山茱萸药材中总DNA的提取方法

随着分子生物学技术的发展,如限制性酶切片段长度多态性(RFLP),随机扩增多态性DNA(PAPD),扩增片段长度多态性(AFLP)等;分子标记技术已经用于植物种质资源和系统发育的研究.目前,报道的大多从是植物叶片中提取DNA且方法众多,技术较为成熟,但这些方法多采用幼嫩的植物叶片进行总DNA的提取,而适用于成熟果实或市售干品中药材基因组DNA提取方法比较少.     

龙柚芽变系的RAPD分析鉴定

利用100个10bp的随机引物对龙柚的4个芽变系的基因组DNA进行RAPD扩增分析,探讨芽变系遗传物质的变化．在这100个随机引物中,筛选出能在4个芽变系中扩增出稳定多态性片段的引物11个,一共扩增出了63条片段,其中多态性片段有19个,占30．16％．聚类分析的结果,芽变系2和4的遗传距离最小（0．1001）,相似系数最大（0．9048）．表明了芽变引起的遗传物质的改变能够通过无性繁殖的方式存在,用RAPD的方法来分析不同芽变系的遗传关系是可行的．     

南五味子叶绿体DNA的提取

<正>随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)是在DNA水平上进行遗传标记的常用分析方法之一。在操作过程中,DNA的提取质量是影响实验结果最为关键     

点带石斑鱼遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD标记技术对海南点带石斑鱼养殖群体和野生群体的遗传结构进行了初步研究.从100个随机引物筛选出20个,在养殖群体和野生群体各20尾中分别扩增出183和176条DNA片段,其中多态性片段的比例分别为67.57%和75%,平均杂合度分别为0.498 0和0.531 1,遗传相似率分别为0.816 5和0.794 6,群体间遗传距离为0.329 6.Shannon遗传多样性指数表明,两群体中的遗传变异有40.95%来自群体内,而59.05%来自群体间.野生群体的多态位点比例和杂合度明显高于养殖群体.点带石斑鱼与野生群体相比,养殖群体的杂合度和遗传多样性有所下降,提示在点带石斑鱼的人工繁育过程中应引进标记辅助选择等技术手段.     

几种鹅膏菌菌种分离及其RAPD鉴定

采用ＰＤＭ等三种培养基成功分离８种鹅膏菌,分离鹅膏菌的最佳组织为外（内）菌膜尚未破裂的幼嫩菌褶组织,并利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）对分离菌种进行鉴定,结果表明,分离所得菌丝体ＤＮＡ与该种鹅膏菌子实体ＤＮＡ的ＲＡＰＤ图谱一致,因而从分子水平上说明分离所得菌丝体为该种鹅膏菌菌种,并认为ＲＡＰＤ可作为外生菌根菌菌种分离鉴定的一种非常有效、快速的分子遗传标记。     

花粉管通道法转柱头外露棉DNA及转化体RAPD分析

提取“异9-3”柱头外露棉总基因组DNA，通过花粉管通道法经微量注射导入抗虫棉707．1的胚囊内，D1代田间筛选到柱头外露的转化植株，遗传分析结果表明转化株柱头外露性状由一对隐性基因控制，50个随机引物进行PCR扩增，33个引物扩增出的DNA在供体、受体和转化体之间呈现出多态性，其中引物S462(TCG GCA CGC A)在供体和转化体之间出现相同产物而受体没有出现扩增产物，该引物有可能作为柱头外露系的分子标记．RAPD分析结果表明转化体与受体有较多相同基因位点，而与供体相同基因位点较少，转化体还有供体和受体都不具有的基因位点，这可能是外源DNA导入时引起碱基突变所致。     

红麻微卫星DNA的分离

分别采用RAPD、锚定PCR和磁珠捕获等3种方法富集含微卫星序列的红麻基因组DNA片段,并连接到pMD18-T载体,构建基因组文库.然后以通用引物M13F,M13R和根据微卫星核心序列所设计的引物[VRV(CT)12或VRV(TG)12],用PCR方法直接对文库筛选,并将获得的阳性克隆进行测序.分别从RAPD,锚定PCR和磁珠捕获3种富集方法构建的基因组文库中获得6,23,19个微卫星位点.     

植物原位杂交研究的进展

原位杂交是上世纪60年代建立起来的一种将特定基因或DNA序列直接定位到染色体上的技术.几十年来发展的非常迅速.已有基因组原位杂交(GISH)、多彩荧光原位杂交(FISH)、原位PCR(in situ PCR)、DNA纤维原位杂交(Fi-bre-FISH),应用于遗传学的各个领域,特别是用于外源DNA的鉴定.     

RAPD技术及其在植物种质资源和遗传育种研究中的应用

文章综述了分子标记技术的迅速发展,指出RAPD(random amplification polymorphism DNA)技术已经在植物品种或种质鉴定,分子系统学研究和系谱分析,杂交种子遗传纯度鉴定,遗传多样性分析,体细胞杂种、突变体等的鉴定,连锁图谱的构建(分子作图),种间基因流动分析和外源导入基因追踪,基因标记,育种过程追踪等方面得到了广泛而有效的应用.     

南五味子叶绿体DNA的提取

随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)是在DNA水平上进行遗传标记的常用分析方法之一.在操作过程中,DNA的提取质量是影响实验结果最为关键的因素.本文,笔者在对五味子进行分子生物学研究时发现南五味子叶中多酚、多糖、蛋白质等复杂的次生、初生代谢物质,给叶绿体DNA提取造成很大的影响.     

水稻叶绿体DNA提取和纯化方法优化

改进了水稻叶绿体DNA的提取和纯化方法,获得的高纯度的水稻叶绿体DNA适于PCR扩增等分子操作.本方法要点为:匀浆液2 300 r.min-1离心去核,上清液4 300 r.min-1离心,沉淀用于DNA提取,提取后的叶绿体DNA用RNase和蛋白酶K纯化.     

SDS、CTAB和PVP法提取香蕉基因组 DNA的比较研究

文章报道了采用SDS法、CTAB法和PVP法提取的香蕉基因组DNA片段大小比较一致,都可直接用于RAPD分析,SDs法提取的DNA纯度较高,吸芽基因组DNA提取率略高于嫩叶,对相同done不同单株间基因组DNA的RAPD分析结果并不表现出明显的多态性.     

信阳水牛促生长激素释放激素基因第4外显子的PCR扩增及变异检测

本研究以52头中国信阳水牛血样为材料,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应-单链构象多态性技术(PCR-SSCP),对信阳水牛的生长素释放激素(GHRH)基因中第4外显子的突变情况进行检测。经SSCP检测发现,不同个体的PCR反应产物银染后有两种不同的带型,分别命名为AA型和AB型。针对不同带型所对应的个体PCR产物进行测序,结果表明,在该基因(GI:194719389)的第4外显子70bp处发现A→G突变,A→G导致Thr转化为Ala,在该基因的第4内含子6bp处发现A→C突变。     

DNA计算机

介绍了有关DNA计算的生物操作,并以实例说明了DNA计算比常规计算的优越性。并从设计DNA计算机的实现技术出发,介绍了建造DNA计算机的主要障碍和解决这些障碍的主要措施。最后阐述了由DNA计算引发的元思考。     

中国常染色体显性遗传骨胳石化症(II型)家系突变基因筛查研究初报

为寻找骨胳石化症II的致病基因,从一患该病的家系成员收集血液,制备基因组DNA.应用PCR(聚合链式反应)技术和直接测序分析ClCN7的24个外显子,寻找基因变异.结果表明,除一些内含子中存在个别多态性外,所有成员均未检测到ClCN7基因突变,提示该基因不是本病常见的致病基因,在这个家系中ADOII可能归因于其他基因的突变.     

基因芯片技术及其应用

基因芯片(gene chip)亦称DNA芯片、DNA微阵列，是最近几年才发展起来的一种多学科交叉融合产生的高新技术产品。它是专门用来检测核酸的生物芯片，也是目前应用最广泛的微阵列芯片。基因芯片指的是在固相载体(如硅片、玻片、聚丙烯或尼龙膜等)上按照特定的排列方式，固定上大量已知序列的DNA／RNA片断，形成DNA／RNA微矩阵，将样品基因组DNA／RNA进行体外扩增并掺入标记分子后，与位于微阵列上的已知DNA序列杂交，通过激光共聚荧光检测系统等对芯片进行扫描，检测杂交信号强度，并用计算机软件进行数据的比较和综合分析后，获得样品中大量的基因序列特征或基因表达信息。     

中华鳖种群RAPD分析

选用14个随机引物对中华鳖基因组DNA进行了随机扩增DNA片段多态性（RAPD）分析，14个引物，在8个待检样品中共扩增出714条清晰的DNA片段，片段大小在200～3000bp之间，平均每一引物在每个样品中扩增了6．0条带，统计结果表明，中华鳖群体内平均相似率0．857，总平均带纹频率0．773，遗传变异率为0．227．研究表明，中华鳖为遗传共享度较高的群体。     

中国常染色体显性遗传骨胳石化症(Ⅱ型)家系突变基因筛查研究初报

为寻找骨胳石化症Ⅱ的致病基因,从一患该病的家系成员收集血液,制备基因组DNA.应用PCR（聚合链式反应）技术和直接测序分析ClCN7的24个外显子,寻找基因变异.结果表明,除一些内含子中存在个别多态性外,所有成员均未检测到ClCN7基因突变,提示该基因不是本病常见的致病基因,在这个家系中ADOⅡ可能归因于其他基因的突变.     

虎纹蛙Sox基因的PCR扩增及SSCP分析

本文采用PCR技术,以特异扩增人SRY基因HMG－box保守区的一对引物,扩增了虎纹蛙Sox基因（SRY－box gene）,并对扩增产物进行了SSCP分析。结果雌雄虎纹蛙个体均扩增出一条带,大小为221bp,表明虎纹蛙Sox基因在雌雄个性间无性别特异性。SSCP分析结果显示虎纹蛙Sx基因雌雄个体片段的单链迁移率无差异,而与人的有较大差异,本文为探讨虎纹蛙的性别决定机制及Sox基因的进行提供了分子资料。     

福建6种柚RAPD鉴定分析

以福建省栽培面积较广,果实成熟期不同的渡尾文旦柚、琯溪蜜柚、坪山柚、长泰文旦柚、龙柚、下河蜜柚6种柚为研究对象,用100个10bp的随机引物对6种柚的基因组DNA进行RAPD分析,筛选出能扩增出稳定多态性片段的引物31个,一共扩增出174条片段,其中多态性片段有137个,占78.74%.聚类分析的结果,RAPD标记所反映的6个品种之间的遗传相互关系与传统的分类结果是一致的.