修饰合成冬鲽抗冻肽基因的设计和克隆

动物界和植物界密码子使用频率不同,冬Ｄｉｅ抗冻肽中丙氨酸占６０％而且偏爱ＧＣＣ,３８个Ａｌａ密友子中２３个为ＧＣＣ。我们设计合成抗冻肽基因时采用了植物基因常用密码子,用甘薯信号肽序列取了抗冻肽的ｐｒｅ序列,省略了Ｐｒｏ序列,并 信号肽下游二、四、八拷贝正向串联的成太的修饰基因,经测序证实与设计完成一致。利用ＱＩＡ表达系统,在大肠杆菌中实现了ＤＨＦＲ－成熟抗冻肽单体和二体的融合表达。     

eglinC基因的化学合成与克隆

采用固相亚磷酰胺法合成了ｅｇｌｉｎＣ全基因，该基因全长２２１ｂｐ，包括其结构基因，５’－端起始密码子ＡＴＧ和３－端终止密码子ＴＡＧ，并在基因的５－和３－分别装上ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ位点。共分１２个片段，采取分段合成，酶促连接成完整的ｅｇｌｉｎｇＣ基因。合成的基因克隆于Ｍ１３载体，经杂交，检测，筛选出含ｅｇｌｉｎＣ基因的克隆。用双脱氧链终止法测其序列，结果与设计的一致。     

癌胚抗原启动子驱动tk基因在人肺腺癌细胞中的靶向表达

用荧光素酶报导基因,发现ｃｅａ启动子在ＥＣＡ阳性的肺腺癌细胞Ａ５４９中的活性是在ＣＥＡ阴性的宫颈癌细胞Ｈｅｌａ中的１６倍。构建了重组表达质粒ｐＣＥＡｔｋ,ｃｅａ启动子控制效应基因单纯疱疹病毒胸苷激酶基因的表达。     

鱼抗冻蛋白在E.coli和Yeast中高效表达的理论初探

按照Ｅ．ｃｏｌｉ和Ｙｅａｓｔ甚高表达基因中的同义密码子使用、碱基构成和密码子之间的碱基关联的ＥＥＮＳ模式，对鱼抗冻蛋白基因ＡＦＰＩＩＡ７进行了改造，理论上使得ＡＦＰＩＩＡ７基因在Ｅ．ｃｏｌｉ和Ｙｅａｓｔ中的表达水平有了非常显著的提高．未改造的ＡＦＰＩＩＡ７基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达，其表达水平为ＣＡＩ＝０．４１１，ＣＥＩ＝３．２４０是较低表达水平的基因，估计值在１０～１０３ｍｏｌ／ｃｅｌｌ之间．经改造后，其表达水平变成甚高表达基因ＣＡＩ＝０．８６８，ＣＥＩ＝５．９７８，估计值在１０４～１０５ｍｏｌ／ｃｅｌｌ之间．在Ｙｅａｓｔ中表达，未改造的ＡＦＰＩＩＡ７基因的表达水平为ＣＡＩ＝０．３５９，ＣＥＩ＝５．８８０，也是较低表达基因．经改造后，此基因为Ｙｅａｓｔ的高表达基囚，ＣＡＩ＝０．７０３，ＣＥＩ＝１１．６６８．本文的方法为异质基因获得高效表达提供了一种理论途径．     

P48L和D74N突变影响P16基因功能

应用ＰＣＲ技术，对Ｐ１６抑癌基因进行体外定突变。在Ｐ１６ｃＤＮＡ中引入第４８位密码子ＣＣＧ（Ｐｒｏ）→ＣＴＧ（Ｌｅｕ）和第７４位密码子ＧＡＣ（Ａｓｐ）→ＡＡＣ（Ａｓｎ）突变，构建了ｐ１６－Ｐ４８Ｌ和ｐ１６－Ｄ７４Ｎ突变体，并把它们导入纯合缺失Ｐ１６基因的人肺癌细胞株Ｈ４６０。     

6个氨基酸小C肽人胰岛素原类似物基因的构建和表达

用片段置换法，从在Ｃ肽两端具有酶切位点的双突人胰岛素原因中，将Ｃ肽基因替换成含Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ６个氨基酸小Ｃ肽基因。将这个小Ｃ肽岛素原类似物基因重组到具有Ｔａｃ启动子的质粒中，并与部分牛凝乳酶原基因融合，在Ｅ．ｃｏｌｉ中得到了高效表达。表达的ＢＣ＇Ａ融合蛋白占菌体总蛋白的１６％。表达产物以包含体形式存在，经ＣＮＢｒ裂解及磺酸，再经复性后，具有对胰岛素的放射免疫活性。     

转CMV－CP基因的番茄对CMV的抗性表现及遗传分析

本实验表明转ＣＭＶ－ＣＰ（ＣｕｃｕｍｂｅｒＭｏｓａｉｃＶｉｒｕｓＣｏａｔＰｒｏｔｅｉｎ）基因的番茄对ＣＭＶ的侵染有很强的抗性。外源基因在转基因番茄及其后代中的分离比例为３∶１和１∶１．     

人骨髓单核细胞表面分化抗原CD14基因的扩增,克隆和…

根据人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４基因的核苷酸序列，设计ｈＣＤ１４基因５＇端和和３＇端的两个引物。以人血中提取的基因组总ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链式反应技术特异性扩增该基因１４５ｂｐ的编码序列。     

化学合成的α—降钙素基因相关肽基因在大肠杆菌中的融合表达 …

化学法合成的α－降钙素基因相关肽基因从ｐＸＺ１０１有达质粒转移到ＰＵＣ１８质 测序鉴定后,克隆到ＰＧＥＸ表达载体上,在大肠杆菌Ｃ６００中表达。     

AcNPV增强子hr5增强HBsAg基因表达的研究

用形成包涵体（ＯＯＣ＋）并能利用人工合成启动序列和多角体ＸＩＶ启动子表达外源基因的转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３将多角体基因、乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢＳＡｇ）基因和苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）的增强子ｈｒ５部分序列同时插入无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－Ｇ基因组中，得到两株高效表达ＨＢｓＡｇ基因又形成包涵体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ３５－ＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ２６－ＯＣＣ＋．对重组病毒的酶切鉴定、ＤＮＡ斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证实，外源基因及其相应的启动子和增强子序列已正确插入病毒基因组中．插入顺序中，ｈｒ５增强子是插入ＨＢｓＡｇ基因下游，多角体基因与ＨＢｓＡｇ基因方向相反．１２５Ⅰ－固相放射免疫检测和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，ＨＢｓＡｇ基因在昆虫离体细胞中得到高效表达并保留了抗原活性．ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ２６－ＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ３５－ＯＣＣ＋表达的ＨＢｓＡ吕蛋白与没有插入增强子序列的重组病毒ＴｎＮＰＶ—ＨＢｓ８５－ＯＣＣ＋的比较，分别提高了４０％和４６％．     

水稻抗稻瘟病,绿叶蝉和黄萎病基因BAC克隆的物理定位

植物单拷贝短序列的染色体原位杂交的检出率一直径低。水稻ＢＡＣ克隆作为一种大容量载体的基因组克隆因其独特的优点已被应用于水稻基因组研究。用生物素标民了两个水稻ＢＡＣ克隆,这两个克隆分别含与抗稻瘟病基因Ｐｉ－５（ｔ）、     

外源nfeC基因导入快生型大豆根瘤菌菌株HN01的行为分析

ｎｆｃＣ基因是从慢生型大豆根瘤菌中克隆到的，与竞争结有关的基因。     

重组腺病毒介导的基因转移系统的建立以及在离体及活体中表达

首先建立了重组腺病毒载体介导的基因转移系统：将质粒ｐＡｄＣＭＶｌａｃＺ用磷酸钙沉淀法转移至２９３腺病毒包装细胞中，经挑克隆、病毒扩增、纯化、浓度和滴度测定，制备了纯化的病毒颗粒ＡｄＣＭＶｌａｃＺ；以此感染离体细胞，ｌａｃＺ基因转移效率可达９０％￣９５％；小鼠被直接活体注射重组的腺病毒ＡｄＣＭＶｌａｃＺ，ｌａｃＺ基因能够在多种组织中表达。其次，运用重组腺病毒介导的基因转移系统，进行了人凝血因子ⅨｃＤ     

改造人干扰素α2b基因在大肠杆菌中获得高效表达的理论方法

按照Ｅ．ｃｏｌｉ甚高表达基因中同义密码子使用,密码子内和密码之间碱基关联的ＥＥＮＳ模式,对人干扰素α２ｂ基因编码区中的同义密码子进行置换,理论上使得人干扰素α２ｂ基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达水平有非常显的提高,在理论上,未改造的人干扰素α２ｂ基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达水平为ＣＡＩ＝０．３２３,ＣＤＩ＝０．５７４,ＣＥＩ＝０．６２９,是较低表达水平的基因,估计实际表达水平在１０～１０＾３ｍｏｌ／ｃｅ     

杀虫晶体蛋白基因CryIA（c）表达载体构建与表达研究

为了检测改造后的ＣｒｙＩＡ（Ｃ）基因在植物中的表达，将其构建成表达载体并采用膛杆力介导的方法导入蕃茄，通过对转基因番茄植株的ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｍ和Ｎｏｒｔｈｅｍ ｂｌｏｔ分析，证实外源ＣｒｙＩＡ（ｃ）基可整合到番茄基因组中，并能顺利表达，为该基因在其它农作物上的提供了依据。     

大肠杆菌基因启动子探针型载体的构建

利用ＰＣＲ技术将ｐＵＣ１８和ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中的多克隆位点区（ＭＣＳ）及旁侧序列分别进行扩增,然后将扩增产物插入到已除去ＬａｃＺα基因的ｐＵＣ１８中,获得三个中间载体ｐＳＵＧＶ１,ｐＳＧＶ２和ｐＳＵＧＶ３,最后将ｐＳＵＰＶ２中无表达活性的新霉素磷酸转移酶Ⅰ（ＮＰＴⅠ）基因分别插入到三个中间载体的ＭＣＳ中,构建成功大肠肝菌基因启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ４,ｐＳＵＰＶ５和ｐＳＵＰＶ６．     

高抗病毒多基因转化烟草新品系的快速繁育

高抗病毒多基因转化烟草新品系的快速繁育ＦａｓｔＢｒｅｅｄｉｎｇｏｆＨｉｇｈＲｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＣｕｃｕｍｂｅｒＭｏｓａｉｃＶｉｒｕｓＣｏｎｆｅｒｒｅｄｂｙＭｕｔｉｐｌｅＧｅｎｅｓｉｎＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＣｏｍｍｅｒｃｉａｌＴｏｂａｃｃｏＣｕｔｉｖ...     

结核杆菌基因诊断研究进展

结核病被ＷＨＯ 称为最重要的传染病，目前结核病的确诊主要依靠涂片、镜检观察，这种方法阳性率不高，且准确性差。Ｅｌｉｓａ 、ＲＩＡ、ＢＡＣＴＥＣ及ＭＢ－ Ｃｈｅｃｋ 培养系统提高了检测的准确性，也较为快速，但不能最终确诊。基因诊断是以分析核酸而达到特异、敏感、快速地检测和鉴定结核杆菌的目的。本文论述了目前用于结核杆菌检测和鉴定的几种基因诊断方法，即基因探针技术、基因扩增技术、基因分型，其中着重介绍了ＰＣＲ 技术在结核杆菌诊断中的广泛应用。     

慢性丙型和乙型肝炎基因产物表达形态比较

比较慢性丙型和乙型肝炎基因产物表达形态。方法：７６例经ＥＬＩＳＡ和ＨＣＶＲＮＡ检测证实的ＨＣＶ肝炎活检标本，用ＮＳ３区基因克隆产物ＣＰ２２和Ｃ３３ｃ标记，并与１７６例标记ＨＢｃＡｇ的乙型肝炎比较。结果；３６例丙型肝炎的ＣＰ２２１５例胞质阳性，Ｃ３３ｃ１９例胞质阳性。     

不同因素HCV结构区基因重组诱发小鼠产生抗体的影响

目的：寻求ＨＣＶ基因免疫的最佳动物实验方法,探讨不同处理因素对基因重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１诱发小鼠产生抗体的影响。方法：用分子生物学技术构建丙型肝炎病毒基因重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１,采用不同免疫次数、途径、剂量和不同处理方法免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。结果：重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１经肌肉１、２、３和４次免疫小鼠后（１００μｇ／只,ｎ＝１２）,抗体水平分别为０．１８３±０．００６、０．４２８±０．０５、０．７０