Wnt/Frizzled信号传导通路在肾癌细胞系的表达

对Ｗｎｔ５Ａ,Ｗｎｔ５Ａ受体Ｆｒｉｚｚｌｅｄ５（ｈＦｚ５）及其信号传导系统下游成分－致癌性β－连环蛋白（β－ｃａｔｅｎｉｎ）在肾癌细胞系ＧＲＣ－１中表达的变化进行了观察,并定量ＲＴ－ＰＣＲ结果表明ＧＲＣ－１细胞系中Ｗｎｔ５Ａ和ｈＦｚ５的ｍＲＮＡ水平明显高于正常肾细胞系,这一发现被原位杂交结果证实,进上步的研究发现β－连环蛋白的含量明显高于正常肾小管细胞（Ｐ〈０．０１）。应用持异性免疫细胞化学和ＳＳ     

PKCα反义RNA对乳腺癌细胞增殖及cyclinD1和CDK4表达的影响

ＰＫＣ,ｃｙｃｌｉｎ和ＣＤＫ基因直接参于调控细胞的增殖与分化,因此它们在细胞癌变中的作用已成为重要的研究课题。利用反义ＲＮＡ技术抑制ＰＫＣａ基因的表达,然后观察分析了乳腺癌细胞增殖的变化以及对ｃｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ４基因表达的影响。     

去甲肾上腺素对不同初始表达水平α1B-肾上腺素受体表达的调节

选用α１Ｂ-肾上腺素受体（α１Ｂ－ＡＲ）密度分别为（６３３６±９１３）和（７７３±１６４）ｆｍｏｌ·ｍｇ－１的两株克隆ＨＥＫ２９３细胞，分别用高表达和低表达α１Ｂ-ＡＲ表示，比较去甲肾上腺素（ＮＥ）持续作用下不同初始表达水平的α１Ｂ－ＡＲ发生密度改变的差别．结果显示： １０μｍｏｌ·Ｌ－１ＮＥ持续作用４８ｈ可使高表达以α１Ｂ－ＡＲ的密度发生下调，却可使低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度发生上调．蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ＲＯ－３１－８２２０或Ｃａｌｐｈｏｓｔｉｎ　Ｃ可消除ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，但对低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度上调无影响．ＰＫＣ激动剂ＰＭＡ不仅可模拟ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，而且使低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度也发生下调．肌浆网／内质网钙泵抑制剂ＣＰＡ和内钙螯合剂ＢＡＰＴＡ－ＡＭ不影响ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，但可部分抑制低表达α１Ｂ－ＡＲ的上调．以上结果提示，ＮＥ持续作用可对初始表达水平不同的α１Ｂ－ＡＲ密度产生不同方向的调节作用，作用机制亦不尽相同．     

P15INK4b/MTS2对人肝癌细胞增殖的影响及其机理的初步分析

利用自行构建的稳定高表达Ｐ１５ＩＮＫ４Ｂ的人肝癌细胞,研究了抑癌基因Ｐ１５在细胞增殖中的作用．首先将抑癌基因 Ｐ１５的 ｃＤＮＡ构建到高效真核表达的质粒载体 ｐＸＪ４１－ｎｅｏ中的 ＥｃｏＲＩ／ＸｈｏＩ位点,构建成 Ｐ１５真核表达质粒 ｐＸＪＰ１５．通过脂质体法将 ｐＸＪＰ１５质粒转染人肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１,进一步用 Ｇ－４１８筛选,获得了稳定高表达Ｐ１５的人肝癌细胞模型ＳＨＴ及相应的表达空载体的对照细胞模型ＳＶＸＪ．通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ,Ｗｅｓｔｅｒｎ分子杂交分析,表明ＳＨＴ细胞中Ｐ１５基因表达和蛋白水平都明显高于对照组细胞,证实成功地建立了Ｐ１５高表达的人肝癌细胞模型,与对照组相比,Ｐ１５高表达的ＳＨＴ１细胞的增殖受到抑制,流式细胞光度术和ＭＩ值测定表明Ｐ１５阻抑细胞由Ｇ１期向Ｓ期和由Ｇ２期向Ｍ期的转换．Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析结果表明,癌基因ｃ－ｍｙｃ,ｃ－ｆｏｓ的蛋白水平表达下降可能是Ｐ１５抑制细胞增殖的分子机理之一。     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的仰制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子（ＣⅡＴＡ）对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）Ⅱ类分子表达的影响,用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到Ｃ Ⅱ ＴＡ基因ｃＤＮＡ ５＇端片段,构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体 ｐｃＤＮＡ－Ⅱ,基因转移 ＨＬＡ Ⅱ类分子诱导型表达的 ＨｅＬａ细胞．经 ＩＦＮ－γ诱导,发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ,ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降,而 ＨＬＡⅠ类分子的表达不受影响．实验证明 ＣⅡ ＴＡ反义 ＲＮＡ对 ＨＬＡ Ⅱ类分子表达具有显著的抑制作用,为进一步开展低免疫原性的细胞移植提供了依据．     

VK3诱导的植物细胞凋亡及其机理

ＶＫ３可诱导烟草细胞的凋亡,表现为：染化体凝集,凋亡小体形成,ＤＮＡ末端断裂、降解形成梯状电泳,此过程伴随特异核酸酶的激活,其活性依赖于Ｃａ＾２＋,Ｍｇ＾２＋,可被Ｚｎ＾２＋和ＥＤＴＡ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ）抑制。ＤＮＡ降解可被ＤＥＶＤ（Ａｃ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－ａｌｄｅｈｙｄｅ）抑制。核纤层蛋白降解为３５ｋｕ片段,ＤＥＶＤ,ＰＭＳＦ（Ｐｈｅｎｙｌｍｅｔ     

9,10-二氰基蒽/苄基紫精/二异丙基胺体系光解反应机理的研究

利用电子自旋共振（ＥＳＲ）技术研究９,１０－二氰基蒽（ＤＣＡ）／苄基紫精（ＢＶ）／二异丙基胺（ＤＩＰＡ）体系的光诱导电子转移反应。自由能变化,荧光猝灭以及ＥＳＲ实验结果都支持电子转移的反应机理。随后＾１ＤＣＡ与反应底物ＤＩＰＡ之间发生电子转移生成活性中间体ＤＣＡ＾－和ＤＩＰＡ＾＋,当ＤＣＡ＾－反应中遇到ＢＶ时,传递一个电子给它形成ＢＶ＾＋,在整个反应过程中,ＤＣＡ起了传递电子的作用。     

维甲酸对人腹主动脉平滑肌细胞增殖的影响

通过免疫组织化学和电子显微镜的方法鉴定了原代培养的人腹主动脉平滑肌细胞且研究全反式维甲酸对其增殖的影响,发现ａｔＲＡ使ＳＭＣ的增殖速度变慢,经ａｔＲＡ处理的细胞中ｃｙｃｌｉｎＤ１,ＣＤＫ４的表达分别降低了３９％和３８％,ｃ－ｍｙｃ基因的表达的平降低了４３．６％,而平滑肌牧场划的ａ－ａｃｔｉｎ的表达不受影响。说明ａｔＲＡ可能通过降低细胞中ｃ－ｍｙｃ,ＣＤＫ４,ｃｙｃｌｉｎＤ１的基因表达水平而抑制ＳＭ     

N-Cadherin/Catenins/Actin骨架在人正常肺细胞和肺癌细胞表达的研究

比较了人正常肺细胞与肺癌细胞Ｃａｄｈｅｒｉｎ／Ｃａｔｅｎｉｎｓ／Ａｃｔｉｎ蛋白质表达水平和定位的特点。结果显示正常肺细胞的Ｎ－Ｃａｄｈｅｒｉｎ和Ｃａｔｅｎｉｎｓ（α,β）有高表达,分布在细胞膜的ＡＪ连接及其膜内面粘着斑与胞质内组装完好的Ａｃｔｉｎ微丝应力纤维末端相连,表明膜ＡＪ连接Ｎ－Ｃａｄｈｅｒｉｎ／Ｃａｔｅｎｉｎｓ／Ａｃｔｉｎ分子复合体存在。     

异三聚体G蛋白在细胞外钙调素调控rbcS基因表达中的作用

以转基因烟草悬浮培养细胞为材料,对异三聚体Ｇ蛋白在胞外钙调素（ＣａＭ）促进ｒｂｃＳ基因表达跨膜信号转导中的作用进行了研究．细菌毒素实验表明,Ｇ蛋白激活剂ＣＴＸ可以促进转基因烟草ｒｂｃＳ基因表达,而其抑制剂ＰＴＸ则抑制ｒｂｃＳ基因表达;同时证实ＣＴＸ可以恢复被ＣａＭ抗血清抑制的ｒｂｃＳ基因表达,而ＰＴＸ可以抑制外源ＣａＭ促进的ｒｂｃＳ基因表达,通过提纯包埋有ＧＴＰａｓｅ活性测定荧光底物的正向型质膜囊     

增强p21waf1表达对乳腺癌细胞增殖及G1期cyclin和CDK表达的影响

ｐ２１＾ｗａｆｌ是细胞周期调控中一种重要的负调节因子,它在抑制癌细胞生长方面的作用以及它的表达水平对Ｇ１期ｃｙｃｌｉｎ和ｃｙｃｌｉｎ依赖性激酶（ＣＤＫ）表达的影响是一个十分有意义的课题,通过将ｐ２１＾ｗａｆｌ高表达的质粒转入乳腺癌细胞中,观察测定了ｐ２１＾ｗａｆｌ表达水平提高后,细胞在生长速率和致瘤性方面的变化,同时分析了ｐ２１＾ｗａｆｌ与ｃｙｃｌｉｎＤ１,ＣＤＫ４,ｃｙｃｌｉｎＥ和ＣＤＫ２在基因     

血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应

ＰＦ４的Ｃ－末端１３肽和ＴＳＰ１的４２９～４５９片段３１肽通过Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ肽桥设计为融合蛋白ＴＳＦ．采用ｐＧＥＸ－２Ｔ载体在 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中获得了 ＴＳＦ蛋白的高效表达．采用 ＭＴＴ方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验,测定了ＴＳＦ及其相关物ＧＳＴ－ＴＳＦ,ＰＦ４（５８－７０）,ＴＳＰ１（４２９～４５９）等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应．结果显示ＴＳＦ特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长,并有明显的剂量依赖关系;非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移;显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成;上述抑制活性ＴＳＦ＞＞ＧＳＴ－ＴＳＦ＞ＰＦ４（５８～７０）＞ＴＳＰ１（４２９～４５９）．ＴＳＦ显著抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的生长,１．０μｍｏｌ／ｋｇ·ｄ的ＴＳＦ对Ｌｅｗｉｓ肺癌的抑瘤率达到６８．７５％．结果说明ＴＳＦ的重组设计是成功的,ＴＳＦ为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子．     

稻瘟病病原物诱导启动子的构建及表达

利用ＰＣＲ技术从小麦和马铃薯中分别扩增并克隆了病原诱导性谷胱甘肽－Ｓ－转移酶基因ＧｓｔＡｌ和Ｇｓｔｌ启动子片段,将它们分别与水稻肌动蛋白基因（Ａｃｔｌ）核心启动子序列、５’端非翻译前导序列以及ＧＵＳ基因融合构建出植物载体ｐＷＭＩＧ－５０和ｐＰＭＩＧ－５０,然后转化水稻,并对嵌合启动子的诱导活性进行了分析。结果表明：（１）在转基因水稻细胞中嵌合启动子可受稻瘟病病原物的诱导;（２）水稻Ａｃｔｌ第一内含     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的抑制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子对人类白细胞抗原Ⅱ类分子表达的影响,用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到ＣⅡＴＡ基因ｃＤＮＡ５’端片段,构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体ｐｃＤＮＡ－Ⅱ,基因转移ＨＬＡⅡ类分子诱导型表达的ＨｅＬａ细胞,ＩＦＮ－γ诱导,发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ,ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降,而ＨＬＡ Ｉ类分子的表达不受影响。实验     

含RGD环六肽与整合素蛋白α_(Ⅱb)β_3的结合反应

ＲＧＤ序列普遍存在于细胞外基质蛋白中,并能为许多整合素蛋白所识别．利用 ＥＬＩＳＡ,ＳＰＲ等技术,对表面固定的人工合成生物素－含 ＲＧＤ环六肽［ｃｙｃｌｏ（－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－）］与人血小板整合素蛋白α_（Ⅱｂ）β_３的结合能力进行了检测结果表明,含ＲＧＤ环六肽与生物素基团之间的间臂长度在 １．４８～２．２ ｎｍ时, ＲＧＤ序列才能有效进入α_（Ⅱｂ）β_３以头部的反应中心并发生结合反应;反应的平衡解离常数为 １．１μｍｏｌ／Ｌ．为在固体表面研究整合素蛋白介导的细胞吸附过程提供了一个理想的模型系统．     

genistein抑制人TNF-α诱导的猪内皮细胞对人单核细胞和自然杀伤细胞的黏附

研究了蛋白质酷氨酸磷酸化在ｈＴＮＦ－α诱导猪主动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）黏附分子Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ）和血管细胞黏附分子－１（ＶＣＡＭ－１）表达以及在增强人外周血单核细胞（ＰＢＭｏ）和自然杀伤细胞（ＰＢＮＫ）黏附中的作用,以选择性的蛋白质酷氨酸激酶（ＰＴＫｓ）抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ预处理ＰＡＥＣ,剂量依赖性也抑制了ｈＴＮＦ－α增强的ＰＡＥＣ对ＰＢＭｏ和ＰＢＮＫ的黏附。这种抑制作用发生在     

转基因马铃薯中病原诱导GO基因的表达及其对晚疫病的抗性

利用ＰＣＲ技术从黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）中扩增并克隆了葡萄糖氧化酶（ｇｌｕｃｏｓｅ ｏｘｉｄａｓｅ,简称ＧＯ）基因,并将马铃薯病原诱导型启动子（Ｐｒｐ１－１基因启动子）与其融合构建了植物表达载体ｐＣＡＭＧＯ。经农杆菌介导转化获得了转基因植株,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示葡萄糖氧化酶基因整合进马铃薯基因组。该基因的表达及所引起的Ｈ２Ｏ２的生成由淀粉－ＫＩ的显色反应得到证实。用马铃薯晚     

纤溶酶原激活因子和抑制因子在生殖中的作用

综述了由纤溶酶原激活因子（ＰＡ）和抑制因子（ＰＡＩ）所调控的局部定向纤蛋白水解在生殖作用研究中的最新进展。组织型（ｔ）ＰＡ（ｔＰＡ）和Ｉ型ＰＡＩ（ＰＡＩ－１）在卵巢不同细胞中的协同表达参与排卵和黄体（ＣＬ）萎缩调控过程,在早期黄体组织中尿激酶型（ｕ）ＰＡ（ｕＰＡ）和ＰＡＩ－１活性明显增高,ｕＰＡ和ＰＡＩ－１的协同表达可能与黄体形成过程中组织重建和血管发生密切相关。实验证明,ＰＡ系统在精子发生和成熟     

LeY对小鼠胚泡和子宫上皮细胞分泌MMPs的影响

以单克隆抗体ＡＨ６［特异结合Ｌｅ＾Ｙ寡糖,Ｆｕｃ α１－２Ｇａｌβ１－４（Ｆｕｃα１－３）ＧｌｃＮＡｃ－］为工具,采用明胶酶谱法,研究细胞表面的Ｌｅ＾Ｙ寡糖抗原与羊床期间小鼠胚泡和单层子宫上皮细胞分泌基质金属蛋白酶（Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ,ＭＭＰｓ）之间的关系,从而进一步确定Ｌｅ＾Ｙ寡糖抗原在着床过程中的具体作用环节。结果显示,不论子宫上皮细胞表面还是胚胎滋养层细胞表面的     

含RGD环六肽与整合素蛋白αⅢbβ3的结合反应

ＲＧＤ序列普遍存在于细胞外基质蛋白中,并能为许多整合素蛋白所识别。利用ＥＬＩＳＡ,ＳＰＲ等技术,对表面固定的人工合成生物素－含ＲＧＤ环六肽〔ｃｙｃｌｏ－（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－）〕与人血小板整合素蛋白αⅡｂβ３的结合能力进行了检测。结果表明,含ＲＧＤ环六肽与生物素基团之间的间臂长度在１．４８￣２．２ｎｍ时,ＲＧＤ序列才能有效进入αⅡｂβ３头部的反应中心并发生结合反应;