利用RAPD方法鉴定西瓜杂种纯度的研究

以不同西瓜杂交种及亲本自交系为材料，研究利用RAPD技术鉴定西瓜杂种的纯度及种质。结果表明：在反应条件适合、引物选择正确的情况下，RAPD技术完全适合于西瓜杂交种纯度的早期鉴定及种质鉴定。同时发现，引物OPD16及OPA07适合种内鉴定，而引物OPA10、OPA13、OPH18可用于杂种纯度鉴定。同时，对利用同工酶技术和RAPD技术在进行西瓜杂交种鉴定过程中的优缺点进行了分析与讨论。     

应用RAPD和AFLP标记的方法对甜(辣)椒和番茄品种的多态性分析

应用RAPD和AFLP的DNA指纹图谱方法分析25个甜(辣)椒和22个番茄品种的真实性,并进一步比较RAPD和AFLP的DNA指纹图谱在鉴定亲缘关系较近的品种之间的真实性时的有效性。对于甜(辣)椒品种,AFLP方法中,2个引物组合扩增反应的多态性片段即能将25个品种完全分开。虽然,每个样品的AFLP的扩增产物中多态性片段的百分率为9％,低于RAPD的35％多态性片段的百分率。但是,AFLP的信息量远远大于RAPD的信息量,它的每对引物组合扩增的平均多态标记为5．1,而RAPD仅为2．2。所以,在甜(辣)椒的指纹图谱中,AFLP的有效率是RAPD的2倍。对于番茄品种,每个样品的AFLP的扩增产物中多态性片段的百分率为5．5％,大大低于RAPD的单引物61％多态性片段和双引物58％多态性片段的百分率。它的每对引物组合扩增反应的平均多态标记为2．6,而RAPD中,单引物扩增的平均多态标记为4．2,双引物扩增的平均多态标记为4．4。一个单引物和一个双引物的RAPD扩增反应的多态性片段即能将22个番茄品种中的21个完全分开。所以,在番茄的指纹图谱中,RAPD的有效率是AFLP的2倍。因此,在应用分子标记辅助鉴定品种的真实性时,不同的作物所适用的方法是不同的。     

ISSR和RAPD-PCR技术对东北地区主推玉米品种的鉴别

运用现代分子生物学简单重复区间序列扩增多态性（ISSR）和随机扩增片段多态性DNA（RAPD）两种分子标记技术, 对吉林省主推6个玉米杂交种及其父本、 母本共计18份基因图谱进行鉴别. 以ISSR为主要检测方法、 RAPD为验证方法,分别从30条ISSR引物中选出4条、 从30条RAPD引物中筛选出2条扩增效果明显、 特异性高的引物. 结果表明, 运用ISSR和RAPD-PCR技术提高了玉米品种鉴定和纯度鉴定的准确性.     

福建6种柚RAPD鉴定分析

以福建省栽培面积较广,果实成熟期不同的渡尾文旦柚、琯溪蜜柚、坪山柚、长泰文旦柚、龙柚、下河蜜柚6种柚为研究对象,用100个10bp的随机引物对6种柚的基因组DNA进行RAPD分析,筛选出能扩增出稳定多态性片段的引物31个,一共扩增出174条片段,其中多态性片段有137个,占78.74%.聚类分析的结果,RAPD标记所反映的6个品种之间的遗传相互关系与传统的分类结果是一致的.     

果梅RAPD标记不同电泳指纹比较及

利用11个碱基引物, 在对退火温度等反应条件进行严格优化的基础上,以不同品种果梅为材料,同时利用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测了RAPD扩增产物。结果表明：PAGE电泳检测出的谱带总数量以及多态性谱带的数量分别为204和145, 以琼脂糖凝胶检测的为91和58。根据PAGE电泳系统获得的标记信息对16个果梅品种进行聚类分析,表明所有品种都能被很好地区分,并在一定程度上反映了果梅品种的亲缘关系。通过对20个随机挑选的扩增片段进行克隆与测序发现,20个片段都是对应引物的RAPD扩增产物,在不同的16个序列中有4条是编码蛋白的基因片段,说明了RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,同时可以扩增编码蛋白的基因片段,是对基因组不同区域的随时机扩增,所以能够客观地反映不同果梅品种间的遗传差异。     

番茄耐冷性RAPD分子标记的筛选及特异片段的克隆

以番茄耐冷性近等基因系为试材,从耐冷及冷敏感植株中提取DNA构建耐冷DNA池及冷敏感DNA池,采用RAPD技术,从280个随机引物中筛选出一个在两池间具有多态性的引物OPF14,用轮回亲本及回交后代的单株DNA进行验证,证明了该引物扩增出的特异性片段是一个与番茄耐冷性相连锁的RAPD标记.从琼脂糖凝胶回收OPF14扩增出的多态性条带与载体pGEMR-T-Easy连接,并转入大肠杆菌DH5-a,对克隆片段测序表明实际大小为792bp,这为转化成稳定的SCAR标记奠定了基础.     

花椰菜自交不亲和性的分子标记研究

运用随机扩增多态性DNA(RAPD)和inter-简单重复序列(ISSR)等分子标记技术,分别对5组花椰菜自交不亲和系和对应的自交亲和系的基因组进行指纹差异分析.采用10个10 mer随机引物和5个ISSR引物进行PCR扩增,结果表明,扩增片段分子量在0.3～5 kb之间,指纹图谱的稳定性和重复性较好.经过3次以上重复发现,ISSR4引物扩增图谱中,自交亲和系比不亲和系多扩增出3 800 bp片段;ISSR6引物扩增图谱中,除第3组外,不亲和系比亲和系多扩增出1 100 bp片段.结果表明,花椰菜自交不亲和系与自交系基因组DNA之间存在差异,扩增出的差异片段与花椰菜自交不亲和性相关,并可作为自交不亲和系和自交亲和系育种筛选的分子标记.初步探讨了花椰菜自交不亲和性的遗传机制及RAPD和ISSR技术在自交不亲和系选育过程中的应用前景.     

果蝇突变体的RAPD分析

采用RAPD技术对遗传学模式生物——果蝇的野生型及7种突变体的遗传差异进行比较研究．结果表明,所选用的37种RAPD引物中,有25种引物扩增谱带清晰,扩增总片断284条,单个引物的扩增片段数为6～15条,平均为11．36条．不同果蝇品种间的遗传差异较小,遗传距离（D）为0．0334～0．2089．根据D值,由UPGMA聚类分析绘制了它们的分子进化树。     

山羊与岩羊间特异RAPD片段分析

在两组40个随机引物中，筛选出16个重复性好的多态引物，对山羊与岩羊闻RAPD片段分析表明，16个引物扩增出67条带，其中54条带表现多态，多态率80．60％，山羊各群体共有条带为23条，山羊和岩羊共有条带为13条，岩羊有4条特异带，不同引物所扩增出的片段在各群体中分布频率不同．岩羊特异RAPD片段，OPA-10724的序列与人类全基因组比较，同源的短序列较多，最太长度为86bp，唯有30bp的长度与绵羊ZFZ基因和牛ZFY基因内含子同源。     

水稻光温敏雄性不育基因连锁标记的分离与鉴定

两系法杂交稻是一种利用水稻杂种优势的重要途径，主要依据水稻光温敏雄性不育系在不同条件下的育性转换用于配制杂交种．以培矮64S(PTGMS)与明恢63杂种自交的F2代为供试材料，采用随机放大多态性DNA(RAPD)技术分离与培矮64S的PTGMS基因连锁的分子标记．在F2代2个分别代表可育和不育的群体以及亲本株系中，采用100个RAPD引物扩放基因组DNA筛选多态性DNA片段．RAPD引物S8产生的DNA片段中，除重复顺序外，有一个长度为0．85kb片段为单拷贝．分子杂交表明，这一单拷贝标记与培矮64S的PTGMS基因连锁．