血管生成素-1基因治疗兔心肌梗塞的实验观察

探讨血管生成素_1(Ang1)基因经重组腺病毒介导转移促进心肌缺血区血管形成的作用 .应用共转染 2 93细胞 ,制备纯化Ang1重组腺病毒及LacZ重组腺病毒 .将Ang1重组腺病毒及LacZ重组腺病毒直接注射感染兔冠状动脉结扎后缺血心肌细胞 ,分别应用RT_PCR方法及X_gal染色测定外源基因在转导心肌中的表达 ,用免疫组化及冠状动脉造影方法观察缺血心肌内血管生长及侧支循环形成的情况 ,并用心脏超声检查观测了注射Ang1重组腺病毒后心功能变化 .结果显示重组腺病毒直接注射感染兔缺血心肌后能有效表达目的基因 ,X_gal染色显示LacZ基因转移后第 3、7、14、2 8d注射部位心肌均见蓝染 ,尤以 7d明显 ,RT_PCR测定提示Ang1基因在转移后第 3d心肌中即有表达 ,7、14d仍呈阳性表达 .转移 2 8d后新生毛细血管密度及侧支循环形成明显高于对照组 (P <0 .0 1) .心肌梗塞发生后各组的心功能随时间延长均有所改善但 14d内各组间无明显差异 ,2 8d后Ang1组改善幅度明显高于对照组 (P <0 .0 1) .本实验表明腺病毒介导的Ang1基因在兔缺血心肌中能有效表达 ,促进新生血管形成 ,改善心脏功能 .     

加昧四物汤对SHR心肌组织基因表达谱的影响

本文观察加味四物汤对自发性高血压大鼠（SHR）的心肌组织基因表达谱的影响。提取实验组和对照组SHR心肌组织RNA,用Cy-5、Cy-3逆转录荧光标记制作cDNA探针与表达谱基因芯片杂交,Scan Array4000扫描仪扫描杂交信号荧光强度,ImaGENE3．0软件分析扫描结果,筛选比率在0．5至2．0之间非差异表达基因和比率在0．5到2．0范围之外差异表达基因。结果表明阳性基因重叠有18条,其中高表达的基因有4条,低表达的有14条。该方作用靶点较多,可上调或下调SHR的某些与生物酶、血管活性物质、心肌纤维化、脂肪酸代谢有关基因的表达,这可能是其产生药理作用的重要因素。     

黄酮对力竭运动大鼠心肌抗氧化与细胞凋亡的影响

以健康雄性SD大鼠为研究对象,通过建立灌胃罗汉果叶黄酮(FSGL)的干预力竭性运动大鼠,来探讨不同剂量FSGL对力竭运动大鼠心肌抗氧化酶系及心肌Bcl-2、Bax mRNA表达的影响。结果表明:不同剂量组的大鼠力竭运动后心肌SOD、CAT和GSH-PX活性与力竭运动对照组比较,均呈升高趋势,以中剂量组效果最显著;力竭运动组MDA与中剂量组比较有极显著性差异;与力竭运动组比较,各剂量组Bcl-2基因表达加强,且中剂量组显著高于力竭运动组和低剂量组。力竭运动组Bax基因表达极显著高于安静对照组和中剂量组(P<0.01),同时低剂量和高剂量组Bax的表达显著高于安静对照组(P<0.05)。FSGL各剂量组Bcl-2/Bax比值均升高,以中剂量和高剂量组最显著(P<0.01)。可见,FSGL能有效提高机体的抗氧化能力,明显地抑制因过度训练导致的心肌细胞凋亡程度。     

RNAi特异性抑制FoxO3a对胰岛素抑制缺血再灌注损伤诱导的心肌微血管内皮凋亡的影响

观察FoxO3a基因干扰对胰岛素抑制缺血再灌注损伤诱导的心肌微血管内皮凋亡的影响。分离培养大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs),建立模拟缺血再灌注模型。分别选用胰岛素、FoxO3a小干扰RNA处理细胞。MTT检测CMECs存活率;TUNEL检测CMECs凋亡;检测细胞的caspase-3活性,Western blot法检测FoxO3a、p-FoxO3a(Thr32)、SVV蛋白的表达。结果显示模拟缺血再灌注+胰岛素+FoxO3a siRNA组FoxO3a总蛋白水平明显减少(P0.05);与模拟缺血再灌注+胰岛素组相比,模拟缺血再灌注+胰岛素+FoxO3a siRNA组的存活率下降,凋亡率、caspase-3活性增加,FoxO3a、SVV表达减少(P0.05)。结果 FoxO3a在胰岛素抑制缺血再灌注损伤诱导的心肌微血管内皮凋亡中有一定的作用,且主要通过去磷酸化(失活)调控这一过程。     

光照和黑暗条件下大豆和玉米基因表达差异的初步研究

光照黑暗条件下，植物幼苗的形态建成差异十分明显，以双子叶植物大豆和单子叶植物玉 材料，利用改进的ｍＲＮＡ差异展示技术分析了黄化苗和苗的基因表达的差异，黄化苗和苗基因表达差异可以归纳为“：黄化苗基因特异表达，绿苗基因特异表达，黄化苗基因表达增强，绿苗基因表达增强，黄化革和绿苗基因表达水平和近五咱类型大豆绿苗中基因特异表达类型比黄化苗要多，玉米中则相反，黄化苗基因特异表达类型多于绿苗，试验中还对差异展     

2-十三烷酮和槲皮素诱导棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶组织特异性表达

利用分光光度酶动力学和定量PCR的方法，从蛋白质水平和基因水平上研究了棉铃虫幼虫谷胱甘肽S-转移酶（GST）的组织特异性表达和植物次生物质的诱导表达作用. 结果表明，以1氯2，4二硝基苯（CDNB）为底物检测到的棉铃虫幼虫不同组织GST的活性与其GST mRNA相对表达量的趋势是一致的. 酶动力学活性测定结果表明的棉铃虫各组织GST活性大小的顺序与定量PCR结果表明的各组织GST mRNA相对量大小的顺序都依次为：脂肪体、中肠、头和体壁. 通过培养基混药法研究植物次生物质对棉铃虫幼虫GST的诱导表明，2十三烷酮和槲皮素对棉铃虫幼虫GST活性的诱导与其对mRNA表达量的影响是一致的. 2十三烷酮对GST活性及其GST mRNA表达量的诱导作用比槲皮素强. 说明mRNA的转录量增加是植物次生物质诱导GST活性增加的主要机制. 该结果对于进一步研究植物次生物质诱导作用对棉铃虫对杀虫药剂敏感度的影响具有重要的意义.     

氧和葡萄糖对啤酒酵母细胞核基因pet54表达调控的研究

为研究氧和葡萄糖对ｐｅｔ５４基因表达的调控，构建了ｐｅｔ５４：ｌａｃ Ｚ融合基因，用于监测有呼吸的二倍体菌株中ｐｅｔ：５４基因的表达，实验结果表明氧促进ＰＥＴ５４基因表达，葡萄糖阻遏ｐｅｔ５４基因表达。     

间歇运动对I/R损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

为了探讨间歇运动预处理作用的细胞凋亡调控机制,32只大鼠被随机分成4组:间歇运动训练模型组、一次间歇运动模型组、对照模型组和对照假手术组,运动训练结束后进行在体心脏缺血再灌注实验,采用TUNEL法和RT-PCR技术检测心肌细咆的凋亡及调节基因(Bcl-2、bax)的表达.结果显示:高强度间歇运动训练和一次高强度运动都能减少I/R心肌细胞的凋亡,影响Bcl-2和bax的表达,使Bcl-2/bax增加.说明对心肌细咆调亡的调节是运动预处理的重要机制之一.     

大鼠急性心肌缺血死亡后心肌HIF-1α、Egr-1 mRNA的表达

目的研究大鼠心肌缺血死亡后不同时间点HIF-1α及Egr-1mRNA的表达规律，为因急性心肌缺血死亡的法医学诊断提供客观依据。方法建立SD大鼠急性心肌缺血模型。随机将大鼠分为正常对照组、假手术组、急性心肌缺血试验组。采用免疫组织化学、RT—PCR死亡不同时间点大鼠心肌点HIF-1α及Egr-1mRNA的表达规律。结果大鼠心肌结扎1h缺血心肌中HIF-1α及Egr-1mRNA明显表达，随着死后时间的延长，表达降低，至术后96h仍可测到；正常对照组与假手术组均未测到HIF—1α及Egr-1mRNA表达。结论HIF—1α及Egr-1mRNA可作为诊断因急性心肌缺血死亡的敏感指标。     

胰岛素预处理抗心律失常作用的实验研究

研究胰岛素对心肌缺血再灌注大鼠心律失常的影响，选择SD雄性大鼠，随机分成对照组(CTRL组)，预适应组(IPC组)，缺血／再灌注组(I／R组)卡托普利组(CPT)及胰岛素高剂量组(INSH)、胰岛素低剂量组(INSL)，采用改良推管法建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型，以心律失常发生率为指标，观察胰岛素的心肌预适应保护性作用．结果表明，胰岛素可以显著降低缺血及再灌时室性早搏的发生；降低缺血时室颤、室速的发生率．胰岛素对缺血再灌注心肌具有预适应样抗心律失常作用。     

人表皮生长因子(hEGF)基因的合成、鉴定及植物表达质粒的构建

用PCR方法合成了人表皮生长因子（hEGF）基因，构建了原核表达质粒p 20T-hEGF，研究了原核表达的重组蛋白hEGF的生物学活性，并构建了植物表达质粒，研究表明：无论是融合蛋白GST－hEGF或纯化的hEGF蛋白，都有相当高的生物活性，hEGF蛋白对Hela细胞的增殖有很好的促进作用，免疫小鼠亦能产生很高的免疫应答反应。     

基因芯片技术研究黄秦艽对雪上一枝蒿急性心脏毒性的作用机制

目的:利用芯片技术探讨黄秦艽对雪上一枝蒿所致小鼠心脏急性毒性基因表达的影响及分子机制.方法:25只雄性昆明小鼠随机分为正常对照组、雪上一枝蒿氯仿部位组(CFA)和黄秦艽水提物组(WVBF),通过表达谱对各组心脏差异表达基因进行生物信息学研究.结果:WVBF对CFA诱导的急性心脏毒性具有明显的解毒效果,染毒组与正常组相比,差异基因的功能主要涉及机体内物质的异常代谢,WVBF主要通过干扰CFA引起的内质网应激反应及线粒体功能紊乱过程,提高细胞存活率,使心肌恢复正常功能.结论:黄秦艽可以通过多条信号通路缓解雪上一枝蒿所致的小鼠心肌毒性作用.     

心肺脑复苏期间应用纳洛酮临床价值的探讨

近年来的研究结果表明，阿片受体拮抗剂纳洛酮可以改善缺血再灌注心肌的电节律和收缩舒张性能，抑制缺血再灌注性心律失常的发生，对缺血再灌注心肌具有保护作用。此外，纳洛酮还通过多种机制的综合效应以治疗缺血性脑损伤。因此，我们拟定采用适宜剂量的纳洛酮，对心搏骤停患者进行心肺脑复苏，以期在常规复苏的基础上加用纳洛酮提高复苏成功率。现将结果报告如下：１资料与方法１．１研究对象急诊室和病房发生心搏骤停患者均列为研究对象，４２例符合入选标准，随机分为纳洛酮组及常规组，各组２１例。１．２方法纳洛酮组在常规复苏基础上…     

植物的谷胱甘肽转移酶家族

植物的谷胱甘肽转移酶(Glutathione transferases,GSTs;EC 2.5.1.18)是一个大家族;根据蛋白同源性和基因组织结构,植物GST分为φ、ζ、τ、θ、λ五类;GST主要在胞液中表达,是由约26kDa亚基组成的同源二聚体或异源二聚体,形成疏水的50kDa的蛋白;在不同组织和不同的环境条件下,基因表达差异很大.GST在植物的初级代谢和二级代谢、胁迫耐受、细胞信号等方面行使功能.     

硅藻对不同生态习性桡足类抗氧化相关基因表达的影响

采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术比较3种不同生态习性的桡足类摄食不同浓度的2种硅藻牟氏角毛藻(Chaetoceros muelleri)和小新月菱形藻(Nitzschia closteriumf.minutissima)后,其2种抗氧化相关基因锰超氧化物歧化酶(MnSOD)和谷胱甘肽转移酶(GST)表达水平的变化情况.所用桡足类分别为哲水蚤类的太平洋纺锤水蚤(Acartia pacifica)、安氏伪镖水蚤(Pseudodiaptomus annandalei)和猛水蚤类的日本虎斑猛水蚤(Tigriopus japonicas).结果显示:低浓度的硅藻对太平洋纺锤水蚤和安氏伪镖水蚤中MnSOD和GST基因的表达水平表现出显著的诱导效应,高浓度的硅藻则表现出抑制效应;而不论是低浓度还是高浓度的硅藻均能诱导日本虎斑猛水蚤中MnSOD和GST基因的表达.这表明不同类别的桡足类对硅藻的分子响应存在物种特异性.为评估哲水蚤桡足类对硅藻的影响是否具有适应能力,进而将哲水蚤类的安氏伪镖水蚤在摄食上述2种硅藻条件下连续培养4个世代,并对其每个世代中MnSOD基因的表达水平进行分析.结果显示:牟氏角毛藻饲喂的安氏伪镖水蚤中,第4个世代的MnSOD基因表达水平显著高于第1个世代;而小新月菱形藻饲喂的安氏伪镖水蚤中,后3个世代的MnSOD基因表达水平均显著高于第1个世代.由此推测安氏伪镖水蚤可以对2种硅藻产生遗传适应,并且适应机制可能不同.     

人参提取液对犬心肌缺血再灌注损伤保护作用的观察

本实验以心肌外膜电图和病理改变为指标，对人参提取液在急性心肌缺血再灌注损伤中的作用进行了观察。冠腺结扎２ｈ后给予再灌注。４５ｍｉｎ后开始用药持续至再灌注后１ｈ。冠脉结扎后心外膜电图Ｒ波振幅和Σ.ＳＴ均明显升高，ＮＳＴ明显增加。再灌注后对照组Ｒ波振幅和Σ.ＳＴ急骤下降，病理性Ｑ波数较再灌注前明显增多，治疗组Ｒ波振幅和Σ．ＳＴ下降程度及病理性Ｑ波数明显低于对照组。冠脉结扎后２４ｈ和再灌注后２ｈ心肌超微结构改变治疗组较对照组轻，实验证明人参提取液对缺血心肌有保护作用，能减轻缺血后再灌注损伤．     

降钙素基因相关肽衍生物的制备及降血压功能研究

用PCR法将人的降钙素基因相关肽(calcitonin gene related—peptide,CGRP)基因克隆到表达载体pGEX-4T-2的GST基因后,构建成一个新的表达质粒pGEX—CGRP．另外分别将2个有降压功能的小肽HHL和RPLKPW的基因克隆到CGRP基因后,构建成2个表达质粒pGEX—CGRP-3AA和pGEX—CGRP-6AA．将此3个表达质粒转化到大肠杆菌TG1中,获得3个高表达的融合蛋白：GST—CGRP,GST—CGRP—HHL,GST—CGRP—RPLKPW;通过G1utathione Sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白,测定蛋白浓度,利用自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)来检测蛋白的降血压功能,发现融合蛋白GST—CGRP—HHL具有显著的降压效果,能使舒张压下降8．0kPa,且降压维持时间延长,达到70min以上．     

汉滩病毒M,S基因不同拼接方式原核表达效果比较研究

为了比较汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白(NP)主要抗原位点片段不同拼接方式的原核表达效果，将汉滩病毒76—118株M基因编码G1的片段与S基因编码区5’端约O．7kb的片段连接，克隆入pGEX一4T2，构建嵌合基因原核表达栽体pGEX-4T2-G1S0．7，pGEX-4T2-S0．7G1，在大肠杆菌XLl一Blue中诱导表达GST—G1S0．7或GST—S0．7G1融合蛋白。经IPTG诱导后，ELISA活性测定结果表明，两种融合蛋白均可与抗汉坦病毒NP的mAb特异性结合，融合蛋白GST—G1S0．7还可与抗汉滩病毒糖蛋白的mAb特异性结合。Western blot结果显示，诱导出G1S0．7或S0．7G1与GST的融合蛋白，其中G1S0．7嵌合基因的表达产物降解较少。研究证明：两种拼接方式的嵌合基因均可在大肠杆菌中表达出有生物学活性的融合蛋白，但表达效果不同，为汉滩病毒基因工程疫苗的研究奠定了基础。     

人参皂甙对大鼠缺血再灌注心肌保护作用的研究

研究人参皂甙对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡的拮抗作用及其对缺血再灌注心肌保护作用的机制。用电镜观察心肌细胞的超微结构变化,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞,免疫组化技术和图像分析技术检测心肌细胞内Bcl-2蛋白的表达。缺血再灌注组电镜观察发现,心肌细胞出现典型凋亡结构特征。TUNEL染色结果表明：用人参皂甙保护后的心肌细胞凋亡指数明显下降（P＜0．01）,而心肌细胞内Bcl-2蛋白表达明显升高（P＜0．01）。     

PAMD对缺血性脑损伤Bcl-2和Bax基因表达的作用

探讨蝙蝠葛酚性碱预处理对脑缺血后大脑皮质神经元Bcl-2和Bax基因表达的影响．采用Zea Longa等介绍的线栓阻塞大脑中动脉方法制备大鼠脑缺血模型,并用受试药物术前连续预处理模型大鼠7d．采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法测定假手术组、模型组和蝙蝠葛酚性碱高、中、低剂量、尼莫地平、银杏叶片预处理组大鼠缺血后24h大脑皮质中Bcl-2和Bax的mRNA表达变化．行大脑中动脉闭塞后24h大鼠大脑皮质神经元Bcl-2和Bax的mRNA均被诱导表达,Bcl-2 mRNA表达量下降;而Bax mRNA表达量升高．蝙蝠葛酚性碱预处理7d后,缺血后24h大鼠大脑皮质神经元Bcl-2 mRNA表达水平较模型组明显上调,而Bax mRNA表达于缺血后24h明显下调．蝙蝠葛酚性碱能有效调控缺血脑损伤后大脑皮质神经元Bcl-2和Bax的基因表达水平,从而在缺血性脑损伤中起到神经保护作用．