四环素人工抗原的合成与鉴定

采用碳二亚胺法将四环素半抗原与载体蛋白BSA连接制备人工免疫抗原,并用同样方法将四环素与载体蛋白OVA连接制备人工包被抗原.经紫外扫描分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功,为检测试剂盒的研制奠定了基础.     

甲磺隆人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

为了建立测定磺酰脲除草剂甲磺隆残留的酶联免疫吸附检测方法(ELISA),以邻甲酸甲酯苯磺酰胺与琥珀酸酐反应合成半抗原1[(2甲酸甲酯)苯磺酰]单胺琥珀酸.用活性酯化法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原.通过免疫抗原免疫新西兰大白兔获得甲磺隆的多克隆抗体,抗体效价达800 000.以此抗体建立的间接竞争ELISA法,检测甲磺隆的线性范围在0.7～40 mg/L,最低检测限为0.16 mg/L.与甲磺隆结构相似的磺酰脲类除草剂的交叉反应结果表明,氯嘧磺隆的交叉反应率为38.2%,其他4种除草剂的交叉反应率都小于1%.     

非均相法合成氰酸钾

非均相法是合成氰酸钾的较优方法.通过实验对氰酸钾的液固相反应制备工艺进行研究.以尿素和碳酸钾为原料,利用正交试验,对实验的工艺条件进行优化.以二甲基亚砜为溶剂的正交实验表明：反应温度对氰酸钾产量影响显著,其次为溶剂配比、反应时间、原料配比和搅拌速度.实验结果表明：在实验范围内,氰酸钾合成的最佳工艺条件为在140℃下,原料配比为3.5﹕1,溶剂配比为7﹕1的条件下反应2 h并快速搅拌.     

掺杂锌的二氧化钛与石墨烯复合物的制备及性能研究

对新型的锌掺杂二氧化钛光催化剂的制备进行了探讨,采用制备方法是溶胶凝胶法,通过研究催化剂制备中锌掺杂的比例、与煅烧温度等对降解水体中的盐酸四环素处理效果.通过一系列表征方法对分析复合材料,含氧官能团在水热法处理下被大部分移除.锌掺杂二氧化钛纳米颗粒分散在石墨烯片层表面,二者通过化学键紧密结合.制备此种催化剂的比例是石墨烯氧化物与锌掺杂二氧化钛的质量之比为1∶20,采用140℃的水热温度.制备的新型催化剂材料可以有效处理废水中的盐酸四环素,在今后的污水处理领域大有可为.     

环丙沙星人工完全抗原的制备与鉴定

分别采用碳二亚胺法和氯甲酸异丁酯法制备环丙沙星的牛血清白蛋白与卵清白蛋白载体的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA.人工完全抗原经SDS-PAGE凝胶电泳初步鉴定后,考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量分别为1.24和0.58 mg.mL-1,将偶联抗原稀释至一定浓度,紫外分光光度法测其波形,根据偶联前后波形及吸收峰的变化鉴定偶联物分子量大于载体蛋白,证实CPFX与BSA和OVA偶联成功,根据游离半抗原、载体蛋白和完全抗原偶联物各自的紫外吸光度、摩尔吸光系数,初步定量计算出偶联结合比分别为7.2∶1和6.4∶1.质谱法测定CPFX-BSA和CPFX-OVA分子量分别为6.895×104和4.586×104,推算偶联比分别为5.6∶1和4.2∶1,进一步证实了偶联比和人工抗原制备成功.制备的人工完全抗原CPFX-BSA和CPFX-OVA可分别作为免疫抗原和包被抗原,为环丙沙星单克隆抗体的制备以及环丙沙星快速检测试剂盒的研制奠定基础.     

鸡蛋膜负载的银颗粒对盐酸四环素的降解研究

利用鸡蛋膜和银氨溶液制备鸡蛋膜负载的银颗粒(Ag/ESM),并对Ag/ESM的制备条件进行了优化.根据生物模板易于操作的优点和银颗粒催化分解过氧化氢产生活性氧的能力,将Ag/ESM用于降解盐酸四环素,并对其降解盐酸四环素的条件和效果进行了研究.结果表明,利用鸡蛋膜和银氨溶液可成功制备出Ag/ESM,且制备流程简单.Ag/ESM的最佳制备条件为:银氨溶液浓度13.5 mmol·L-1、反应温度50℃、反应时间3 h.当Ag/ESM用量为20片,过氧化氢浓度为0.1 mmol·L-1,盐酸四环素的初始质量浓度为50 mg·L-1时,盐酸四环素的降解率最高,为81.92％,说明以Ag/ESM为活性材料,在过氧化氢的辅助下可实现对盐酸四环素的高效降解.此外,Ag/ESM可被简便地从处置液中分离出来,使降解过程更为简便.简单的制备方法和便捷的分离操作使得鸡蛋膜负载的银颗粒成为一种较理想的降解盐酸四环素的活性材料.     

用精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究

目的　探讨精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的可行性 .方法　构建乙肝病毒X基因表达载体 pcDNA3 X ;应用微量注射针将脂质体包裹的 pcDNA3 X表达载体直接注入C5 7BL/ 6N雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,于第一次注射后 6周 ,与雌鼠交配 ,用PCR法和免疫组化法检测仔鼠基因组中的外源DNA和肝组织中表达的 pX蛋白 .结果　共产仔鼠 16只 ,其中 1只为阳性仔鼠 ,阳性率为 6 .2 5 %.结论　初步明用精原干细胞介导法制备X基因转基因小鼠是可行的 .     

新型载盐酸四环素根尖充填材料的制备及其性能

目的:探讨新型载盐酸四环素根尖充填材料(NRFM-THC)制备、理化性能、细胞相容性及其对粪肠球菌的抑制作用.方法:在新型根尖充填材料中添加质量分数为1%盐酸四环素制备NRFM-THC;采用傅立叶红外光谱、X-射线衍射对其表征,并检测其固化时间、抗压强度、抗稀散性和X射线阻射性能;MTT比色法检测其细胞相容性;琼脂糖扩散法及直接接触法检测其对粪肠球菌的抑制作用.结果:NRFM-THC主要成分为羟基磷灰石、羧酸钙盐及氧化锆,固化时间为(11.7±0.6)min,固化1 d及7 d组抗压强度分别为(43.9±4.5)MPa及(69.6±13.5)MPa,X射线阻射值等效于(3.6±0.2)mm纯铝,抗稀散性能良好等;细胞毒性分级为0级或Ⅰ级,符合GB/T 16886.5—2003标准;对粪肠球菌有抑制作用.结论:NRFM-THC具有良好的理化性能、细胞相容性及抑制粪肠球菌性能.     

除虫菊酯人工抗原的合成及鉴定

通过在除虫菊酯6种单体的五元环酮基上引入羧基的方法制备半抗原,再用碳二亚胺法偶联到牛血清白蛋白(BSA)上制得完全抗原.经紫外光谱测定,6种完全抗原的分子偶联比为6:1(除虫菊酯Ⅰ:BSA)、13:1(除虫菊酯Ⅱ:BSA)、9:1(瓜叶菊酯Ⅰ:BSA)、11:1(瓜叶菊酯Ⅱ:BSA)、7:1(茉酮菊酯Ⅰ:BSA)和9:1(茉酮菊酯Ⅱ:BSA).以完全抗原免疫BALB/c小鼠制抗血清,采用间接酶联检测抗体效价均达到105以上,再用饱和硫酸铵沉淀得到除虫菊酯的多克隆抗体.该结果为除虫菊酯的酶联抗体检测及免疫分析技术奠定了基础.     

软骨藻酸多克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测法的建立

软骨藻酸(Domoic Acid, DA)是记忆缺失性贝毒(Amnesic Shellfish Poisoning,ASP)的主要成分,能在鱼类、贝类富集,通过食物链的传递作用对人产生毒性作用. DA是小分子半抗原,运用活泼酯法将DA与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)提高偶联效率,通过紫外-可见分光光度法和聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)检测鉴定,成功制备偶联比为44 : 1的完全免疫抗原DA-KLH和偶联比为16 : 1的包被抗原DA-BSA; 用DA-KLH免疫小鼠后获得高达210 000 units/mL效价的抗血清,并通过不断优化间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测DA的条件,确定各项最佳工作质量浓度及条件,最后成功绘制100 ng/mL~10 μg/mL范围内的DA检测标准曲线.通过优化ic-ELISA检测方法成功实现了快速定量检测DA,这对水产品藻毒素检测试剂盒的开发具有指导意义,也为建立赤潮毒素监督体系提供了良好的实验基础.