海藻多肽的提取分离及抗肿瘤活性研究进展

海藻是重要的海洋生物,也是人们食物的重要来源.前期广泛的研究已经证实,海藻含有大量的蛋白质.但由于多肽含量低,在提取纯化时,传统的方法存在一定难度,目前较常用酶解法和化学提取法进行提取,用色谱法和膜分离法进行纯化,从海藻中获取较高纯度的多肽,使用与MS相关的技术对其结构进行鉴定.海藻多肽对抗肿瘤具有较强作用,其作用机制表现在多个方面.本文综述了海藻多肽最新的提取纯化和鉴定方法及抗肿瘤活性的研究进展,为其进一步开发利用提供参考.     

凤尾草提取物的抗肿瘤活性的研究

采用小鼠腋下接种肿瘤细胞法测定凤尾草提取物的抗肿瘤活性、胸腺指数和脾指数,并采用MTT法测定了凤尾草提取物对小鼠脾细胞的增殖活性。结果显示凤尾草提取物对移植性肿瘤(肉瘤S180和肝癌H22)具有显著的抑制作用,可提高胸腺指数和脾指数,对小鼠脾细胞的增殖具有促进作用,并有较好的剂量依赖关系,表明中药凤尾草有可能是通过增强机体的免疫能力来实现其抗肿瘤活性的。     

雷公藤内生真菌的分离及抗肿瘤活性研究

通过对雷公藤植物内生真菌进行分离,对内生真菌抗肿瘤活性进行了研究.研究结果显示,从雷公藤不同器官中共分离出22株不同形态型的内生真菌,其广泛存在于植株的根、茎、叶中,其中植株枝中的分离数量高于根和叶.采用MTr法对内生真菌的体外抗肿瘤活性进行检测,发现大多数菌株均具有不同程度的抑制活性,但抑制活性随作用时间而发生变化.其中有2株菌经24 h反应后对人乳腺癌细胞MCF-7表现出显著的抑制作用;1株菌经24 h反应后对胃癌细胞U937表现出显著的抑制作用;1株菌经24 h反应后对MCF-7细胞和U937细胞均表现出显著的抑制作用:2株菌经过48 h反应后对MCF-7细胞表现出较强的抑制作用,且无论是24 h还是48 h反应均对U937细胞表现出较强的抑制作用.     

半夏中一种抗癌蛋白的纯化及其抗癌活性研究

经硫酸铵分级沉淀、疏水层析和DEAE离子交换层析3种方法从新鲜半夏块茎中分离纯化出一种具抗肿瘤作用的蛋白,命名为APPT,用MTT法、载瘤小鼠实验和流式细胞术研究其抗肿瘤作用.结果显示:APPT是一种分子量大小为12.09 ku的糖蛋白,其含糖量为3.22％;MTT实验结果表明APPT对Sarcoma 180细胞有一定的细胞毒性,同时载瘤小鼠实验证明APPT能明显抑制载瘤小鼠中肿瘤的生长,当APPT处理剂量为0.85 mg/kg、2.30 mg/kg及3.25 mg/kg体重时,其抑制率分别为15.6％、32.1％、36.2％;流式细胞仪结果显示APPT不能诱导Sarcoma 180细胞凋亡,却能抑制Sarcoma 180细胞DNA的合成起始并将大量细胞同步于G0/G1期.表明APPT是半夏总蛋白中具有抑癌活性的成分之一,APPT通过抑制肿瘤细胞DNA合成的起始进而阻止肿瘤细胞增殖而不是诱导细胞凋亡.     

海金沙多糖的分离纯化及抗菌活性

从海金沙中提取水溶性粗多糖,用Sevag法脱蛋白后,经DEAE-纤维素52柱层析和葡聚糖凝胶G-200柱层析可得到纯品,利用纸片法进行了抑菌实验.结果表明:海金沙多糖显示了不同程度的抗菌活性,对普通变形杆菌和稻瘟病病原菌有相对较强的抑制活性.     

蕲蛇组织提取物抗肿瘤活性的初步探讨

蕲蛇为蝰科动物五步蛇,Agkistrodon acutus(Guenther)．产于江西、广东、广西等地．蕲蛇含有溶血蛋白、胆甾醇、氨基酸等有效成分．本研究通过对蕲蛇组织的提取,采用电泳分析方法将提取物进行组织成分分析,应用MTT法(细胞毒实验法)对提取物进行(胃癌—823)细胞毒实验．     

海带中脱落酸的分离纯化及高效液相色谱分析

探索了海带（Laminaria japonica）脱落酸的分离纯化条件,获得最适分离纯化方法为：常温组织匀浆,80%甲醇溶液浸提,乙酸乙酯萃取,硅胶脱色和纯化.在此基础上,利用反向高效液相色谱的方法对样品进行定性定量分析,结果表明样品中含有脱落酸,含量为30.5-60.5μg/kg.这为海藻脱落酸的分离纯化及其活性研究奠定了基础.     

细辛多糖的分离纯化与免疫活性研究

本文对细辛(Asarum heterotropoides Fr.Var.mandshuricum(Maxim) kitag)中多糖进行了分离纯化以及初步的免疫活性研究.沸水提取细辛粗多糖,经80%醇析、Sevag法脱蛋白、DEAE-纤维素离子交换层析对粗多糖进行纯化得多糖级分A-1.5-水、A-1.5-0.1M、A-1.5-0.3M、A-1.5-0.5M、A-4-水、A-4-0.3M,并对级分A-1.5-0.3M做了进一步的研究.经Sepharose CL-6B分子筛层析测定其分子量约为4万.高效液相色谱(HPLC)法测定其单糖组成为半乳糖醛酸(74.7%)、阿拉伯糖(9.7%)、木糖(7.1%),此外还有痕量的半乳糖、葡萄糖醛酸存在.说明A-1.5-0.3M是一种以酸性糖为主的杂多糖.淋巴细胞转化试验结果表明细辛多糖A-1.5-0.3M对小鼠脾T、B淋巴细胞的体外增殖有明显的促进作用.     

细辛多糖的分离纯化与免疫活性研究

本文对细辛(Asarum heterotropoides Fr.Var.mandshuricum(Maxim)kitag)中多糖进行了分离纯化以及初步的免疫活性研究。沸水提取细辛粗多糖,经80%醇析、Sevag法脱蛋白、DEAE-纤维素离子交换层析对粗多糖进行纯化得多糖级分A-1.5-水、A-1.5-0.1M、A-1.5-0.3M、A-1.5-0.5M、A-4-水、A-4-0.3M,并对级分A-1.5-0.3M做了进一步的研究。经Sepharose CL-6B分子筛层析测定其分子量约为4万。高效液相色谱(HPLC)法测定其单糖组成为半乳糖醛酸(74.7%)、阿拉伯糖(9.7%)、木糖(7.1%),此外还有痕量的半乳糖、葡萄糖醛酸存在。说明A-1.5-0.3M是一种以酸性糖为主的杂多糖。淋巴细胞转化试验结果表明细辛多糖A-1.5-0.3M对小鼠脾T、B淋巴细胞的体外增殖有明显的促进作用。     

制备高效液相色谱分离纯化系统的研制与开发

介绍一种基于柱层析技术、高效液相色谱技术于一体的计算机智能控制全自动、高性能的化学物质纯化系统。该系统属于高压制备高效液相色谱,采用模块化设计模式,各模块经由计算机工作站软件统一协调,实现进样、分离、馏分收集自动化。该系统应用于中药复杂成分分离、提取和纯化的效率高、馏分损失少、样品回收率高。     

桑叶多糖的分离纯化及其抗凝血活性的研究

为了研究桑叶多糖不同组分在体外的抗凝血活性,采用水提醇沉法提取桑叶粗多糖,聚酰胺进行脱色和脱蛋白。用DEAE sepharose CL-6B 和 sepharose CL-6B 对桑叶多糖进行纯化,得到5种水溶性多糖组分(MPS-1、MPS-2a、MPS-2b、MPS-2c和 MPS-3)。单糖检测结果表明：桑叶多糖主要是由半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖和甘露糖等组成。体外抗凝血活性检测显示5种桑叶多糖组分均能延长活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)和凝血酶时间(thrombin time,TT)、而对凝血酶原时间(prothrombin time,PT)影响不显著,说明它们是通过影响内源性途径或共同途径而发挥抗凝血作用;与对照相比,MPS-2b在试验浓度范围内对 APTT 和 TT 的效果达到极显著,表明 MPS-2b 有潜力开发成抗凝血活性物质。     

青葙根乙酸乙酯相提取物化感活性及抑菌活性的研究

以水稻(Oryza sativa L.)等6种植物和油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiovum (Lib.)de Bary)等4种植物病原病菌为受试材料,通过生物测定的方法研究了青葙(Celosia argenteas Linn.)根乙酸乙酯相提取物化感活性及抑菌活性.结果表明:与对照相比,在250～4 000 μg/mL浓度范围内,提取物对水稻和千金子(Leptochloa chinensis (Linn.) Nees)种子的萌发以及三叶鬼针草(Bidens pilosa L.)幼苗的鲜重不产生显著影响,而在相同的浓度范围内,对烟草(Nicotiana tabacum L.)、丁香蓼(Ludwigia prostrata Roxb.)和千金子幼苗的根长、千金子幼苗的苗高以及醴肠(Eclipta prostrate L.)和丁香蓼幼苗的单株鲜重产生显著抑制作用,对6种植物相对应的其它生长特性方面,只有在高于250 μg/mL浓度时才能受到显著抑制.在25～400 μg/mL的浓度范围内,提取物对油菜菌核病病菌的生长不产生显著抑制作用,在最高浓度400 μg/mL时,其抑制率仅为16.56%.只有在浓度大于100 μg/mL时,提取物才能显著抑制烟草灰霉病(Botrytis cinerea Pers.)、小麦赤霉病(Fusarium graminearum Schw.)和杨树溃疡病(Dothiorella gregaria Sacc.)病菌的生长,当提取物浓度为400 μg/mL时,其抑制率分别为35.64%、33.24%和24.19%.     

制备型高效液相色谱分离装置的研制

立足于国产材料和设备，成功地研制了一套较为实用的制备型高效液相色谱分离装置。根据不同的制备量和分离要求，该装置可以使用不同内径及不同柱长的制备柱，用于生化产品的制备分离，制备量可达数毫克至数百毫克。     

三七茎叶提取物中人参皂苷Rb3的分离及指纹图谱

以三七茎叶提取物为原料，采用反相液相色谱柱进行分离纯化，通过考察流动相组成、配比、上样量和流量对分离效果的影响，确定了适宜的工艺操作条件．在此奈件下得到了人参皂苷Rb3，纯度达99．37％．进而以提纯的皂苷单体为标准品，采用外标法对其进行定量分析，并测得原料中含有人参皂苷Rb3质量分数为38．25％．同时又采用了高效液相色谱-质谱联用技术，建立了三七茎叶提取物的指纹图谱．     

制备型高效液相色谱法分离纯化绿原酸

采用制备高效液相色谱技术,从杜仲叶提取物中分离纯化得到高纯活性成分绿原酸.对制备色谱的洗脱方式、洗脱剂组成、浓度、洗脱速度等参数进行优化,提出并应用了流动相速度梯度洗脱方法.最佳操作条件为:采用流速梯度进行洗脱,流速先为28 mL/min,然后为45 mL/min;流动相为15%的有机酸B和 0.1%的有机酸E(体积分数);测定波长为254 nm;进样体积为10 mL;进样量为2500 mg.通过该工艺分离纯化,制备回收率为83.3%,相对标准偏差为3.1%,绿原酸的纯度达98.61%,同时可得到杜仲叶黄酮、桃叶珊瑚甙等副产品.     

牛初乳中IgG1、IgG2的制备色谱分离与纯化

以二甲基十二烷基苄基溴化胺为预处理物质，采用DEAE Sepharose F.F离子交换色谱和Sephacryl S-200HR凝胶过滤色谱分离纯化了牛初乳中的IgG1和IgG2用亲和高效液相色谱法测定了IgG1、IgG2的含量。     

鹿茸多肽的分离纯化及药理活性

采用凝胶过滤层析、 离子交换层析以及高效液相方法, 从马鹿鲜鹿茸分离得到了一种多肽, 其在SDS-PAGE电泳上显示为一条带, HPLC图谱为单峰, 质谱显示其相对分子量为3　095.1. 氨基酸组成分析结果表明, 此多肽主要含有缬氨酸、 丙氨酸、 赖氨酸和 甘氨酸, 没有半胱氨酸. 经FDNB法测定, 其N-末端氨基酸为缬氨酸. 活性检测表明, 该多肽能够明显促进表皮细胞和BRL肝细胞株的增殖.     

北虫草培养残基中虫草素的提取纯化及抗肿瘤活性

以北虫草固体培养残基为实验材料,比较闪式提取、超声波提取和超高压提取培养残基中虫草素的效果,用陶瓷膜过滤提取液,获得虫草素粗提液,利用高速逆流色谱分离制备虫草素,通过LC-MS/MS对产物结构进行鉴定,并验证了虫草素对小鼠S180肉瘤的抑制作用。结果显示,超高压提取培养基中虫草素较好,高速逆流色谱分离纯化条件是以V(乙酸乙酯)∶V(正丁醇)∶V(水)=2∶3∶5的两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,流速3.0mL/min,主机转速900r/min,分离温度28℃,以此分离条件经一步洗脱,高速逆流色谱收集馏分,其中峰Ⅲ产物经HPLC检测纯度达97.6%,结构经LC-MS/MS鉴定为虫草素。从100g北虫草培养残基中可制备得虫草素181.90mg,并对其活性验证发现剂量为100mg/kg时小鼠S180肉瘤瘤重抑制率为64.48%。     

硒矿区土壤中真菌的分离培养及抗肿瘤活性筛选

利用单菌落挑选与划线培养技术,从硒矿区土壤样品中分离纯化真菌。通过摇床发酵培养,提取制备发酵样品。采用MTT法,用MDA-MB-231细胞、Hela细胞、SMMC-7721细胞测试发酵样品的抗肿瘤活性。从采自湖北恩施全球唯一独立硒矿床区的6个不同土样中分离真菌73株。其中,对人宫颈癌Hela细胞的IC_(50)小于90μg/m L的菌株32株,对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的IC_(50)小于90μg/m L的菌株13株,对人肝癌SMMC-7721细胞的IC_(50)小于90μg/m L的菌株9株。这些活性菌株为筛选抗肿瘤天然产物提供了良好的药源菌株。     

紫球藻多糖的分离纯化及抗菌活性

从紫球藻中提取的水溶性粗多糖,用Sevage法脱蛋白后,经DEAE-纤维素52柱层析可得到纯品．利用圆形纸片法对紫球藻多糖提取物进行了抑菌实验．结果表明,紫球藻多糖提取物对稻瘟病病原菌和赤皮病病原菌有较强的抑制作用,其抗细菌活性与抗真菌活性没有明显差别,对稻瘟病病原菌的最小抑菌浓度为6．25mg／mL．