单克隆抗体亲和渗滤法制备两种生殖激素

在本室已获得高特异抗牛促卵泡激素（bFSH）和抗牛促黄体激素（bLH）杂交瘤细胞的基础上，制备纯化抗bFSH和抗bLH两种单克隆抗体（McAbs），并进而建立了一种单抗免疫亲和渗滤新技术。使用该技术成功地制备了上述两种牛生殖激素，从7g牛垂体干粉可提取3．3mg亲和纯bFSH和11．1mg亲和纯bLH。回收率分别为85％和82％。     

抗猪促卵泡激素小鼠源单克隆抗体的研究

用猪促卵泡激素(PESH)作为抗原免疫BALB/C小鼠。通过将免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠骨髓瘤细胞(SP2/O—Ag14)进行融合,建立了九株能稳定分泌抗PFSH单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中三株杂交瘤细胞分泌的抗体被证实是对PFSH特异结合的,它们和另一种非常相近的垂体激素——猪促黄体激素(PLH)不结合。用有限稀释法对全部九株杂交瘤进行了三次亚克隆。有几种单克隆抗体被羟基磷灰石柱层析一步法从小鼠腹水所纯化。以聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测经纯化单克隆抗体制品的纯度。     

虎纹蛙促性腺激素及其释放激素含量的日变化

利用具有高度特异性的放射免疫测定法,研究了10月份虎纹蛙成蛙脑和脑垂体GnRH、以及脑垂体和血浆GtH含量的日变化,结果表明：雌蛙脑和脑垂体mGnRH含量、以及脑垂体cGnRH-Ⅱ含量都存在有明显的日变化;雄蛙脑垂体和血浆LH水平,以及雌、雄蛙血浆FSH水平也都存在明显的日变化;对各种激素日变化产生的原因进行了探讨.     

抗促黄体激素单克隆抗体的研制 Ⅰ杂交瘤细胞株的建立

用促黄体激素(LH)为抗原免疫BALB/C小鼠,通过免疫小鼠脾细胞和SP_2/0小鼠骨髓瘤细胞的融合,产生分泌抗LH单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞。用ELISA法检测融合细胞培养上清,从195份检样中测出两份能与LH抗原起反应。对该2孔杂交瘤细胞进行亚克隆和扩大培养。经体外四个月传代培养及液氮冻存后复苏培养。仍保持分泌抗LH的McAbs的能力,所建立的二株杂交瘤细胞命名为AL—01和AL—02。给予注液体石蜡的BALB/C小鼠注入该二种细胞,均能诱生腹水。用ELISA法测腹水抗体,效价分别为10~(-6)以上和10~(-5)以上。通过染色体组型分析,确认AL—01和AL—02皆为杂交瘤细胞。     

单克隆抗体亲和层析最适洗脱液筛选研究

本文介绍一种筛选单克隆抗体(McAb)亲和层析最适洗脱液的方法,一种经过改进的双抗体夹心酶联免疫吸附检测法(DAS—ELISA),其中以联有一种McAb的经CNBr活化的Sepharose凝胶为固相,另一种McAb标上辣根过氧化物酶作为标记抗体。我们在以单抗亲和层析纯化促卵泡激素(FSH)的工作中使用该方法进行了最适洗脱液的筛选,取得了很好的结果。该方法简便、快速、可靠。     

单抗亲和纯促卵泡激素（FSH）的制备及其特性研究

采用细胞杂交技术生产出抗猪促卵泡激素(pFSH)的单克隆抗体,以其中的AF05单克隆抗体(亲和力常数K=(1.14±0.28)×10~(-9)M)制作成单抗免疫亲和层析柱。以简便快速的一步纯化法从猪垂体浸出液中提取出高纯度pFSH。经小鼠卵巢增重法测定,该pFSH的生物学活性在30Armour单位/mg蛋白以上;聚丙烯酰胺凝胶电泳(pAGE)结果显示,该pF-SH的纯度超过美国Schering公司的pFSH产品。     

孕马血清促性腺激素单克隆抗体脾内免疫方法的建立

孕马血清促性腺激素单克隆抗体脾内免疫方法的建立马友福，马春艳，候向东，陈萸芳天津实验动物中心（天津东郊区军粮城３００３０１）自７０年代开始，由于细胞融合技术迅速发展，杂交瘤技术的成功得以制备各种抗体，这种单克隆抗体（简称单抗）的发现是生物技术发展的里...     

新西兰大耳白兔超排前后生殖内分泌激素变化的研究

使用HMG(尿促性腺激素)+hcG(绒毛膜促性腺激素)对30只新西兰母兔进行超排(超数排卵)处理,于超排前后不同时期采集血清标本,测定FSH(卵泡刺激素),LH(黄体生成素),P(孕激素),E2(雌激素)的浓度.结果显示:FSH水平在超排后96h达高峰水平1 83±1 32ng/mL,是超排前的6倍.LH水平在超排后15h达0 19±0 09ng/mL高峰.P浓度在受孕后逐步升高,在超排后96h,P水平达35 07±16 71ng/mL,是超排前的10倍.E2水平超排后也有升高.结果表明家兔超排后生殖内分泌激素有显著性变化,而受孕后可出现高浓度的孕酮.同时也为通过测定激素水平提供了排卵和受孕的早期诊断依据.     

GnRH对虎纹蛙LH和FSH分泌活动的调节作用

通过在体和离体实验,研究了ｍＧｎＲＨ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ对生殖前期虎纹蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的合成与分泌的影响．结果表明：在体条件下,ｍＧｎＲＨ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ都能极显著刺激♀蛙和♂蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的释放,也能显著升高♀蛙垂体ＬＨ的含量,但对♂蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的含量无明显影响;ｃＧｎＲＨ－Ⅱ能极显著升高♀蛙垂体ＦＳＨ的含量．在刺激♀蛙垂体ＬＨ的合成、释放以及♂蛙垂体ＦＳＨ的释放方面,ｍＧｎＲＨ的作用显著强于ｃＧｎＲＨ－Ⅱ．离体实验中,０．１ｎｇ／ｍＬ的ｍＧｎＲＨ和１ｎｇ／ｍＬ的ｃＧｎＲＨ－Ⅱ都能极显著刺激离体♀蛙垂体碎片ＬＨ的释放．     

可高亲和结合两种不同抗原的抗体

抗体和抗原的相互作用面常常被描述成锁和钥匙的关系,说明一个抗体只能适合一种抗原。美国加州基因技术公司Germaine Fuh和同事分离出一种治疗用单克隆抗体Herceptin的异构体,其结合位点可以同时结合人表皮生长因子受体2（HER2）和血管内皮生长因子（VEGF）     

抗人FXYD3单克隆抗体的制备与初步鉴定

【摘要】目的 制备抗人FXYD3单克隆抗体（McAb）并鉴定其生物学特性。方法 以固相合成法获得的FXYD3合成多肽与载体蛋白KLH偶联后免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人FXYD3 McAb。用ELISA 、Western Blot、免疫组化技术对抗人FXYD3 McAb的亚型、效价、亲和力及特异性进行鉴定。结果 筛选出两段较好的优势抗原表位,分别为NDLEDKNSPFY和KFGQKSGHHPGETPPLITPGSA获得四株可稳定分泌抗人FXYD3 McAb的杂交瘤细胞株02A12C4、02F1E8、02E6B10与03A10E11,亚型鉴定重链均为IgG1,轻链为kappa链。间接ELISA法测定效价均在为1∶104以上。其中02F1E8效价为1∶105以上,亲和常数为3.11?08 L / mol。免疫组化分析显示了FXYD3均匀分布于肝癌细胞与人胰腺癌Bxpc-3细胞系细胞的胞膜上。结论 成功制备了四株抗人FXYD3 McAb,其中02F1E8纯度好、效价高及特异性强。为进一步研究FXYD3在肿瘤组织及细胞系中的表达及临床意义奠定了基础。     

恒河猴犬瘟热病毒基因疫苗制备单克隆抗体的研究

从感染犬瘟热病毒死亡的恒河猴肝脏组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增H全基因并克隆到真核表达质粒pVAX中,构建了基因疫苗pVAX-H。用制备的基因疫苗免疫BaLb/c小鼠,小鼠可以产生免疫应答,免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,经间接ELISA法筛选,获得5株稳定分泌抗CDV H蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该5株单抗对应不同的病毒抗原表位,且均不与CPV和MV发生反应, McAb诱生的腹水可体外中和犬瘟热病毒,其中2株中和效价大于1:256。结果表明,CDV H基因疫苗可制备具有一定中和效价的抗CDV的单克隆抗体。     

抗Y-box结合蛋白冷休克域单克隆抗体的制备及其初步应用

固相法合成Y -box结合蛋白冷休克域部分片段“14肽”(H2 N NGYGFINRNDTKED COOH ,简称ND) ,用不同载体蛋白经戊二醛一步法偶联得到免疫抗原 (BSA ND)和检测抗原 (OVA ND) .用免疫抗原免疫BLAB c小鼠 ,经间接法ELISA检测 ,得到对ND有足够免疫应答的小鼠 .采用常规单克隆抗体制备的方法 ,得到 3株能稳定产生和分泌抗ND单抗的克隆细胞株 ,单抗的亚型均为IgM .WesternBlotting结果显示 :该单抗能识别中华大蟾蜍 (Bufobufogar garizans)Ⅰ、Ⅱ期卵母细胞中的热稳定Y box结合蛋白p5 4 ,并能识别中华大蟾蜍高、低温卵中一种分子量约为 80kD的蛋白 (简称p80 ) .由于p80在低温卵中含量高于高温卵中 ,推测可能是高温卵和低温卵中差异表达的Y box结合蛋白之一 .     

硝基苯胺单克隆抗体的制备和效果评价

为了测定水中硝基苯胺类化合物,进而开发酶联免疫分析法(EL ISA)快速检测方法,制备了抗硝基苯胺单克隆抗体。以合成的硝基苯胺完全抗原,作为免疫原免疫B a lb/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、筛选和克隆等,得到了抗硝基苯胺单克隆抗体。该抗体亚类为IgG1,制备的单克隆抗体腹水效果评价达10-7,与其他硝基苯胺结构类似物无交叉反应。实验结果表明,用本间接竞争EL ISA方法可以精确地检测不同水样中硝基苯胺残留。     

人GrnE单克隆抗体的制备和鉴定

为了制备获得针对人Grn E单克隆抗体,将原核表达GST-Grn E蛋白作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经过融合及初步筛选,获得5株针对Grn E的单克隆细胞株.选取其中3株(1D5、2E1和3F7)制备腹水,并通过western blot和免疫荧光染色对该3株单克隆抗体进行鉴定.在此基础上,进一步对1D5和3F7两株单克隆抗体是否可以用于免疫沉淀实验进行了检测.上述实验表明,本研究成功制备了针对Grn E结构域的单克隆抗体,而且所制备的单克隆抗体具有良好的特异性.     

制备和鉴定肝细胞胆管侧膜极性分布的单克隆抗体

为制备肝细胞胆管膜侧的呈极性分布单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,利用密度梯度离心法提取大鼠肝细胞胆管侧膜小体,测定特异酶活性。分离成功的肝细胞胆管侧膜小体免疫BALB/c小鼠,利用标准的杂交瘤技术制备单克隆抗体。利用ELISA法检测抗体分泌的效价。采用免疫组织化学方法观察其组织定位。Western blot对其识别的抗原进行分析。结果成功地获得1株特异性分布于肝细胞胆管膜侧的mAb1。免疫组织化学显示其分布在肝细胞胆管侧膜,在肾脏组织中也呈极性分布。Western blot结果显示mAb1分子量为110 kDa左右。说明成功地获得了肝细胞胆管膜侧特异性mAb1,并鉴定其作为极性分子分布于肝细胞胆管膜侧,它可能参与胆汁的分泌和代谢。     

烟草花叶病毒单克隆抗体的制备和鉴定

经工程菌表达与纯化,得到了纯度95%以上的TMV-CP-F重组蛋白,配合提取的TMV天然病毒颗粒作为免疫原.通过杂交瘤技术获得了14株能分泌特异针对TMV外壳蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株.经鉴定14株细胞所分泌的抗体亚类为IgG1型,抗体轻链均为κ型.经ProteinA一步法亲和层析纯化所得抗体经鉴定相对分子质量在149.36～157.23 ku之间,抗体纯度在80%以上.经间接ELISA测定,14株抗体均与TMV-CP重组蛋白和TMV病毒有良好特异性反应.所制备的抗TMV抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.     

抗土霉素单克隆抗体的制备及其在虾中土霉素残留的检测应用

研究目的：抗土霉素单克隆抗体的制备和特性分析,并用于间接竞争酶联免疫吸附测定法（icELISA）分析虾样品中土霉素的残留。创新要点：本研究建立分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,筛选出对虾中土霉素残留检测具有较高灵敏度的单克隆抗体2．4F。研究方法：重要结论：用细胞杂交技术使土霉素．牛血清白蛋白偶联物免疫的BALC／c雌性小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立三株分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株（2—4F、7-3G和11-11A）,并制备它们的单克隆抗体。通过ieELISA法分析单克隆抗体对土霉素的半抑制质量浓度（IC-50）和交叉反应率,明确其灵敏度和特异性。实验结果发现单克隆抗体2—4F具有最高的灵敏度,对土霉素的IC50为7．01ng／ml,且该单抗特异性强,仅与罗利环素之间有强烈的交叉反应,而与非相关抗生素不发生交叉反应。当利用单克隆抗体2-4F检测虾样品中的土霉素含量时,其批内和批间回收率分别为82％～118％和96％～113％,变异系数分别为3．9％～13．9％和5．5％～14．9％。因此,单克隆抗体2．4F可用于虾产品中土霉素残留分析试剂盒的开发。     

磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体的制备和鉴定

 为建立磺胺类药物残留的免疫化学分析方法,利用磺胺甲基嘧啶(SM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)分子结构中的芳香氨基,采用重氮反应和戊二醛法将其与载体蛋白(牛血清白蛋白和鸡卵清蛋白)交联制备抗原,最终获得5株抗SM和18株抗SM2杂交瘤细胞株.对杂交瘤细胞株的核型、抗体的亚类和轻链型、抗体的异相包被ELISA反应性以及抗体的竞争反应性和交叉反应性进行了分析和评价.其中SM抗体11C8结合SM的竞争抑制质量浓度IC50为14.1μg/L,与类似物SD的交叉反应性接近20%,但与其他类似物低于10%.SM2抗体中的6株抗体的竞争抑制质量浓度IC50在38.8~70.0μg/L范围内,2B7,4D5,13C9,14C5和16C2抗体与类似物SM的交叉反应性达到73.5%~132.9%,而15D10抗体与SM的交叉反应性低于5%.因此,本研究所获得的磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶抗体,可用于SM和SM2残留的免疫分析方法研究和应用.