p53基因调控网络研究进展

肿瘤抑制基因p53表达的p53蛋白是一个通用转录因子,与其上、下游功能相关基因组成了一个复杂的基因调控网络,在这个基因网络中p53基因起着关键作用;DNA损伤、缺氧、原癌基因的激活等均能刺激p53基因表达;p53表达升高后,可通过p53-MDM2反馈环路与泛素系统等对p53表达水平进行精确调节;p53通过调控多种下游/靶基因表达完成多种生物学功能,主要包括阻滞细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性等;认识p53基因调控网络的功能有助于理解p53及其下游/靶基因间的具体作用机制。     

脑肿瘤中p53基因突变的研究

应用ＰＣＲＳＳＣＰ技术及ＤＮＡ 测序技术对３７ 例原发性脑肿瘤及相应外周血淋巴细胞中ｐ５３ 基因５ ～８ 外显子的突变情况进行了检测,结果表明,ｐ５３ 基因在原发性脑肿瘤中的突变频率为１９ ％ （７／３７） ．并且突变频率在不同病理类别脑肿瘤中的分布是非随机的,其中星形细胞肿瘤中的突变频率最高,为３６ ％ （５／１４） ．所有突变均为错义点突变,５７ ％ （４／７） 的突变位于ＣｐＧ位点．突变仅发现于脑组织中,外周血淋巴细胞中未检出突变,这些结果提示,ｐ５３ 基因突变在脑肿瘤的发生发展过程中起一定的作用,ｐ５３ 基因在散发性脑肿瘤中的突变为体细胞型的突变     

携带p53和p21基因腺病毒转移载体的构建

构建携带p53和p21基因的重组腺病毒转移载体以研究p53和p21联合基因治疗效果.将p53cDNA克隆到转移载体pCMV5GFP替代gfp,得到pCMVp53,使其受到CMV启动子的调控;同时将p21基因克隆到pCMVp53,得到重组腺病毒转移载体pCMVp53/p21.得到携带p53和p21基因的重组腺病毒转移载体.     

p53抗体与恶性肿瘤

p53基因是人类肿瘤中突变频率最高的抑癌基因,几乎发生于所有的恶性肿瘤.突变基因编码的p53蛋白释放入血,可诱发机体自身免疫应答,产生p53自身抗体.在肿瘤病人和高危人群中检测血清p53抗体可以反映早期p53基因突变,作为一种新的肿瘤生物学指标,p53抗体有望在恶性肿瘤的早期诊断、治疗、预后、监测、复发等方面发挥重要作用.     

GCK2软件在p53基因克隆过程中的应用

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的押癌基因，通过克隆p53基因对其表达调控进行研究。利用分子生物学软件GCK2．0对整个克隆过程进行分析，制定克隆策略，通过测序鉴定结果，得到了舍目的基因p53cDNA全序列的pTRE—p53重组质粒。通过GCK2．0分析，减少了基因克隆的盲目性，提高了工作效率。     

FHIT抑癌基因在头颈部鳞癌中的研究进展(综述)

脆性组氨酸三联体基因(FHIT)是1996年新发现的一种定位于人类染色体3p14．2上的抑癌基因，其编码的蛋白质具有ApnA水解酶的特性，可通过水解ApnA(主要是Ap3A)而阻止细胞生长信号传导途径，从而抑制细胞的生长；另有观点认为FHIT可与Ap3A等结合成FHIT底物复合物，这种复合物可能是一种信号物质，其抑癌作用可能比其水解酶作用更重要。研究表明FHIT在肿瘤的发生中起着重要的作用，现就FHIT在头颈部鳞癌中的研究进展作一综述。     

FASAY技术在肝癌p53基因功能突变检测中的应用

酵母中分离的等位基因功能分析技术(functional analysis of separated alleles in yeast,FASAY)是一种检测基因结构与功能关系的有效方法.利用FASAY技术结合DNA测序对28例临床原发性肝细胞癌手术样本中的p53基因结构突变与P53蛋白的功能进行了检测.结果发现在这些肝癌组织样本中,FASAY检测的阳性结果为15例,p53基因突变率为53.6%.cDNA测序的结果表明15例FASAY阳性样本均发生了p53基因突变,而13例FASAY阴性样本中未检测到基因突变.在15例p53基因突变肝癌样本中,有8例249位密码子突变,其中包括一例首次报道的249Thr双点突变(GC746.GC747→CG746.TA747),其余均为249Ser突变.研究结果表明,FASAY是一种灵敏的检测HCC中的p53基因结构与功能突变的技术,它可推广应用于肝癌临床样本的研究.     

人类P53下游基因一致性序列研究

人类P53蛋白是一种通用转录因子，通过调控一系列下游基因的转录来影响许多细胞功能。p53下游基因含有P53蛋白结合序列，收集已报道的63条人类P53蛋白结合序列并与E1-Deiry等定义的一致性序列进行比较，发现这些P53蛋白结合序列与一致性序列特征并不严格一致，对这些偏差规律的分析有利于建立p53下游基因预测模型，进而利用计算机方法预测p53下游基因，研究其基因互作网络。     

携带p53基因重组腺病毒载体的构建

将pCMVp53重组转移载体经BamHI和NheI酶切,得到p53基因cDNA,然后将cDNA片段克隆到转移载体pCMV5GFP,使其受CMV5启动子的调控,获得pCMV5p53重组转移载体.用该线状重组转移载体与腺病毒右臂DNA经磷酸钙共转染293细胞获得重组腺病毒,经酶联免疫吸附法(ELISA)测定p53蛋白含量,证明外源p53基因在含重组腺病毒的293细胞中得到表达.     

肿瘤抑制基因p53的研究进展

综述了p53基因的特性、认识阶段、作用机理主其在癌症研究中的进展。     

High frequency of p53 intronic point mutations in laryngeal squamous cell carcinoma

Intronic point mutations are rare and totally unknown for human laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC). To explore the relationship of p53 gene intronic mutation to the development of human LSCC, DNA was extracted from both tumor tissues and matched normal tissues of 55 patients with LSCC in northeast of China. Polymerase chain reaction amplification-single strand conformational polymorphism (PCR-SSCP) combined with silver staining and DNA direct sequencing were used to detect mutations in exons 7～8 (p53E7 and p53E8) and introns 7～8 (p53I7 and p53I8) of p53 gene. The p53E7 mutation was detected in 17 out of 55 patients, and the p53I7 mutation in 21 patients. No mutation was found at p53E8 or p53I8 site. The difference between tumor group and paired normal group on the rates of both p53E7 and p53I7 mutations was statistically significant. The rate of p53I7 mutations in tumor tissue was higher than that of normal tissue, and so was that of p53E7. Sequence analysis revealed that most p53I7 mutations were at the nucleotides in the branch point sequence or the polypyrimidine tract in the 3′-splice acceptor site of the intron 7. The high incidence of p53 gene intronic mutation in LSCC indicates that genetic changes within the noncoding region of the p53 gene may serve as an alternative mechanism of activating the pathogenesis of human laryngeal squamous cell carcinoma. Mutations in the noncoding region of this gene should be further studied.     

GCK2软件在p53基因克隆过程中的应用

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因,通过克隆p53基因对其表达调控进行研究。利用 分子生物学软件GCK2.0对整个克隆过程进行分析,制定克隆策略,通过测序鉴定结果,得到了含目的基因 p53cDNA全序列的pTRE-p53重组质粒,通过GCK2.0分析,减少了基因克隆的盲目性,提高了工作效率。     

P27蛋白在头颈部鳞癌中的表达及临床意义

目的:探讨P27蛋白表达与头颈部鳞癌的关系.方法:应用SP免疫组化方法对52例头颈部鳞癌和20例声带息肉组织进行检测.结果:P27蛋白在声带息肉组织的表达阳性率为100%(20/20),在头颈部鳞癌组织中阳性率为67.3%(35/52),二者差异有显著性(P＜0.05).P27蛋白表达与头颈部鳞癌患者的年龄无明显相关,而与组织分化程度显著相关,高分化、中分化头颈部鳞癌P27蛋白表达阳性率明显比低分化高(P＜0.01).结论:P27蛋白在头颈部鳞癌的发生发展中起一定作用,并可作为判断头颈部鳞癌恶性度的重要指标.     

胃癌中p53基因失活及其蛋白产物的免疫组化分析

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂我及免疫组化等方法同步研究２５例胃癌标本的ｐ５３基因突变，杂合性丢失及蛋白持表达，在２２例胃癌中同时获得有关ｐ５３基因突变和杂合性丢失的检测结果，被检出ｐ５３基因突变的５例胃癌中，２例伴有杂合性丢失，３例仅有ｐ５３基因突变。     

32例肿瘤组织中p53基因突变的PCR-SSCP、银染色检测

目的　检测肿瘤组织中 p5 3基因的突变率 ,探索其在肿瘤发展过程中的作用 .建立PCR SSCP检测 p5 3突变的常规方法 .方法　检测 32例癌组织和癌旁组织 .用盐沉淀制备样品DNA ,以p5 3基因exon7设计引物 ,用PCR SSCP结合银染色显示结果 .结果　 32例肿瘤标本检出阳性 9例 ,阳性率 2 8.1% .4例癌组织和癌旁组织均为阳性 .其中 2 2例胃癌 ,检出 4例阳性 (占 18.2 % ) ,双阳性者 2例 .结论　p5 3基因突变在肿瘤中具有普遍性 ,癌组织和癌旁组织双阳性者 ,与肿瘤的扩散有关 .该检测方法简便易行 ,有助于对 p5 3基因突变的扫描检测 .     

子宫颈鳞状上皮不典型增生、子宫颈鳞状上皮癌与子宫颈正常上皮细胞超微结构的比较研究

目的：研究了宫颈鳞状上皮不典型增生及子宫鳞状上皮癌超微结构的改变,证实不典型增生确为癌前病变。方法：选取因良性疾病子宫切除患者为空白对照组,选取活检标本经病理诊断为宫颈鳞状上皮不典型增生为实验1组,子宫颈鳞状上皮癌为实验2组,经固定包埋后制成超薄切片,电镜下进行对照观察其超微结构的改变。结论：子宫颈鳞状上皮不典型增生实质上是癌前病变。     

p53基因在小鼠胚胎发育过程中的表达

以E9日龄至E14日龄昆明种正常小鼠胚胎为材料,利用质粒扩增的、地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA-mRNA 分子原位杂交,研究了p53基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.结果表明, p53基因不参与E9和E10日胚胎发育中的器官原基形成,参与器官的进一步分化成熟过程.这些器官主要有眼、脑、心、肺、脊柱和面颌骨,肝组织的发育与其无关; p53基因一方面参与胚胎发育中的细胞周期调控,另一方面也参与了某些与细胞周期无关的过程;不同的器官有不同的细胞周期调控机制.