猴B病毒研究进展

人类和其它灵长类动物种系发生关系密切 ,二者在生理和生化方面非常相似 ,这对生物医学研究非常有益。因此继续研究控制和根除非人灵长类动物中潜在危险性致病因子是生物医学界的共同使命。这些努力不仅有利于保证使用这些珍贵动物或其组织进行研究的人员的健康和安全 ,而且还保证了持续获得这些独特资源用于未来生物医学的研究。本文将对猴群中广泛存在 ,对人类健康威胁很大的Ｂ病毒研究进展情况做一概述。猴是Ｂ病毒的自然宿主 ,感染率可达1 0 % -60 % ,多数情况下呈良性经过 ,仅在口腔粘膜或 /和生殖器粘膜出现疱疹和溃疡 ,之后病毒可长…     

双抗体夹心ELISA检测禽流感病毒方法的初步建立

用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒(AIV)抗原的双抗体夹心ELISA方法. 经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件为:兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1: 8 000(浓度为3.531 ug/mL),抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1: 800,酶标二抗的工作浓度为1: 4 000. 与其他禽易感病毒(NDV、IBV、EDS-76V)等均没有交叉反应. 结果表明,本方法具有很高的特异性.     

食蟹猴(Macaca fascicularis) B病毒相关抗体的初步探讨

以人单纯疱疹病毒为抗原，用玻片免疫酶法（ＥＩＡ）检测来自广西中越边境地区及广西灵长类研究中心的食蟹猴Ｂ病毒相关抗体。发现食蟹猴Ｂ病毒相关抗体的阳性率随年龄增长而增加。野外捕获混养级阳性率为８３．４％；野外捕获组阳性率为４９．８％；自繁分笼群养组阳性率为１４．６％。三组中，不同性别之间相关抗体阳性率没有显著性差异（Ｐ〉０．０５），组间Ｂ病毒相关抗体阳性率的差异极显著（Ｐ〈０．０５）。     

恒河猴B病毒血清抗体流行病学调查

目的摸清B病毒(BV)感染现状,从而有效降低BV在恒河猴群中的感染率。方法采用ELISA方法对恒河猴血清进行抗体检测。结果检测样品629份,其中350份呈BV抗体阳性,10份血清呈BV抗体可疑,其余血清为抗体阴性。结论种猴(≥11周岁)BV感染率89%;青年猴(3~10周岁)BV感染率39.2%;幼龄猴(≤2周岁)BV感染率7.6%。随着年龄的增长,恒河猴群中BV感染率越高。     

BV EIA、BV ELISA在检测食蟹猴BV抗体中的比较研究

本中心待出口美国、德国的 5 34份食蟹猴血清用国产BVEIA抗原检测片检测后送美国BioReilance公司进行检测。 5 34份血清中 ,11分为阳性 ,5份为可疑 ,5 18份为阴性。经美国复检 5 14为阴性 ,8份为可疑 ,12份呈阳性。两者的检测符合率达 95 9% ,说明BVEIA检测准确度已达到国际检测水平 ,可为国内猕猴生产单位控制BV检测质量提供有力的技术保证。     

自繁幼猴感染B病毒的情况调查

目的调查昆明亚灵生物科技有限公司室外猴场食蟹猴和恒河猴群B病毒（猴疱疹病毒Ⅰ型）的抗体情况,以了解B病毒在母猴和幼猴之间的传播.方法对繁殖年龄的雌性和雄性猴血清B病毒抗体进行检测,按照血清抗体B病毒阳性和阴性分开饲养,建立繁殖群.对出生1岁以上的幼猴进行血清病毒抗体检测.结果 检测的137份B病毒阴性群自繁幼猴血清中,没有B病毒抗体呈阳性,阳性率为0％;检测的426份B病毒阳性群自繁幼猴血清中,有27份B病毒抗体呈阳性,阳性率为6.3％.     

人和猴的B病毒感染

由于非人灵长类的遗传、解剖和生理与人类相似 ,被广泛用于生物医学研究 ,人时常会直接与猴或其组织和体液接触。猴疱疹病毒 1型 (B病毒 )与单纯疱疹病毒 (HSV)相似 ,携带B病毒的大部分猴没有明显的临床症状 ,但B病毒感染人可引起致死性脑脊髓炎和神经后遗症。了解B病毒的历史、结构及临床症状等 ,有利于进行早期的抗病毒治疗和预防严重疾病或死亡的发生     

B病毒PCR检测方法的建立

目的建立B病毒核酸的PCR检测方法。方法设计引物,用PCR方法扩增B病毒,并验证其灵敏性和特异性。结果引物P1、P2及P3、P4在以B病毒为模板时有特定大小的目的片段出现,在以其他病毒为模板时无目的片段出现;引物P5、P6以B病毒和人单纯疱疹病毒I型(HSVI)为模板能扩增出382bp的产物,经SacⅡ酶切后,B病毒产生176bp和206bp的两个片段,HSVI无变化。结论通过PCR方法成功的区分开B病毒,并且鉴定区分了B病毒和HSVI。     

马来西亚食蟹猴B病毒相关抗体检查

目的 提供马来西亚食蟹猴B病毒相关抗体阳性率,为我国从马来西亚进行食蟹猴引种提供参考依据.方法 对野外捕捉的1 916只食蟹猴后股静脉采血,低温静置,高速离心、分离血清,用玻片免疫酶法(EIA)和ELISA诊断试剂盒法两种方法对血清进行检测.结果 总的B病毒相关抗体阳性率为68.5%,其中年龄<2岁、2～4岁、4～6岁的B病毒相关抗体阳性率分别为53.0%、63.8%和76.4%.结论 马来西亚食蟹猴B病毒相关抗体阳性率较大;B病毒相关抗体的阳性率是随着年龄的增加而增加;B病毒的感染不受性别的影响.因此在引种过程中应选用年龄较小者.     

猴免疫缺陷病毒(SIV)双抗原夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

目的研制灵敏、特异的检测血清中猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodeficiency Virus,SIV)的双抗原夹心ELISA(dsELISA)诊断试剂盒并进行初步应用。方法采用原核表达系统表达并纯化的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)包膜蛋白(gp41)作为包被用抗原,建立dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,研制ELISA诊断试剂盒,经敏感性、特异性和重复性试验考核试剂盒的质量,并与美国BIORELIANCE公司试剂盒进行比较,将结果经美国VRL验证,判断本试剂盒与美国BIORELIANCE公司试剂盒两者之间的符合率。结果该试剂盒具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。4℃条件下能保存8个月,与其他血清无交叉反应,与美国BIORELIANCE公司试剂盒检测结果的符合率为96%。结论研制成功的实验猴SIV ELISA检测试剂盒可用于临床检测。     

广西地区恒河猴(Rhesus Monkey)B病毒相关抗体的检查研究

采用玻片免疫酶法（ＩＥＡ）和酶联免疫吸附试验法（ＥＬＩＳＡ），检查了来自广西不同来源恒河猴Ｂ病毒的相关抗体。结果表明：广西野生恒河猴受Ｂ病毒的感染较为普遍，来自龙虎山及扶绥保护区的猴，Ｂ病毒相关抗体阳性率分别是７９．７％和７５．３％。来自穿洞河及布柳河保护区的猴，Ｂ病毒相关抗体阳性率分别是２６．１％和２８．９％。大新保护区猴阳性率为５７．１％。在不同组猴中，小群关养组猴相关抗体阳性率最高，野生猴次之，自繁猴最低。三组间，猴Ｂ病毒相关抗体阳性率的差异极显著（Ｐ＜０．０５），经ＥＬＩＳＡ检查确定为阴性的猴，用ＩＥＡ检查出７．５％（１５／２００）的猴被判定为阳性猴     

广西地区恒河猴(Rhesus Monkey)B病毒相关抗体的检查研究

采用玻片免疫酶法(IEA)和酶联免疫吸附试验法(ELISA),检查了来自广西不同来源恒河猴B病毒的相关抗体。结果表明:广西野生恒河猴受B病毒的感染较为普遍,来自龙虎山及扶绥保护区的猴,B病毒相关抗体阳性率分别是79.7%和75.3%。来自穿洞河及布柳河保护区的猴,B病毒相关抗体阳性率分别是26.1%和28.9%。大新保护区猴阳性率为57.1%。在不同组猴中,小群关养组猴相关抗体阳性率最高,野生猴次之,自繁猴最低。三组间,猴B病毒相关抗体阳性率的差异极显著(P<0.05),经ELISA检查确定为阴性的猴,用IEA检查出7.5%(15/200)的猴被判定为阳性猴。     

两种国产与一种进口小鼠肝炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究

目的 本研究拟对比小鼠肝炎病毒(MHV)抗体ELISA检测试剂盒的敏感性、特异性、精密性和可信度,以筛选出既经济又可靠的检测试剂盒.方法 选择两种国产与一种进口的ELISA试剂盒检测MHV抗体和以下5种病毒阳性血清:小鼠仙台病毒(SV)、小鼠肺炎病毒(PVM)、小鼠细小病毒(MVM)、小鼠鼠痘病毒(MPV)及小鼠呼肠孤...     

实验大鼠肺支原体ELISA检测方法的建立

报告了实验大鼠肺支原体感染ELISA检测方法的研究。抗原包被量在0.5μg/ml,酶结合物1:16000稀释时,P/N值最大。波长在492时O.D值随抗原和抗体浓度不同而呈现有规律的变化。阳性血清稀释至1:1280时,P/N值仍在阳性范围之内。与常规的分离培养方法相比较,ELISA的阳性检出率高,且阳性血清的ELISA阻断率均大于50％。重复测定,实验结果的再现性好。以上结果说明所建立的ELISA方法,其敏感性、特异性和重复性均好。在所检测的130只普通级大鼠中,抗体阳性率达91％。另外还发现在实验大鼠中还存在关节支原体的感染,且一般与肺支原体以混合感染的形式存在。在清洁级大鼠中未见这两种支原体的感染。     

加工番茄CMV与ToMV的ELISA检测及其相关性分析

用针对CMV和ToMV的单克隆抗体对田间表现病毒病症状的137个加工番茄自然病株进行了间接ELISA检测,检测结果表明,CMV和ToMV在加工番茄上的侵染率分别为83．2％和61．3％,并且2种病毒常复合侵染,复合侵染率达58．4％。用Eviews3．0软件借助加权最小二乘法（WLS）分析CMV和ToMV在病株上的带毒量,结果表明,2种病毒在病株上的积累是相互影响的,互为正相关关系。     

ELISA方法检测恒河猴血清中抵抗素

目的用ELISA检测试剂盒,探索一种恒河猴血清抵抗素（Resistin）定量的快速检测方法,初步建立各年龄段恒河猴血清抵抗素的正常参考值。方法选择用于人抵抗素检测的ELISA定量检测试剂盒,对恒河猴血清进行抵抗素的测定;按年龄段将实验猴分组,幼年组、成年组和老年组,每组10只,制备血清,检测抵抗素,并进行统计分析,初步建立各年龄段恒河猴血清抵抗素的正常参考值。结果用ELISA定量检测试剂盒测定恒河猴血清抵抗素数值稳定,幼年组、成年组和老年组的血清抵抗素正常参考值分别为（6 510±1 730）pg/mL、（5 880±1 250）pg/mL和（1 760±920）pg/mL,有随年龄增长而逐步降低的趋势,老年组极显著低于幼年组和成年组（P〈0.01）。结论人抵抗素ELISA检测试剂盒可以作为一种对恒河猴血清抵抗素定量的临时快速的检测方法,且随着年龄的增长其血清抵抗素正常参考值有逐步降低趋势。     

犬腺病毒2型抗原的制备及间接ELISA的建立

用MDCK细胞增殖犬腺病毒2型弱毒疫苗株,病毒培养上清液经差速离心和酒石酸钾密度梯度离心浓缩、纯化后作为诊断抗原,建立了犬腺病毒2型抗体检测的间接ELISA。确定最佳抗原包被量为0.168μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,作用时间为60 min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1:2000,作用时间为60 min,底物作用时间为37℃,10 min。判定标准为S/P值≥0.351者判为阳性,S/P值≤0.318者判为阴性。该抗原不与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬波特氏杆菌等3种犬常见传染病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数小于15%,显示具有较好的重复性;检测血清样品56份,与病毒中和试验结果比对的符合率为93.75%。本研究结果为实现犬腺病毒感染监测,进行犬腺病毒流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。