蛋白质分析技术的发展趋势

在综述定量测定蛋白质的分析方法的基础上，着重阐述了染料、染料一金属配合物作探针的吸光光度法、荧光光度法以及近几年来兴起的共振瑞利散射法在蛋白质的测定中的应用和发展动态，便于读者参考。     

二溴羟基苯基荧光酮-Mo(Ⅵ)蛋白质光谱探针研究

研究了二溴羟基苯基荧光酮（ＤＢＨＰＦ）－Ｍｏ（Ⅵ）配合物作为蛋白质光谱探针的结果。在ｐＨ２．０￣４．０ＨＣｌ－ＮａＡｃ缓冲介质中,乳化剂ＯＰ存在下,ＤＢＨＰＦ－Ｍｏ（Ⅵ）室温下与蛋白质迅速形成稳定的复合物,使ＤＢＨＰＦ－Ｍｏ（Ⅵ）配合物５３２ｎｍ处吸收峰值降低,根据这一变化可以定量测定微量蛋白质。该法选择性佳,稳定性好（达２４ｈ）,可直接用于人尿或人血清蛋白质的定量测定,结果与Ｐｒａｄｆｏｒｄ法相     

胶束体系络合物光谱探针光度法测定蛋白质

在pH 4.80的HAc-NaAc缓冲液中,用溴邻苯三酚红(BPR)-Eu3+作为光谱探针,以Triton-100为胶束增敏剂,采用分光光度法研究了BPR-Eu3+-蛋白质三元离子缔合物的光谱性质及生成条件.牛血清白蛋白(BSA)浓度在3.35～60.3 μg/mL范围内三元离子缔合物的吸光度遵循比尔定律,线性回归方程为:A=0.0485 c-0.0089 (c:mol·L-1),相关系数R=0.9993,表观摩尔吸收系数为4.8×105 L·mol-1·cm-1.初步探讨了其反应机理,BSA与BPR-Eu3+络合物之间主要以静电引力相结合.用该方法对生物样品中蛋白含量进行测定,结果满意.     

一种新型荧光探针的光谱性能

研究了化合物N-戊基-4-（2，2’-二吡啶基）氨基-1，8-萘酰亚胺在不同pH值下的紫外可见光谱和荧光光谱。在酸性条件下，二吡啶胺上的仲胺质子化后，使二吡啶胺给电子能力降低，萘酰亚胺荧光团的荧光发生猝灭。通过调控pH值来改变萘酰亚胺的4位取代基二吡啶胺的给电子能力，使荧光发生明显变化，从而得到新型的荧光探针。     

钨(Ⅵ)-二溴羟基苯基荧光酮配合物光谱探针测定蛋白质

研究了W(Ⅵ)- 二溴羟基苯基荧光酮(DBHPF)配合物与蛋白质的相互作用及光谱性质.提出了以W(Ⅵ)-二溴羟基苯基荧光酮配合物作为光谱探针测定微量蛋白质的方法.实验结果表明,在pH为 2.43的 Hac-NaAc缓冲介质中,在表面活性剂溴化十六烷基三甲基胺(CTMAB)存在下,DBHPF - W(Ⅵ)在室温10 min 后与蛋白质形成稳定的复合物,最大吸收波长在573 nm处.蛋白质浓度在0～5 mg·L-1 范围内符合比尔定律,复合物的表观摩尔吸光系数为ε=7.81×105 L·mol-1·cm-1.该方法具有很高的灵敏度和选择性,可直接用于人体尿液、新生牛血清中蛋白质的测定,回收率分别为103%和107%.     

硫化氢荧光探针的研究进展

硫化氢因为具有刺激性的臭鸡蛋气味被人们认为是毒性气体,但是研究发现该气体是生物体代谢过程的产物之一,与很多疾病密切相关。而且研究发现,该气体是目前发现的三种气体递质之一。因此研究硫化氢的具体生理机制具有重要的科学意义。本文综述了近年来发表的检测硫化氢的荧光探针。     

维生素发光探针的研究进展

维生素是维持生命活动必需的一类物质,本文综述了荧光分析在维生素类药物分析测定_申的研究进展,提出尚需对各方法的选择性和灵敏度进行研究。     

罗丹明6G生物探针测定蛋白质

以荧光染料单体和二聚体平衡转化为基础,提出了以罗丹明6G荧光染料为生物探针测定蛋白质的方法。罗丹明6G在十二烷基磺酸钠（SDS）的存在下形成二聚体,蛋白质的定量加入可以调节这一平衡,据此拟定测定蛋白质的分析方法,该法线性范围宽,灵敏度高,反应速度快,正确度高,抗干扰能力强,对样品的分析结果令人满意。     

光谱检测新技术应用研究－Ⅱ.吸光染料标记测定蛋白质

将所提出的光谱检测新技术应用于常用标记染料的分析测定, 所得光谱图形状与吸收光谱相似, 检测限比相应的分光光度法测定降低１ 个数量级左右．     

阴离子染料荧光素生物探针测定蛋白质

以荧光染料单体和二聚体平衡转化为基础 ,提出了荧光素二聚体生物探针测定蛋白质的方法 .其结果与常用的考马斯亮兰法一致 ,但线性范围宽 ,可作为蛋白质常规分析的新体系     

共振光散射光谱法测定微量蛋白质

利用光吸收和共振光散射(RLS)光谱研究了铝试剂(ATA)与蛋白质在水溶液中的相互作用.在pH2.50时,蛋白质可使弱的ATA光散射信号曾强.基于这种现象,我们运用RLS技术,建立了测定纳克级蛋白质的方法.该方法简单、实用、灵敏.BSA的线性范围为0.010~27.4μg/mL,HSA的线性范围为0.010~30.5μg/mL.BSA的检测限为10.7 ng/mL,HSA的检测限为10.2 ng/mL.对实际人血清样品中的蛋白质进行了测定,其结果与临床方法一致.氨基酸、金属离子或其它共存化合物的干扰很小.     

茜素红S与蛋白质作用的光散射光谱及其分析应用

研究了茜素红S作为光散射探针测定蛋白质的分析方法．在pH=4．0的Britton-Robinson缓冲溶液中。茜素红S与蛋白质结合后有强烈的光散射作用，在λ=353nm处，光散射强度最大，且光散射强度与蛋白质浓度成正比．由此建立了测定蛋白质含量的分析方法．方法灵敏度高，检测限达0．01mg／L，线性范围为0．02～6mg／L．方法适用于人血清蛋白含量的测定．     

钙离子对S100A1蛋白聚合形式的影响

S100A1是钙结合蛋白家族S100亚家族中一个小分子量的酸性蛋白．研究S100A1蛋白分子在溶液中的构象均一性随不同钙高于浓度的变化规律，发现钙离子浓度的提高促使S100A1蛋白的寡聚化，稳定蛋白质分子的构象。     

普利沙星与牛血清白蛋白相互作用的光谱学研究

采用荧光光谱法(FS)和紫外光谱法(UV)研究了普利沙星与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.确定了静态猝灭和非辐射能量转移是普利沙星猝灭BSA荧光的主要原因;求得了普利沙星与BSA之间的结合常数K在25℃时为1.05×105、在37℃时为6.68×104;它们之间的结合位点数n为1;根据F rster非辐射能量转移机理求得给体与受体间的结合距离r为5.59 nm和能量转移效率E=0.163.牛血清白蛋白与普利沙星分子间有较强的结合作用,且结合力以静电作用为主.     

白蛋白-ALC复合物的可见光谱特性及其应用

研究了白蛋白与茜素络合腙 (AL C)的显色反应 .在含 0 .0 15 %Triton X- 10 0 p H3.7的 B- R缓冲溶液中 ,AL C与白蛋白形成红色复合物 ,λmax为 5 40 nm ,ε为 7.5× 10 4L· mol- 1 · cm- 1 ,白蛋白的质量浓度在 5 0mg/L～ 70 0 mg/L 范围内 ,服从 Beer定律 .所提出的方法可直接用于血清中白蛋白含量测定 .     

达旦黄-OP体系共振瑞利散射法测定蛋白质

研究了达旦黄与蛋白质的结合反应．在乳化剂OP存在下及pH1．6的酸性介质中，蛋白质与达旦黄形成复合物，使最大波长460nm的共振光散射光谱得到加强，根据其共振光散射的增强程度，可用于蛋白质的定量测定．乳化剂OP的加入，使灵敏度提高1．7倍．牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵白蛋白、γ-球蛋白的线性范围分别为0．03～1．0、0．04～1．1、0．05～1．4、0．05～1．3mg／L，检测限分别为13．1、13．9、17．1、16．2μg／L．用于人血清、牛奶、豆浆、尿液中蛋白质的测定，结果与经典的考马斯亮蓝法一致．     

乙基曙红分光光度法测定蛋白质

在pH3 5～4 0的NaAc HCl介质中,乙基曙红与蛋白质结合形成复合物,溶液颜色发生变化,最大吸收波长为548nm,比乙基曙红红移了28nm,并在520nm处产生最大褪色,其吸收或褪色作用均可用于蛋白质的分光光度测定.在最大吸收波长548nm处,蛋白质的浓度在0 23～20 0μg·mL-1(HSA)和0 25～17 5μg·mL-1(BSA)范围内与吸光度成正比,其表观摩尔吸光系数分别为1 33×106L·mol-1·cm-1(BSA)和1 26×106L·mol-1·cm-1(HSA);而在最大褪色波长520nm处测量,上述范围的蛋白质浓度也与褪色程度成直线关系,其表观摩尔吸光系数分别为2 02×106L·mol-1·cm-1(BSA)和2 06×106L·mol-1·cm-1(HSA),褪色光度法灵敏度更高.并且方法选择性好,用于尿液及人血清样品中总蛋白的测定,所得结果与考马斯亮蓝法基本一致.     

核酸分析中的新突破双-嵌入剂荧光探针

近年来兴起的双－嵌入剂是一类安全、方便、高灵敏度、低背景的理想核酸探针,当使用激光激发的共焦荧光扫描仪检测时,对核酸的分析可达ｐｇ级,赶上甚至超过了放射性同位素标记物．本文对双－嵌入剂荧光核酸探针的结构、性质、应用及发展展望几方面进行了综述．     

微乳液增敏快速测定尿蛋白

在乳化剂OP(OP)微乳液介质中 ,以水杨基荧光酮(SAF) (Mo(VI)配合物作为蛋白质光谱探针研究了尿蛋白的测定。在pH 2 .6HCl-C8H5KO4缓冲溶液中 ,SAF(Mo(VI)与蛋白质迅速形成稳定的复合物 ,使SAF(Mo(VI)配合物在 5 2 3nm处吸收峰值降低 ,其吸光度的变化值与BSA量在 0～ 12μg·mL-1范围内符合比耳定律 ,摩尔吸光系数ε为 5 .2 7× 10 6L·mol-1·cm-1。用于尿样分析 ,结果满意     

锌试剂-蛋白质体系的共振光散射光谱研究

 在pH 3.0的B-R缓冲溶液中,锌试剂能与蛋白质结合形成复合物.此结合反应能显著加强锌试剂的瑞利光散射信号.详细研究了此结合反应的最佳反应条件,并以此反应为基础,利用共振瑞利散射光技术,建立了一个测定蛋白质的新方法.该方法对牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)以及免疫球蛋白测定的线性范围分别为0.25~12.5,0.10~15.0μg/mL和0.10~12.5μg/mL,检出限均小于0.05μg/mL,且大量的常见金属离子、氨基酸等共存物质不干扰测定.方法具有很高的灵敏度、很好的选择性及重现性.用于血清样品中蛋白质的测定,结果满意.