女性系统性红斑狼疮患者外周血Tim-1表达水平及其与疾病活动的相关性

目的:检测T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1在女性系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血的表达情况,并探讨与SLE疾病活动的相关性.方法:采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测SLE治疗前后和健康对照组外周血中T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1的表达量,SLE活动性以系统性红斑狼疮病变活动指数(SLEDAI)表示,并进行相关性分析以明确T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1与系统性红斑狼疮患者疾病活动性的关系.结果:治疗前SLE患者外周血中T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1的表达水平明显高于对照组和治疗后SLE患者外周血中的表达水平,有统计学差异(P0.05),且其表达水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.639,P0.01).结论:T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-1的表达水平与SLE的发病有关,且可反映SLE患者的疾病活动状态.     

SLE患者外周血γδT细胞系的建立及表型和功能的研究

目的:建立体外扩增系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血γδT细胞的方法,并初步分析其表型和功能,探索γδT细胞在SLE发病中的作用。方法:采用单克隆抗体固相法,对15例SLE患者和8例正常人外周血γδT细胞进行体外扩增建系,以流式细胞仪检测γδT细胞表型,并用MTT法观察γδT细胞对Daud i细胞的细胞毒作用。结果:建立了SLE患者外周血γδT细胞系,其平均纯度为(58.1±11.2)%,较正常对照组(80.3±9.2)%偏低(P<0.05);其细胞表型为:Vδ1(34.4±24.5)%、Vδ2(61.9±28.6)%、Vδ3(16.1±10.6)%、Vγ9(76.4±11.8)%,其中Vδ2表达较对照组降低,而Vδ1和Vδ3表达增加(P均<0.05);其细胞毒作用在二组间无明显差别。结论:SLE患者外周血γδT细胞的Vδ、Vγ基因的取用表达存在差异,提示其在SLE的发病中可能起一定作用。     

基于矩阵分解技术的系统性红斑狼疮转录调控网络构建

利用双向聚类方法提高系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)基因表达数据特征基因提取的有效性;预测SLE患病过程中转录因子活性以及对靶基因的调控强度变化,构建和挖掘与SLE发病密切相关的转录调控网络及其生物过程.利用FastICA方法进行双向聚类筛选出800个SLE显著基因,结合转录调控信息选取其中表达显著的转录因子及其靶基因,利用NCA预测SLE发病过程中转录因子活性以及对靶基因调控强度的变化,并构建调控网络.构建了由9个转录因子和47个靶基因所组成的调控网络,结合分子生物学分析发现,转录因子在正常样本和患病样本中的活性有明显的变化趋势,其调控的靶基因的变化符合SLE的病理特征.利用矩阵分解技术进行SLE特征基因提取及转录调控网络构建能够发现多个与炎症反应及免疫系统等密切相关的生物过程,对研究SLE致病机理和相应的生物学实验提供了方法和依据.     

长链非编码RNAs的作用机制及在肿瘤中的作用

长链非编码RNAs(lncRNAs)是一种转录产物,其碱基长度超过200nt,其可直接调节转录因子活性或者转变染色质结构参与到转录调控中,也可以通过对mRNA形成过程及其翻译进行调节参与到转录后调控中。根据大多数学者研究表明,肿瘤发生以及发展和lncRNAs表达水平异常紧密相关,有的可能对于癌变的发展会有促进作用,肿瘤患者体内表达较高;有的会对癌变具有抑制作用,肿瘤患者体内表达相对较低。该文主要介绍了IncRNAs作用机制,同时分析了其在肿瘤中的作用。     

Sonic hedgehog调控T细胞分化和功能的研究

T细胞是体内重要的免疫细胞,T细胞介导的细胞免疫应答参与了肿瘤、自身免疫性疾病等疾病的病理生理过程.研究T细胞分化和功能调控机制将有助于阐明相关疾病的发病机制,并为疾病防治提供思路.近来有国外研究显示,早期胚胎发育过程中的关键成形素(mophorgen)--Sonic hedgehog(SHH)不仅调控T细胞发育的各个...     

白介素-38在活动期系统性红斑狼疮患者中的表达及与IKKβ激酶的关系

目的:研究活动期系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中白介素-38(IL-38)和IKKβ激酶的表达水平,以探讨IL-38与IKKβ的关系.方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-38、IKK基因表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-38、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达水平;采用t检验或Mann-Whitney秩和检验.结果:(1)活动期SLE患者IL-38 mRNA表达水平(0.36±0.09)显著低于正常对照组(1.00±0.17),差异有统计学意义(P0.01);活动期SLE患者IL-38蛋白表达水平(5.86±2.76)pg/mL显著低于正常对照组(18.48±1.35)pg/mL,差异有统计学意义(P0.05);(2)活动期SLE患者TNF-α表达水平(10.78±1.25)pg/mL显著高于正常对照组(4.34±0.69)pg/mL,差异有统计学意义(P0.05);(3)活动期SLE患者IKKβmRNA表达水平(6.01±1.51)显著高于正常对照组(1.16±0.14),差异有统计学意义(P0.05);(4)活动期SLE患者IL-38与TNF-α蛋白表达水平呈负相关,差异有统计学意义(P0.05);(5)活动期SLE患者IL-38与IKKβmRNA表达水平呈负相关,差异有统计学意义(P0.05).结论:活动期SLE患者IL-38基因及蛋白表达水平下降,并且与TNF-α和IKKβ水平呈负相关,推测在SLE患者体内IL-38水平下降,促进TNF-α和IKKβ的高表达,从而活化核因子-κB(NF-κB)信号通路,参与了SLE的发病.     

与阿尔茨海默病发病机制相关的microRNA的研究现状及进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)是一种复杂的慢性神经系统退行性疾病,病因和发病机制迄今尚未明确,可能与多种因素有关,如基因突变、氧化应激、线粒体功能障碍、胶质细胞活化、细胞凋亡等.MicroRNA(miRNA)是神经细胞分化、生长以及神经系统可塑性调节的关键因子,miRNA的异常表达与AD的发病机制密切相关.综述了近年来miRNA在调节β淀粉样前体蛋白(APP)表达、调节淀粉样前体蛋白β位分解酶1(BACE1)表达、调节微管相关蛋白Tau表达以及调节其他非特异性致病因子等与AD发病机制相关因素等方面的研究现状和进展,将为深入系统研究阿尔茨海默病的发病机制提供参考.     

烟曲霉COFILIN与人GOSR1蛋白相互作用并抑制HEK293T细胞的增殖

COFILIN是真核生物中肌动蛋白的解聚因子,使细胞骨架产生活力.烟曲霉(Aspergillus fumigatus)COFILIN蛋白是其侵入机体的主要致病力因子,也是其逃逸宿主免疫系统防御的重要手段.为了探索烟曲霉COFILIN在感染宿主细胞过程中的作用机制,首先利用酵母双杂交技术在人类巨噬细胞cDNA文库中筛选到了一个新的COFILIN相互作用蛋白GOSR1(Golgi SNAP receptor complex member 1),然后采用GST pulldown和Co-IP技术验证了这两个蛋白在体外和体内相互作用的特异性,并通过将构建的截短突变体转化宿主菌表达的形式确定了相互作用的区段.将烟曲霉COFILIN基因在HEK293T细胞中过表达,结果发现COFILIN对细胞内源性GOSR1在转录水平和蛋白水平的表达都有一定的抑制作用,同时抑制细胞增殖、促进凋亡,并引起G2/M期阻滞.     

细胞周期调控蛋白Cdkn2a对于CD8~+T细胞中IL-10表达调控机制的初步研究

IL-10是一种典型的抑制性炎症因子,在机体免疫反应中发挥着重要的作用,探明该因子的表达调控机制对于阐释免疫应答在炎症反应、肿瘤发生发展等过程中的作用机制均具有重要意义.在前期工作的基础上,利用IL-10转基因报告小鼠10BiT,对细胞周期调控蛋白Cdkn2a在IL-10分泌型CD8+T细胞中调控IL-10表达的机制进行了初步探讨.结果显示,Cdkn2a对于CD8+T细胞中IL-10的表达调控与细胞分裂无关,而是可能作用于IL-4信号通路的下游来发挥作用.该工作为深入探讨Cdkn2a对IL-10的表达调控机制奠定了初步的基础.     

补髓生血颗粒剂对慢性再生障碍性贫血患者影响的实验研究

应用单标及双标免疫组织化学技术和酶联免疫法,对慢再生障碍性贫血患者骨髓CD34细胞、Fas 细胞、CD34 mP53表达细胞及血清细胞子IL-2、IL-3进行观察,结果表明,补髓生血颗剂能提高细胞、CD34mP53表达细胞百分率(P＜0.05),降低Fas 细胞分率(P＜0.05),降低IL-2水平(P＜0.05).提示:1)补髓生血颗粒剂可能能通过提高抑制凋亡因mP53表达,降低促进凋亡Fas抗原表达抑制血干细胞的过度凋亡.2)补髓生血颗粒剂能够降低造血负调控因子水平,同时提高造血正调控因子水平,并可能通过造血因子调控凋亡相关基因的表达,从而抑制造血干细胞的过度凋亡.     

原癌基因K-Ras调控APPThr668位点磷酸化及APP的切割

在阿尔茨海默症(Alzheimer′s disease,AD)发病的早期,Ras蛋白所在的信号通路被激活,但具体作用机制还不清楚.探讨了K-Ras及其突变体K-RasG12V对淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的剪切的影响.Western blot结果显示,过量表达K-Ras能够激活细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase,ERK 1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路,并增加APP在Thr668的磷酸化;抑制JNK通路则阻断了K-Ras过表达所引起的APP Thr668磷酸化.此外,过表达K-Ras造成分泌到细胞外的sAPPα增加,而sAPPβ减少.通过生物素标记实验发现,过表达K-Ras使得APP在细胞膜上的定位增加,而细胞内APP总量没有改变.这些结果表明,过量表达K-Ras可以通过调控JNK的通路,增加APP在Thr668位点的磷酸化,造成APP在细胞膜上水平升高,导致APP向sAPPβ的切割减少,而向sAPPα的切割增加.提示K-Ras对APP切割的影响可能在AD的发病过程中起着一定的应激作用.     

丙酮酸激酶M2在骨肉瘤中的表达及其生物学功能

目的:研究丙酮酸激酶M2(PKM2)在骨肉瘤组织中的表达水平及其临床各指标的关联性,并初步探讨其中可能的分子机制.方法:通过免疫组化检测PKM2在骨肉瘤组织中的表达水平,SPSS统计软件分析其表达水平与患者临床特征及预后的关系;利用数据库分析骨肉瘤组织中PKM2 mRNA水平与患者生存预后的关系.再通过细胞增殖、克隆形成、Transwell迁移以及小鼠体内成瘤等实验方法观察抑制PKM2对骨肉瘤细胞的增殖、克隆形成、迁移及体内成瘤能力等生物学行为的影响.利用流式细胞术检测PKM2的表达水平与骨肉瘤细胞周期的关系.结果:在骨肉瘤组织中PKM2的蛋白表达水平与肿瘤直径、远处转移、临床分期、患者预后均有较强的相关性(P0.05),即高表达PKM2的肿瘤直径较大(χ~2=5.79,P=0.016)、容易发生远处转移(χ~2=7.30 P=0.007)、临床分期较高(χ~2=8.44,P=0.004),患者预后较差(P0.05).且数据库分析结果也显示,骨肉瘤组织中高表达PKM2 mRNA的患者预后较差(P0.05).在骨肉瘤细胞系中沉默PKM2或应用PKM2的抑制剂均可以显著抑制细胞的增殖、克隆形成及迁移能力(P0.05),以及抑制体内的肿瘤生长速度(P0.05);此外,抑制PKM2可以使CyclinD1表达水平下调进而使细胞周期阻滞.结论:PKM2与骨肉瘤的恶性进展密切相关,可作为骨肉瘤患者独立的预后因子;PKM2可通过调控细胞周期蛋白CyclinD1的表达促进骨肉瘤细胞的增殖.     

Bcl-6对滤泡辅助性T细胞的调控作用及机制进展

Bcl-6是滤泡辅助性T细胞(Tfh)的亚群决定转录因子，在Tfh细胞分化和功能调节过程中发挥关键作用.Bcl-6调控Tfh细胞的分子机制及其受到的精密分子调控受到广泛研究，近年来已取得了一定的进展.该文回顾了Bcl-6被鉴定为Tfh细胞亚群转录决定因子的研究历程，总结Bcl-6在Tfh细胞中的功能，综述Tfh细胞调控Bcl-6表达机制的研究进展，并对Bcl-6研究中的潜在问题和未来研究方向进行了展望.     

丙肝患者PBMC mIL-2R及T细胞亚群检测

为了探讨丙型病毒性肝炎( 丙肝)患者膜白介素- 2 受体( mIL- 2R) 和 T 细胞亚群的表达水平及其在丙肝发病机理中的作用,用生物素- 链霉亲和素法对 203 例抗- HCV 阳性患者外周血单个核细胞进行 T 细胞亚群及植物血凝素( PHA) 诱导前后mIL- 2R 的检测. 总体结果显示丙肝患者外周血单个核细胞( PBMC) mIL- 2R 和 T 细胞亚群表达水平降低,与正常对照组相比,差异显著( P < 0. 01) .其中, 在静息状态和在 PHA 诱导状态,其 mIL- 2R 表达水平与正常对照组相比均低下( P < 0. 01) , 但急慢性丙肝患者中T 细胞亚群及 mIL- 2R 表达水平类似( P > 0. 05) . 急慢性丙肝患者与正常对照组相比,外周血 CD⁺₃ , CD⁺₄ 百分率降低, CD⁺₈ 百分率增高, CD⁺₄ / CD⁺₈ 比值下降( 从 P < 0. 05 降至 P< 0. 01) .说明丙肝患者体内存在明显的细胞免疫功能紊乱, T细胞活化障碍, 并与肝病的慢性化有关.     

结核分枝杆菌ClpX与人UBC9蛋白的相互作用抑制宿主细胞增殖

ClpX是原核生物中高度保守的基因,其编码丝氨酸蛋白酶ClpXP的ATP结合亚基,具有底物识别及ATP水解活性.ClpX参与调控细胞周期与应激反应,且为多种病原微生物致病所必需,但目前相关研究仍非常有限.为了探索结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)ClpX在感染宿主细胞过程中的作用机制,本文首先通过酵母双杂交技术在人类淋巴细胞cDNA文库中筛选得到了一个新的与结核ClpX相互作用的蛋白UBC9,并利用GST pull-down和Co-IP技术证实了这两个蛋白在体外和体内相互作用的特异性.将ClpX转染HEK293T细胞过表达,RNA干扰与回复实验进一步证实了ClpX蛋白能够通过与UBC9的相互作用抑制宿主细胞的增殖.     

系统性红斑狼疮TH2型细胞因子受体基因的表达

目的 分析SLE患者外周血单一核细胞TH2型细胞因子mRNA的表达状况.方法 分离SLE外周血单一核细胞1×107/mL的浓度,进行总RNA提取,然后用1.5%的琼脂糖电泳,应用凝胶成像系统对电泳条带进行扫描.结果 SLE患者IL-4mRNA,IL-6mRNA和IL-10mRNA水平相比对照组显著升高.结论 TH2型细胞因子受体基因的表达在SLE发病机制中有明显的异常,其与相应蛋白表达的关系还有待进一步探讨.     

环状RNA在系统性红斑狼疮疾病中的筛选及表达

目的:探讨环状RNA(circRNA)在系统性红斑狼疮疾病(SLE)的表达及在SLE发病机制中的作用.方法:利用CIRCpedia数据库,筛选出候选的SLE相关环状RNA,应用荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析SLE患者和健康体检者血浆,筛选出目标环状RNA,再用RT-qPCR对目标环状RNA及其对应基因进行验证,最后对其进行生物信息学分析.结果:荧光定量PCR分析显示SLC15A4基因对应的环状RNA:HSA_CIRCpedia_7637在SLE患者组中明显降低,有统计学差异(P=0.048 1);并验证SLC15A4基因线性RNA(P=0.000 3)和环状RNA HSA_CIRCpedia_7637(P=0.006 9)在SLE患者中均比健康对照者明显降低,有统计学差异.生物信息学分析表明HSA_CIRCpedia_7637比较可能结合的miRNA有11种,包括hsa-miR-638等.结论:SLE患者的环状RNA HSA_CIRCpedia_7637表达下调;HSA_CIRCpedia_7637可能通过竞争性结合hsa-miR-638来参与SLE疾病发生.     

ITP中T细胞活化信号分子c-Cbl和Cbl-b的表达变化

目的:分析免疫性血小板减少症(ITP)中T细胞活化信号通路相关分子Cbl-b和c-Cbl基因的表达情况.方法:利用SYBR Green实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测18例ITP患者外周血单个核细胞(PBMC)中Cbl-b和c-Cbl基因的表达水平,20例健康成人作为对照.结果:ITP组Cbl-b的表达水平(中位数为0.091%)与健康成人组Cbl-b的表达水平(中位数为0.366%)相比,明显降低(P0.001);而c-Cbl基因在ITP组中的表达水平(中位数为0.372%)与健康成人组的表达水平(中位数为0.298%)相比没有统计学差异,但c-Cbl基因在ITP女性患者样本中的表达水平(中位数为0.236%)明显低于男性患者样本c-Cbl的表达水平(中位数为0.479%)(P=0.039).结论:ITP患者外周血中Cbl-b表达下调,可能是其T细胞免疫异常活化的原因之一.     

雌激素受体β调控髓鞘损伤后少突胶质细胞发育的作用机制

性别是影响少突胶质细胞(OLs)发育的因素之一,雌激素受体β(ERβ)可能参与了OLs的发育调控,但其作用机制尚未明确.为阐明ERβ如何调控OLs的发育,通过在原代培养的少突胶质细胞前体细胞(OPCs)中过表达相关基因,使用溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导OLs损伤以及荧光素酶报告基因等方法,考察了OPCs中ERβ如何调节细胞的分化以及ERβ受到哪些因素的调控.结果显示:过表达ERβ基因能够促进OPCs分化;LPC诱导损伤后,少突胶质细胞转录因子-2(Olig2)基因与ERβ的表达水平呈负相关,且过表达Olig2能够抑制OPCs中ERβ的表达水平;同时,LPC处理可诱导miRNA mmu-miR-219-2的表达,且mmu-miR-219-2能够直接与ERβ基因的3’-非翻译区结合并抑制其表达;而ERβ则通过与G蛋白偶联受体17(Gpr17)基因的启动子结合抑制Gpr17基因的表达,从而促进OPCs的成熟.综上,Olig2/mmu-miR-219-2/ERβ/Gpr17这一调控通路可能参与了OLs发育过程的调控,有望为临床上脱髓鞘疾病的治疗提供新的靶点.     

T检验识别阿尔茨海默病候选致病基因及基因生物分析

医学研究表明阿尔茨海默病(AD)的致病机制与基因有关,过高或过低的基因表达水平异常都会让人体失去平衡,产生病变.利用T检验法对基因芯片公共数据库GEO中的4种AD样本的基因芯片数据进行分析,提取出具有重要意义的显著差异表达基因,再通过这些差异基因的生物信息学分析其在AD发病机制中的作用,为AD致病机制的探询、预防、早期诊断与治疗等提供有益的途径和方法.通过该算法的筛选、结合AD发病机制的假说及基因生物学分析,最终识别出30个AD候选致病基因,其中有5个已经被确定为与AD有关,10个被AD致病基因筛选算法识别.