdtNDR1的N末端13—34位氨基酸和C末端嵌合在细胞膜上,中段氨基酸序列位于细胞外可以接触病原的侵染信号,N末端位于细胞内可将病原侵染信号传递到细胞内。荧光定量PCR技术检验锈菌接种后7个时间点PdtNDR1和PndNDR1对E4锈菌侵染的应激反应差异显著。PdtNDR1基因表达量在E4锈菌接种后持续增强,PndNDR1基因表达量未显著增加。【结论】PdtNDR1基因表达与杂交杨对E4锈菌的感病性正相关,决定杂交杨与锈菌的非亲和关系。     

油菜双向电泳技术体系的优化

为建立一套可以较好地分离油菜不同器官(花蕾、化药、叶片)的双向电泳技术体系,对IPG胶条的pH范围、凝胶染色的方法以及蛋白质的上样量进行优化.结果表明,以pH=4~7,17cm的IPG胶条进行双向电泳,胶体考马斯亮蓝染色,蛋白质上样量为800μg时,油菜的花蕾、化药以及叶片蛋白质均可得到很好的分离,获得的2-DE凝胶图谱清晰.为检验优化后的双向电泳技术体系与质谱的兼容性,选取10个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析,发现这些蛋白质点经质谱分析后均可得到成功鉴定.表明该分离体系与质谱兼容性较好,蛋白质点鉴定成功率较高.     

小麦(Triticum asetivum L.)杂交种下调表达的GTP结合蛋白基因TaRab的克隆与鉴定

杂种优势的形成与杂种一代中亲本基因的表达方式改变有关.为深入研究小麦杂种优势形成的分子机理,利用通过抑制性差减杂交(SSH)方法获得的小麦Rab类GTP结合蛋白基因片段为探针,筛选普通小麦品系3338三叶期叶片cDNA文库,获得了一个小麦Rab家族基因TaRab.同源性比较和序列分析显示,该基因与拟南芥Rab类GTP结合蛋白基因具有90%氨基酸序列相似性.结构分析表明,它具有GTP结合蛋白4个典型结构以及Rab家族成员特有的YYRGA结构域.半定量RT-PCR表达检测结果显示,TaRab基因在叶片的表达水平要高于其他组织器官.研究还发现,该基因在三叶期、分蘖盛期的根系和叶片中为杂种下调表达.采用电子定位方法,将TaRab基因初步定位在7B染色体的着丝粒区域和C-7DS5-0.36两个区域.在此基础上,对Rab蛋白基因差异表达与杂种优势表现的关系进行了讨论.     

酒葡萄对霜霉病的抗性机理初探

对5个不同抗性的酒葡萄品种进行感病性鉴定,并对其成熟叶片进行接种,以不接种作为对照。4天后测定叶片中的过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、可溶性糖含量和蛋白质含量。结果表明:5个供试品种均不同程度感霜霉病。感病轻的梅鹿辄、SV6059品种接种后的POD活性、可溶性糖含量均低于对照。所有酒葡萄品种接种感病后的SOD活性均高于对照。接种感病后发病较重的拉别长依、赤霞珠的蛋白质含量高于对照。     

低温胁迫下棉花子叶蛋白质差异表达的双向电泳分析

采用TCA-丙酮沉淀法,改良优化了棉化蛋白质组研究中的双向电泳技术.通过对根和子叶全细胞蛋白的提取、蛋白的溶解、胶条的选择及电泳等环节的优化,得到了重复性很高、分辨率很好的蛋白质图谱.进一步对5 d苗龄的棉花进行4℃低温处理12 h后,提取子叶的蛋白质,利用双向电泳技术分离全细胞蛋白.并用PDQuest软件分析比较棉花子叶在低温处理下的蛋白表达谱,得到了49个有显著差异的蛋白点.其中,低温处理上调表达的蛋白点有27个,减弱表达的蛋白点有22个,推测这些差异蛋白点可能与低温胁迫相关.     

A combination of leaf rust resistance gene Lr34 and lesion mimic gene lm significantly enhances adult plant resistance to Puccinia triticina in wheat

Leaf rust caused by Puccinia triticina is an economically-important disease in wheat worldwide.A combination of different types of resistance genes may significantly enhance rust resistance under rust-favorable conditions.To investigate the interactions between the rust resistance gene Lr34 and the lesion mimic gene lm on 1BL in Ning 7840,a segregating F8-10 population of 180 recombinant inbred lines was developed from Ning 7840/Chokwang and evaluated for both lesion mimic expression and leaf rust response at the adult plant stage in a greenhouse.A major quantitative trait locus(QTL),derived from Sumai 3,was co-localized with Lr34 on chromosome 7D and explained 41.5% of phenotypic variations for rust severity and 22.1% for leaf tip necrosis(LTN).The presence of Lr34 was confirmed by Lr34-specific markers cssfr1 and cssfr2 in Ning 7840 and Sumai 3.Unlike Lr34,lm conditioned a spontaneous lesion mimic phenotype and had a significant effect on reducing uredinial size,and a smaller effect on severity.Additive effects were observed between lm and Lr34 for severity and LTN,and an epistatic effect was observed for infection type.Single marker analysis also identified several other QTL with minor effects on severity,infection type,or LTN.     

悬浮培养型 BHK -21 细胞的生长规律和不同接种密度培养效果的研究

为探索悬浮培养型BHK-21细胞的生长规律和最佳接种密度,以3．0×10^5个／mL、4．0×10^5个／mL、5．0×10^5个／mL、6．0×10^5个/mL和7．0×10^5个／mL等5个接种密度培养了悬浮培养型BHK-21细胞,绘制了细胞生长曲线和活力变化曲线．结果显示,悬浮培养型BHK-21细胞生长曲线呈“S”型,接种培养前24h细胞处于适应期,生长曲线上密度增长不大,期后细胞进入对数增长期,生长密度呈指数增长．以3．0×10^5个／mL和4．0×10^5个／mL接种培养的在120h达到最大增殖密度,分别为4．65×100个／mL和5．59×10^6个／mL,倍增时间分别为26．9h和26．7h;以5．0×10^6个／mL、6．0×10^6个/mL和7．0×10^6个／mL接种培养的在96h就达到最大增殖密度,分别为5．14×10^6个／mL、5．36×10^6个／mL和5．1×10^6个／mL,倍增时间分别为22．4h、24．1h和25．2h．各组在培养的96h以前细胞活力均在90％以上且变化较小,120h和144h时细胞活力开始下降,且接种密度越高活力下降越快．该细胞以4．0×10^5个／mL、5．0×10^5个／mL、6．0×10^5个／mL接种培养能达到较高培养密度,细胞生长快,且细胞峰值持续时间长．     

冀东地区小麦种子内寄生真菌的种类及致病性的研究

分离冀东地区小麦 3 0个品种 (系 ) 4 5 0 0粒种子 ,得到种子内寄生真菌 4 0 0个菌株。除 4 2 5 %的菌落在供试条件下未产孢外 ,其余分属于 6个属 10个种。其中链格孢菌出现频率最高 ,仅细链格孢即占 4 5 .0 % ,其次为离蠕孢菌 ,仅麦根腐离蠕孢即占 13 .5 %。致病性测定结果表明 :小麦链格孢菌、细链格孢菌、麦根腐离蠕孢菌、禾谷镰刀菌、小麦德氏霉菌、勒韦茎点霉菌等 6种真菌对小麦的种子、幼苗和幼根都有一定的致病性     

杨树接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea 后蛋白质表达差异分析

应用双向凝胶电泳技术,分析了抗病毛白杨和感病北京杨接种溃疡病菌Botryosphaeria dothidea前后的蛋白质表达差异。通过比较两个树种接菌前后的双向凝胶电泳图谱,结果得到在两树种之间共有35个3倍蛋白质差异点,其中接种前毛白杨与北京杨相比上调蛋白4个,下调15个;接种后相比则上调蛋白7个,下调9个。同一树种内,毛白杨接种后与对照相比检测到8个上调蛋白,6个下调蛋白;北京杨接种后与对照相比有8个上调蛋白、10个下调蛋白。对这些差异蛋白产生条件及含量进行分析,笔者认为接菌前抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树抗溃疡病的组成型抗病机制有关,接菌后抗病毛白杨与感病北京杨相比上调蛋白可能与杨树对溃疡病的诱导型抗病机制密切相关。最后利用质谱技术鉴定出其中的4个差异蛋白分别是核酮糖二磷酸羧化酶小链、预测蛋白、过氧化物歧化酶、异戊烯二磷酸-异构酶,这些差异蛋白可能与杨树对溃疡病的抗性有一定关系。     

枯草芽孢杆菌B29菌株对黄瓜植株的诱导抗性

对枯草芽孢杆菌B29菌株诱导黄瓜根系相关防御反应酶活性的变化趋势进行了研究,结果表明该菌株接种能够诱导黄瓜根系苯丙氨酸解胺酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）和过氧化物酶（POD）活性有不同程度的提高,尤其在挑战接种病原菌后,3种防御反应酶活性上升的幅度比单独接种要高,说明挑战接种有利于诱导抗性的表达。结合枯草芽孢杆菌B29菌株对黄瓜枯萎病的田间防效试验,可以说明诱导抗性是其生防作用机制之一。     

龟裂链霉菌发酵液活性组分对番茄及番茄灰霉病菌的影响

通过电镜观察,单独接种的番茄植株细胞内发现灰霉病菌菌丝,而对照及用SN06处理的番茄植株细胞内未发现灰霉病菌菌丝．单独用SN06处理的番茄植株结构与对照植株没有差别,叶绿体、线粒体均保持完整结构．接种前用SN06处理番茄植株与接种后用SN06处理番茄植株相比,番茄植株受灰霉病菌的破坏作用不同,接种前处理效果更好．     

过氧化物酶活性与烟草脉坏死病抗性的关系

测定了接种马铃薯Y病毒脉坏死株系后转PVY－N1b基因的抗性烟草NC89和非转基因敏感烟草NC89的叶片组织透性和过氧化物酶活性,并对过氧化物酶同工酶进行了电泳分析,结果表明：抗、敏烟草叶片的组织透性与叶片内过氧化物酶活性的变化趋势一致,两者在接种后均呈增高趋势,且敏感烟草的增高幅度明显高于抗性烟草;接种后,两者的过氧化物酶同工酶均出现了一条新酶谱,抗性烟草植物的新酶带在接种后第2天开始出现,而敏感烟草的新酶带则在接种后第6天开始出现,且活性明显强于抗性烟草。     

Molecular cytogenetic analysis of Triticum aestivum-Leymus racemosus reciprocal chromosomal translocation T7DS·5LrL/T5LrS·7DL

In order to induce chromosome translocation between wheat chromosomes and chromosome 5Lr of Leymus racemosus, the mi- crosporocytes during meiosis of T. aestivum-L. racemosus disomic addition line DA5Lr were irradiated by 60Co γ-rays 800 R (100 R/min). Before flowering, the treated spikes were emasculated and bagged. After 2-3 d, the emasculated flowerets were pollinated using pollens from T. aestivum cv. Chinese Spring. One plant with two translocation chromosomes involved in both the long and short arm of...     

单殖吸虫中国一新记录属（锚首虫科）

记述了锚首虫科Ancyrocephalidae 单殖吸虫中国1外来属,1外来种,即寄生在神仙鱼Pterophyllum scalare 鳃上的伞片虫属Sciadicleithrum Kritsky, Thatcher Boeger,1989 ,强壮伞片虫Sciadicleithrum iphthimum Kritsky,Thatcher Boeger,1989;对外来种进行形态描述并给出特征图.     

光轴肿足蕨配子体发育及其系统学意义

采用改良Knop′s液体培养基对光轴肿足蕨(Hypodematium hirsutum(D.Don)Ching)的孢子进行培养,观察其孢子萌发和配子体发育过程。结果表明,成熟的孢子深褐色,不透明,两面体型,单裂缝,极面观椭圆形,赤道面观为豆形,周壁褶皱。接种18天后孢子开始萌发,孢子萌发为书带蕨型,播种25天左右发育为3～5个细胞的丝状体,35天左右发育为片状体,50天左右形成幼原叶体,原叶体发育为三叉蕨型。幼原叶体不对称,成熟的原叶体呈对称心形。原叶体边缘及背腹面都具单细胞乳头状的毛状体。播种65天左右开始出现性器官,精子器近圆球形,由3层细胞构成,成熟颈卵器颈部由4～5层细胞构成。光轴肿足蕨的配子体发育特征表现出较为进化的特点。