北京鸭肝脏线粒体DNA的制备及性质

本文报导了一个从北京鸭肝脏大规模制备线粒体DNA(mtDNA)的方便的方法。从线粒体用0.8％SDS提取粗制的DNA后,用1M NaClO_4、氯仿脱蛋白,用2M NaCl除去大分子RNA,最后用Sepharose 4B柱凝胶过滤纯化mtDNA。对制得的产品用紫外吸收光谱、凝胶电泳、化学分析和电镜等方法进行了鉴定。鸭肝mtDNA为环形分子。对63个开环型mtDNA分子用电镜测量了长度,其平均周长为5.2±0.20微米。用质粒pBR322 DNA作为内部标准,测得37个mtDNA分子的平均分子量为16,660±350碱基对或(10.7±0.22)×10~6道尔顿。     

黑斑蛙线粒体DNA提取与纯化的研究

用碱变性法和核酸酶消化法从黑斑蛙的肝脏和肌肉中提取和纯化线粒体DNA,经琼脂糖凝胶电泳及OD值测定显示,所得黑斑蛙线粒体DNA的结构完整,并避免了核DNA、线粒体RNA、蛋白质、有机溶剂等的污染.结果表明:黑斑蛙mtDNA的分子量大小约为17.167kb.其得率和纯度均能满足mtDNA的各种分析要求.     

质粒pcDNA3.1-IL-24的制备和纯化

探索基因治疗用质粒pcDNA3.1-IL-24的规模化制备和纯化工艺。碱性裂解提取质粒后,以异丙醇和LiCl沉淀法去除大分子RNA。然后,使用DEAE Sepharose FF离子交换层析去除染色体DNA、小分子RNA、蛋白质等杂质。经本工艺纯化的质粒pcDNA3.1-IL-24浓度为727μg/mL,纯度为1.87,蛋白质含量为0.007μg/mL质粒DNA,未检测到RNA、抗生素残留。此工艺避免使用动物源性酶类及有毒试剂,有效去除质粒DNA制备过程中产生的杂质,可实现药剂水平质粒DNA的规模制备。     

从微量血中快速制备线粒体DNA片段

目的　建立并鉴定用于从微量血中快速制备线粒体DNA片段的技术 .方法　采用微量血样品 ,改进提取线粒体DNA的方法 ;以不同的方法提取的血DNA为模板 ,同时扩增nDNA上的基因片段和mtDNA上的基因片段 ,PCR相对定量分析比较各种方法提取的mtDNA片段的纯度 ;结果　用华美公司生产的ReadyPCR(tm)微量全血DNA纯化系统和作者的方法都得到了mtDNA ,而用作者的方法获得的mtDNA的纯度较高 ;结论　由于线粒体DNA与核DNA存在有同源片段 ,ReadyPCR(tm)微量全血DNA纯化系统和常规酶解法提取DNA不适合用于对mtDNA的鉴定 ,作者的方法简便快捷地排除了核DNA的污染 ,非常适合于对mtDNA进行PCR分析 .     

酵母菌呼吸缺陷型和野生型线粒体DNA比较

以酒精酵母(S.cerevisiae)IFFI1300为材料,建立了以“蜗牛酶+机械振荡”复合处理破碎细胞的方法;先提取并纯化线粒体,后从线粒体中提取线粒体DNA的方法,得到了紫外吸收A260/A280为1.823,琼脂糖电泳为一条带且分子量大于λDNA(49kb)的线粒体DNA,与EB诱发的呼吸缺陷1300—1、1300—5的线粒体DNA比较,说明rho~+与rho~-之间、不同的rho~-之间其线粒体DNA的琼脂糖电泳、浮力密度、变性曲线(Tm值)的性质均不相同。由此推测:EB诱发的呼吸缺陷菌株的线粒体DNA是由一系列不同分子量的分子组成,群体呈多态性。     

以病毒的230 kb DNA分子为模板的DNA序列测定

目的：为确认Tn3-gpt已插入小鼠巨细胞病毒(mouse cytomegalovirus,MCMV)基因组的特定位置,改进大分子病毒DNA的测序方法,建立以230kb DNA为模板直接进行DNA序列测定的方法。方法：待测MCMV的Tr3-gpt插入突变株感染NIH3T3细胞后,从培养液中制备病毒颗粒并从中纯化得到基因组DNA,以此DNA为模板,合成的寡核苷酸为引物,用热循环方法按Promega公司的DNA Cycle Sequencing System试剂盒的方法进行测序。结果：获得纯度较高可直接作为模板进行测序的：DNA,测序所得放射自显影图片条带清晰明亮,间隔正常,分辨率较高,可顺利读出插入位点的MCMV的DNA序列,证实Tn3-gpt插入在特定的位置。结论：长达230kb的大分子病毒DNA可直接作为模板,用热循环测序方法进行测序,无需切割成小片段后才进行测序。     

苜蓿转化细胞系核酸和蛋白质合成的研究

以苜蓿转化细胞系和对照细胞系为材料，利用同位素标志方法研究了3种大分子物质－－DNA、RNA和蛋白质的合成动态。结果表明，与对照细胞系相比，转化细胞系的生长速度明显加快，DNA、RNA和蛋白质的合成旺盛，合成速度显提高。同时，转化细胞系DNA、RNA和蛋白质出现最大合成速度的时间均相应地延迟。     

植物细胞质雄性不育分子机理研究

本文综述了植物细胞质雄性不育分子机理的研究进展。主要介绍了植物线粒体DNA、线粒体RNA和线粒体蛋白质与细胞质雄性不育的关系,同时对植物叶绿体及核质互作与细胞质雄性不育的关系进行了综述,并对今后的研究前景进行了展望。     

油菜蜀杂1号F_1(8208×S45A)及其亲本的核酸比较

用一种简便的方法,提取并纯化杂交油菜蜀杂1号F_1(8208×S45A)及其亲本的核酸,并比较它们的核酸含量及DNA的(G+C)％.结果表明,F_1(8208×S45A)的杂种优势与DNA和RNA的含量的增加有关,也与DNA的碱基组成变化有关.     

生物大分子纯化系统的应用与管理

生物大分子纯化系统是一类利用色谱技术,对各种生物大分子进行分离纯化的自动化运行系统。该文阐述了凝胶色谱柱的种类、生物大分子的分离纯化方法、纯化工艺中不同色谱技术的衔接及如何依据蛋白质等生物大分子的理化性质合理设计色谱方案、生物大分子纯化系统的维护与保养,并简要概述了生物大分子纯化系统在生命科学研究中的应用。     

小鼠线粒体DNA中一个新的R-loop结构的发现

哺乳动物线粒体DNA的D-loop区是其复制和转录的起始区域,其中D-loop重链RNA(DH-RNA)与复制和转录功能密切相关.但轻链RNA(DL-RNA)被认为没有重要的功能,因此几乎没有有关D-loop区的轻链RNA的研究.文中研究发现一个DL-RNA存在于小鼠线粒体D-loop区.研究表明这个DL-RNA跨越了几乎整个D-loop区,并且能够耐受RNase A和RNase T1酶的切割,但对RNase H酶敏感.在这种RNA存在的情况下,D-loop的DNA不能被HaeⅢ酶切割.这些结果意味着新发现的DL-RNA能同D-loop区的DNA形成三链结构,并且能使其对应区域的DNA不被限制性内切酶消化.在以细胞色素b基因为对照的实验中没有发现类似的结构,证明这一结构不是RNA转录过程中形成的临时结构.考虑到D-loop区是线粒体DNA复制和转录的重要调控区,这个新奇的三链RNA-DNA复合物可能在线粒体DNA复制和转录中扮演了重要角色.     

黑麂粪便DNA的简易提取方法

收集九龙山自然保护区野外自然条件下的黑麂粪便样品,用无水乙醇保存于-70℃冰箱,经十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）裂解液温浴粪便、酚／氯仿抽提及聚合酶链反应（PCR）纯化试剂盒纯化等步骤提取黑麂粪便DNA,并扩增线粒体DNA细胞色素b基因和2个微卫星位点进行检测;同时提取黑麂肌肉和皮毛样品的DNA作为对照．结果显示,该方法可以从粪便中提取到高质量的黑麂DNA,并可进行有效扩增,为黑麂及其他濒危鹿科动物的非损伤取样提供了一种简易方法．     

DNA分子之神奇

如果我告诉你,DNA也许并不是生命起源仞始时必需的大分子（基本上包括核苷酸、蛋白质和多糖）“建筑材料”,你相信吗？如果我告诉你,DNA是被它的“兄弟”——大分子RNA（组成RNA和DNA的基本单元存分子结构上只差一个氧原于）“挟持”到生命的“最小独立复制单元”——细胞里来的,你相信吗？     

内蒙古荒漠草原土壤微生物DNA提取方法的研究

利用三种提取方法从内蒙古荒漠草原土壤样品中提取了土壤微生物DNA,得到的DNA片段长度在23 kb以上,提取效果较好无降解.采用试剂盒直接纯化、凝胶回收试剂盒纯化、玻璃珠DNA回收试剂盒SK1111 DNA纯化这三种方法对粗提液进行纯化,结果显示:凝胶回收试剂盒纯化后DNA纯度最高,试剂盒直接纯化可得到较纯的DNA,而玻璃珠DNA回收试剂盒SK1111 DNA纯化的效果不佳,不宜进行后续的PCR扩增.以纯化的土壤微生物DNA为模板扩增了细菌16SrDNA,扩增产物分子量为1.5kb左右.通过比较研究提出了一种适合于从荒漠草原土壤中进行微生物DNA提取、纯化及PCR扩增的有效方法.     

一种新细胞因子基因真核表达载体的构建和鉴定

采用PCR方法,以人胎盘cDNA文库为模板,扩增出人B淋巴细胞刺激因子（hBLys）,经克隆测序及纯化后,再以此PCR产物为模板,用Nest-PCR方法进一步扩增得到B淋巴细胞刺激因子的胞膜外功能区域（hsBLyS）的DNA片段,纯化、克隆测定鉴定后,扩增并纯化粒,经酶切、纯化后克隆到真核表达质粒pcDNA3.1（＋）中,构成真核表达载体pcDNA3．1（＋）／hsBLyS。结果表明：用此方法制备得到的hsBLyS的DNA片段经测序鉴定与文献报道相符,构建的真核表达载体经鉴定也达到了预计的结果。     

好好芭叶片RNA提取方法和cDNA干旱消减文库的构建

介绍了从好好芭成熟叶片中提取总RNA的方法;用含有SDS的裂解液裂解细胞,用DNase除去可能出现的DNA干扰,再经植物提取试剂盒纯化后,获得了高质量的完整RNA,可用于基因编码序列的克隆和基因表达的mRNA分析等精细研究,并进一步构建了好好芭干旱消减文库.     

RNA二级结构预测的计算语言学方法

RNA是一类重要的生物大分子,计算语言学方法把RNA序列看成是具有一定语法规则的语句,通过这些语法规划来分析RNA序列中存在的碱基配对关系,也就是它的语义,从而得到该序列的二级结构,本文阐述了该类方法预测RNA二级结构的原理及实现。     

单只大型溞DNA的提取及其COI基因部分序列测定分析

利用基因组DNA纯化试剂盒稳定、快捷地提取单只大型溞（Daphnia magna）基因组DNA.以提取出的DNA为模板,利用线粒体DNA细胞色素氧化酶I亚基基因（COI）特异性引物,通过降落PCR技术扩增大型溞COI部分基因的序列.序列分析表明,此基因确为大型溞COI部分基因片段,从而证明本研究所提取的线粒体DNA能够为进一步开展大型溞的种群遗传学研究、物种间的亲缘关系和系统进化及种质资源管理与保护等提供物质基础.     

Klebsiella aerogenes染色体DNA的分离和纯化

<正> 基因工程是在分子水平上进行人工拼接,获得具有生物活性的杂种DNA分子,然后通过转化或转染,使其在有机体或细胞中得到表达。在基因工程操作技术中,由于经常需要将染色体上的某一目的基因重组到载体DNA上,因此制备纯净的染色体DNA是十分必要的。迄今为止,从动、植物或微生物材料中分离、纯化染色体DNA的方法已有不少报导。Marmur的方法至今仍被广泛地应用于微生物染色体DNA的制备。这个方法的基本要点是:(1)用溶菌酶和十二烷基硫酸钠破坏细菌的细胞壁,使细胞内容物释出。(2)在高氯酸盐存在时用氯仿-异戊醇进行抽提,除去蛋白质。(3)用核糖核酸酶除去与染色体DNA混杂在一起的RNA。(4)用乙醇或异丙醇改变溶的极性,使染色体DNA呈纤维状析出,得以与细胞中其它成分分开。我们以细菌K.aerogenes为材料,按照Koh改进的Marmur法,获得了电泳纯的染色体DNA,     

山西运城盐湖卤虫核酸的初步研究

本文对山西运城盐湖卤虫的总 RNA、tRNA 及 rRNA 进行了分离纯化及测定,结果表明运城盐湖卤虫每克干重成虫的总 RNA 为1.94mg,tRNA 为0.25mg,卤虫卵 RNA的(G+C)％为34.6。同时还发现这种卤虫卵与天津卤虫卵的 DNA 的碱基组成可能存在极微小差异。