膀胱肿瘤患者免疫细胞及其细胞因子检测的研究

探讨膀胱肿瘤患者多种免疫细胞及其细胞因子与临床病理指标的相关性及意义。采用流式细胞数检测40例膀胱癌患者和15例正常健康体检者的外周血中T细胞及其亚群、B细胞及NK细胞的表达。用ELISA方法检测所有人的血清和尿中IL-10、IL-35、TGF-β1含量。结果显示:膀胱肿瘤患者外周血总T细胞、NK细胞及CD+4T、CD+4/CD+8比值均显著低于正常组(P0.05);膀胱肿瘤患者外周血CD+8T细胞和Treg细胞均显著高于正常组(P0.05);膀胱肿瘤患者血清和尿中IL-10、IL-35、TGF-β1含量极显著高于正常组(P0.01)。膀胱肿瘤患者抗肿瘤免疫综合功能下降,血清和尿中IL-10、IL-35、TGF-β1水平检测对膀胱肿瘤的诊断、分期、预后判定有重要意义。     

IL-21和IL-18对脐血来源的CIK细胞体外作用研究

探讨了IL-21和IL-18对脐血来源CIK细胞增殖和抗肿瘤活性的影响.用淋巴细胞液从新鲜脐血分离单个核细胞,在传统CIK细胞培养基础上采用添加重组人细胞因子IL-21和IL-18的方法体外培养CIK细胞.实验共设4组,A组为对照组:IL-2+anti-CD3mAb+IFN-γ;B组:IL-2+anti-CD3mAb+IFN-γ+IL-21;C组:IL-2+anti-CD3mAb+IFN-γ+IL-18;D组:IL-2+anti-CD3mAb+IFN-γ+IL-21+IL-18.在培养第3、6,9、12、14 d,应用血球计数仪进行细胞计数;在培养第14 d,应用流式细胞术检测各组脐血来源CIK细胞CD3CD56阳性表达;应用酶联免疫吸附试验检测培养上清IFN-γ的浓度;以白血病细胞系K562细胞为靶细胞,用MTT法检测各组CIK细胞对K562细胞的杀伤活性.细胞培养第6 d时,D组细胞数较A组细胞数多,差异有显著性(P<0.05),但其余各组间细胞数无明显差异(各P>0.05).其余各天计数时各组间细胞数无明显差异(各P>0.05).培养第14 d,CD3+CD56+细胞占细胞总数比例在B组、C组和D组均高于对照组(各P<0.01),且CD3+CD56+细胞占细胞总数比例在D组均高于B组和C组(P0.05).B组、C组和D组培养液上清IFN-γ的浓度均明显高于A组培养上清IFN-γ的浓度(各P<0.01),而且D组均高于B组和C组(各P<0.05),且B组高于C组(P<0.05).B组、C组和D组对K562细胞的杀伤活性均高于A组(各P<0.01),而且D组杀伤活性均高于B组和C组(各P<0.05),且B组高于C组(P<0.01).IL-21和IL-18能显著提升CIK细胞培养上清IFN-γ浓度、CD3+CD56+细胞比例和细胞杀伤活性.     

长非编码RNA基因Z38对人乳腺癌细胞BT549生物学特性的影响

为探讨稳定干扰长非编码RNA基因Z38对乳腺癌细胞BT549的影响,向BT549细胞转染干扰Z38表达的慢病毒,经嘌呤霉素筛选获得稳定干扰的细胞,采用RT-PCR检测Z38的表达水平、MTT法检测细胞增殖及耐药性、克隆法检测细胞集落形成能力、碘化丙啶染色方法分析细胞周期、流式细胞术分析肿瘤干细胞标志物CD44和CD24的表达.结果表明,特异性的慢病毒能显著降低Z38表达水平,使细胞增殖能力、抗化疗药物能力及细胞集落形成能力显著降低,导致G_2/M期细胞数目显著减少,细胞周期受阻,并且显著降低了CD44~+/CD24~-细胞群百分比而导致细胞的肿瘤干细胞特性降低.     

丙二醛对体外培养骨髓间充质干细胞生长与增殖的双重影响

探讨了丙二醛(MDA)对体外培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的生长与增殖状态的影响及其作用机制．在不同浓度MDA条件下培养hMSCs，以细胞计数测定细胞生长曲线，MTF法检测细胞活力，流式细胞技术用于细胞周期和细胞凋亡分析．结果表明，高浓度MDA培养体系hMSCs细胞数减少，群体倍增时间延长，细胞活力明显降低，细胞的凋亡率增加，然而G2／M期和S期的细胞百分率明显增加．研究证明：体外培养的hMSCs在高浓度MDA条件下既造成了细胞的损伤与衰老死亡，又启动了引发干细胞分裂繁殖的分子生物学机制，隐含着具有重要科学价值的信息．     

快速测定甜菜染色体倍数性的一种细胞学方法

<正> 甜菜多倍体新品种的选育,特别甜菜三体的选育过程中,准确测定甜菜细胞染色体数是一重要环节。因此,对准确而快速测定甜菜细胞染体倍数,一些作者从预处理上进行较多探讨。Rosen用冷冻和秋水仙素预处理四倍体甜菜。S。pM必oB等人用冷冻和8—羟基喹啉预处理甜菜胚根。李盛贤等人用冷冻和对二氯苯预处理甜菜胚根。白庆武等人对冷冻以及冷冻结合药剂预处理甜菜胚根,作了对比分橱研究。他们的研究对准确测定甜菜染色体倍数性具有重要的应用意义。然而,为达到快速而准确测定甜菜细胞染色体数和倍数性目的,除在显微镜下找到大量而清晰的细胞中期染色体图象之外,还需提高细胞染色体制片速度和质量。因此,我们对甜菜染色体数和倍数性的测定,从压片染色方法上作了一些改进,并达到了快速而准确测定甜菜染色体数和倍数性的良好效果。     

非受体酪氨酸激酶BMX对宫颈癌C-33 A细胞成球能力的影响

为探索非受体酪氨酸激酶BMX(也称Etk)对宫颈癌C-33 A细胞成球能力的影响,应用免疫细胞化学和Western blot检测BMX在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C-33 A、HT-3、CaSki中的表达及定位,构建BMX过表达质粒载体,转染至C-33 A细胞中,筛选稳定过表达的细胞株,利用细胞成球实验检测BMX对C-33 A细胞成球能力的影响。免疫细胞化学染色显示,BMX主要在细胞浆中表达,在细胞核中也有部分表达,在HeLa、SiHa、HT-3及CaSki细胞系中BMX高表达,而在C-33A细胞中低表达。Western blot检测也得出同样的结果。将BMX过表达质粒载体转染至C-33A细胞系中,鉴定稳定过表达的细胞株(C-33 A-AcGFP,C-33 A-BMX)。对照组和BMX过表达组细胞成球实验显示,对照组球体较为松散而过表达组较为密实,两组细胞成球率无明显差异(P0.05),但是过表达组球体直径明显大于对照组(P0.001)。上述结果表明:非受体酪氨酸激酶BMX促进宫颈癌C-33 A细胞的成球能力。     

自制仪器在本科专业实验教学中的应用

聚合物蠕变曲线和本体黏度测定是大学高分子物理的专业基础实验.使用自制简易蠕变仪可以更好地对聚合物蠕变性能进行研究.自制简易蠕变装置高66cm,宽4cm,结构简单,成本低廉,操作方便,现象直观.选用此装置来测定PVC塑料薄膜的蠕变性能,很好地诠释了此实验原理,特别适合初学高分子物理的本科学生进行研究.     

EPS8蛋白的表达、多克隆抗体制备及其亚细胞定位

EPS8 (EGFR pathway substrate 8)是epidermal growth factor receptor (EGFR)重要的激酶活性底物之一,近年有研究表明其与神经胶质瘤密切相关.为了对该基因进行深入的功能研究,成功地将EPS8基因构建于原核表达载体pGEX-4T-2,转化BL21(DE3)获得融合表达产物,用GST-EPS8(-10-230aa)免疫新西兰大白兔获得兔抗EPS8多克隆抗体.采用Western Blot,用该抗体检测EPS8基因的真核表达产物,证明该抗体有较好的针对EPS8蛋白的专一性,可用于对EPS8的结构和功能研究.同时,用该抗体通过荧光免疫细胞对4种神经胶质瘤细胞系进行定位分析发现,EPS8蛋白主要分布于胶质瘤细胞的细胞质中.     

鬼臼乙叉甙诱导NB4细胞凋亡的实验研究

为了从细胞凋亡角度探讨鬼臼乙叉甙（4′－demethylepipodophyllotoxin-9-4(4,6-O-ethylidene-β－D－glucopyranoside）抗肿瘤作用的机理。用活细胞计数法,克隆形成法及MTT比色法观察了其对NB4细胞的生长抑制作用;用光学显微镜及电子显微镜观察了凋亡细胞的形态学变化;用琼脂糖凝胶电泳观察了DNA的梯形改变。结果发现：鬼臼乙叉甙能显著抑制NB4细胞的生长增殖及诱导其凋亡,诱导凋亡是鬼臼乙叉甙抗肿瘤作用的机理之一。     

HIV-1型Nef基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立

为了构建艾滋病毒HIV-1型Nef基因重组表达载体,利用PCR从p NL4-3质粒上扩增HIV-1型Nef基因,获得Nef基因完整的编码区,构建可表达Nef蛋白的p EB-myc-nef重组表达载体.经鉴定正确后,利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染SW480细胞,通过Western Blot技术检测Nef蛋白的瞬时表达.为了建立稳定表达Nef基因的SW480细胞系,采用G418筛选建立稳定表达细胞系的方法,筛选出单克隆细胞系.扩大培养克隆细胞后,通过RT-PCR和Western Blot分别检测Nef的mRNA转录水平及蛋白表达水平,经长达60 d的传代,最终获得稳定表达Nef基因的SW480细胞系,为研究RNAi在艾滋病治疗方面的应用提供了细胞模型.