大黄素体外抗柯萨奇病毒B_4的实验研究

为研究大黄素的体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)作用,以病毒唑为阳性对照药,用MTT法从药物抑制病毒增殖、直接杀灭和抗吸附3种方式评价了大黄素抗CVB4效果,并用实时定量PCR检测了大黄素对CVB4基因mRNA表达的影响,用空斑法测定了大黄素对病毒感染细胞不同时间空斑形成率的影响.结果表明:大黄素不能直接杀灭病毒或阻断病毒吸附细胞,但能显著抑制病毒在细胞内的生物合成,其IC50=(14.10±0.74)μM,TI=(4.35±0.60),能显著降低细胞内CVB4基因mRNA表达(p0.05),其抑制作用发生在病毒进入细胞0~4 h.故大黄素主要通过抑制CVB4穿入细胞后复制环节发挥抗病毒作用,并具有时间依赖性和剂量依赖性.     

比格犬自发疾病的病理组织学研究

为了解比格犬组织器官的自发疾病,为药物的安全性评价提供背景资料,采用病理组织学方法对8～12月龄的36只比格犬主要脏器进行了观察,发现,肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织器官均有不同程度的自发病变。     

柯萨奇病毒与病毒性心肌炎临床研究新进展

柯萨奇病毒(CV)是正链RNA病毒,为小RNA病毒科肠道病毒属。柯萨奇病毒感染人体可引起急性或慢性心肌炎,病毒进入咽部大量繁殖后进入血中引起病毒血症,由血流进入心脏毛细血管进入心肌纤维,两侧心室心内膜下部位损伤极为敏感。急性心肌炎常出现于全身感染后数周,其病程可呈急性或慢性倾向,柯萨奇病毒可能从以下几方面引起人体病毒性心肌炎(VMC)。     

中药复方板蓝根颗粒抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药复方板蓝根颗粒进行了体外抗柯萨奇病毒B4(CVB4)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:中药复方板蓝根颗粒对CVB4无直接灭活作用,但能抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成和阻止CVB4的吸附,其半数抑制浓度(IC50)分别为1129.00和1130.44μg/mL,治疗指数(TI)均为2.78.在100～1600μg/mL范围内复方板蓝根颗粒与CVB4抑制率呈明显的量效关系(P<0.01),在1600μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖>50%.研究表明中药复方板蓝根颗粒能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用发生在阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

紫球藻胞外多糖抗柯萨奇B3病毒活性

采用离子交换凝胶Q Sepharose Fast Flow,以NaCl梯度洗脱,将紫球藻胞外多糖(ESPS)分离成3个组分ESPS0、ESPS1.0和ESPS1.6,分别占粗多糖总量的44．2％(以质量计,下同),20．3％和16．4％．ESPS0中未测出蛋白,ESPS1.0和ESPS1.6的蛋白含量分别为7．8％和7．6％;ESPS0、ESPS1.0和ESPS1.6的硫酸基含量分别为16．3％,11．6％和8．3％．利用体外模型测试了3个组分的抗CVB3病毒的活性．发现ESPS0,ESPS1.0和ESPS1.6抑制CVB3病毒的半数抑制质量浓度分别为2．03,0．51和0．53mg／L,治疗指数IT值分别为61．6,245．1和235．8;在相同条件下,阳性对照药物病毒唑的半数抑制质量浓度和IT值分别为31．25mg／L和16．0．结果表明,3种组分抗CVB3活性均高于病毒唑。     

中药大青叶有效单体抗柯萨奇病毒作用

采用中药大青叶有效单体进行体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的研究,通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:大青叶有效单体1     

连花清瘟胶囊抗柯萨奇B_4病毒作用的实验研究

采用中药连花清瘟胶囊进行了体外抗柯萨奇病毒B4（CVB4）的研究.通过观察病毒引起的细胞病变效应（CPE）、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明：中药连花清瘟胶囊对CVB4有直接灭活作用,并能阻止CVB4的吸附细胞和抑制CVB4在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度（IC50）分别为410.00,343.13和410.32μg/mL,治疗指数（TI）分别为2.67,3.20和2.66.其中抗病毒吸附作用最强（P〈0.01）.在100～1600μg/mL范围内连花清瘟胶囊与CVB4抑制率呈明显的量效关系（P〈0.05）,在500μg/mL时能抑制CVB4在Hep-2细胞内的增殖大于50%.研究表明中药连花清瘟胶囊能有效地抑制CVB4在Hep-2细胞中的增殖,其抗病毒作用表现为直接灭活病毒,阻断病毒吸附细胞和抑制病毒进入细胞之后的复制增殖.     

中药大黄抗柯萨奇病毒作用的实验研究

采用大黄1～4#有效提取部位进行了体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的研究.通过观察病毒引起的细胞病变效应(CPE)、MTT法检测细胞活性,作为考核药物抗病毒作用.结果表明:大黄1～4#有效提取部位对CVB3无直接灭活作用,也不能阻止CVB3的吸附,而能抑制CVB3在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度(IC50)分别为34.7、33.0、33.9、34.3 mg/L,治疗指数(TI)分别为7.2、7.6、7.6、7.2.与病毒唑(IC50=30.6 mg/L,TI=6.6,P＞0.01)相当,优于大黄提取液(IC50=48.5 mg/L,TI=4.7,P＜0.01).在2.5～120 mg/L范围内1～4#部位与CVB3抑制率呈明显的量效关系(P＜0.01),120 mg/L时能完全抑制CVB3在Hep-2细胞内的增殖.所以大黄1～4#有效提取部位安全高效地抑制CVB3在Hep-2细胞中的增殖.     

比格犬生化指标及不同性别的比较

目的建立比格犬血液生化参考值。方法采用Beckman全自动生化测定仪对51只比格犬的27项生化指标进行测定,并进行统计分析和差异显著性检验。结果比格犬仅有2项脂类指标雌雄之间差异显著。结论多数比格犬的生化指标雌雄之间差异不显著,血液生化指标的一致性较好。     

以柯萨奇B3病毒3C蛋白酶为靶点的体外药物筛选模型的建立及应用

建立以柯萨奇B组3型病毒3C蛋白酶(CVB3-3C)为靶点的药物筛选模型,并筛选新型抑制剂。使用原核表达模型实现CVB3-3C蛋白酶体外重组表达。经Ni-NTA亲和层析、阴离子交换层析纯化获得高纯度CVB3-3C蛋白。应用荧光共振能量转移法检测蛋白酶活性,建立药物筛选模型。对768种化合物进行筛选,获得了2种对CVB3-3C蛋白酶有较强抑制作用的化合物(MDCE-A008和MDCE-A043),IC50值分别为(60.61±6.26)μmol/L、(105.7±14.88)μmol/L。建立的CVB3-3C蛋白酶药物筛选模型为获得有效抑制剂提供了技术保证。     

心肌宁冲剂对感染柯萨奇B_3病毒小鼠的保护作用

本文采用4W龄Babl/c小鼠,腹腔内感染,CB_3病毒并给于心肌宁治疗。结果表明:心肌宁冲剂对感染CB_3病毒的小鼠可明显提高其体内中和抗体水平,减少细胞坏死率,明显减弱病毒毒力,病理学检查显示:心肌变性坏死显著减轻,炎性渗出减少,纤维组织增生较早且明显。     

比格犬关节滑液代谢组学研究

目的 基于代谢图谱作为量化关节腔滑液内代谢物的工具,发现比格犬关节发育过程中的代谢规律。方法 收集幼年和成年比格犬关节滑液,运用液质联用(LC-MS)非靶向代谢组学手段,分析不同年龄段比格犬关节腔滑液代谢组学特征及其与发育的相关性。结果 与同性别成年比格犬相比,幼年雄性比格犬关节滑液中参与蛋白质、氨基酸、矿物质代谢和ABC转运的代谢物含量较高;幼年雌性比格犬中与氨基酸、碳水化合物代谢和ABC转运相关的代谢物含量较高。结论 氨基酸、蛋白质、矿物质及碳水化合物的代谢能力与犬骨关节发育及关节健康密切相关。     

弓形虫RH株感染比格犬动物模型的建立

目的 建立实验用犬人工感染人源强毒力型弓形虫的发病模型。方法 将3只76日龄人工哺乳、正压隔离器内生长的实验用比格犬腹腔注射1.5×10⁷个RH株速殖子,每日2次检测直肠体温、采集口腔拭子、直肠拭子,感染8 d后(8 dpi)安乐死所有动物。利用PCR检测拭子和血液中的弓形虫B1基因,利用荧光定量法检测8 dpi犬主要组织脏器中弓形虫529 bp重复片段的拷贝数,并对主要脏器进行组织病理学检测。结果 结果表明3只实验犬在4～5 dpi均出现了一过性体温升高,轻微腹泻;2～6 dpi的咽拭子或肛拭子中能检测到弓形虫B1基因的核酸,且肛拭子阳性率高于咽拭子;8 dpi剖检后,均产生较多腹水;肝组织均出现明显的炎性变化;盲肠和肝中的弓形虫529 bp片段的核酸拷贝数最高。结论 利用SPF级比格犬腹腔接种弓形虫RH株,主要引起一过性体温升高和短时腹泻,可导致肝组织变性和坏死,发病模型较温和。     

心肌宁冲剂体外抗柯萨奇B_3病毒的试验研究

本试验采用细胞培养方法,检测心肌宁药物对感染CB_3病毒的心肌细胞和Vero细胞的保护作用。结果表明该药可明显阻止CB_3病毒吸附细胞表面、进入细胞及产生直接的灭活作用;明显降低培养细胞的病变程度,对Vero细胞和心肌细胞具有明显的保护作用,其保护率分别为87.4％和90.2％,对感染的心肌细胞,心肌宁明显减弱病毒的毒力,其作用呈良好的量效关系。     

成年比格犬血液生理生化指标的测定

目的　探讨成年比格犬(Beagle)的血液细胞计数及血液生化指标的特性。方法　采用日本光电MEK - 5 1 2 6血球计数仪、荷兰半自动生化仪对7月龄及8月龄的比格犬血液细胞计数及血液生化指标进行测定。结果　7月龄比格犬的Hgb、TP、ALP和Ca ,雌性高于雄性;UA、LDH -L、Cl和Mg指标,雄性高于雌性;8月龄比格犬的中性细胞和Cre ,雄性高于雌性;CK、TP、LDH -L、Ca、K、Na ,雌性高于雄性。年龄之间比较:8月龄比格犬的单核细胞、TiBil、TG、GPT、TP、A1b、Ca、Na比7月龄的高,G1u、CK比7月龄的低。其它指标差异不显著。结论　成年比格犬的某些血液生理生化指标在不同性别和年龄段上存在差异。总体指标比较稳定,反映出该群体是一个遗传性比较稳定的封闭群体。     

比格犬和食蟹猴的麻醉抢救

在药物安全性评价的过程中,许多试验操作都需要进行动物麻醉。但是,麻醉是一个复杂,并伴有风险的过程,麻醉意外时有发生。2010年就曾发生2例麻醉意外,其中比格犬不间断的抢救了8 h,食蟹猴救治了2 d,最终动物康复。     

Balb/C鼠柯萨奇病毒B3心肌炎模型中病毒接种浓度的研究

选取 ( 4～ 6)周龄雄性 Balb/ C小鼠 ,病毒感染组腹腔接种不同浓度的 CVB3病毒液 ,对照组注射 RPMI1 640液 ,7d后测定血清中和抗体效价及乳酸脱氢酶 ( LDH)活性 ;测定心肌组织的病毒滴度及观察心肌组织病理学改变。结果显示 :( 1 )病毒感染组鼠血清中和抗体效价及乳酸脱氢酶活性显著高于正常对照组 ,且随接种 CVB3浓度增加 ,L DH活性增高。( 2 )随接种 CVB3浓度增高 ,小鼠心肌组织病毒滴度增加不明显 ;( 3)病毒感染组心肌组织出现不同程度的灶性病理改变。 ( 4 )接种病毒浓度与鼠心肌炎发病率之间不存在剂量反应关系。     

实验用比格犬戊巴比妥钠麻醉并发症的观察及处理

目的总结比格犬戊巴比妥钠麻醉并发症及其处理方法。方法选择64例使用戊巴比妥钠麻醉的比格犬,观察麻醉后各种并发症的发生情况并进行处理。结果64例戊巴比妥钠麻醉的比格犬出现并发症7例,其中治愈6例,死亡1例。结论比格犬戊巴比妥钠麻醉后并发症的及时正确处理,可降低比格犬戊巴比妥钠麻醉后并发症导致的死亡。     

病毒性心肌疾病的基因时空表达特征

目的 研究病毒性心肌炎到扩张型心肌病全病程基因时空表达谱动力学特征.方法 用含有8 000个基因克隆的基因芯片检测CVB3反复感染Balb/c小鼠后第0,7,21天及第3,6,9个月心肌组织基因表达,并用SOM对差异性表达的基因进行聚类分析.结果（1）第10,14,15,19,20类基因在第7天时表达上调,第21,22类基因在第21天表达上调,而第23,24类基因在第7、21天表达均上调;（2）第6,7,11,12类基因在第7天时表达下调,第4,5类基因在第21天表达下调,而第2,3,8类基因则在第7,21天表达均下调;（3）第1,16类基因在第7天时表达下调,而第21天后则表现为上调;（4）有些基因如转移生长因子β结合蛋白、β-2微球蛋白,CD 53抗原却表现为持续性表达上调,而α-1微球蛋,ninjurin 1,舒血管素27,cytokine inducible SH2-containing protein 2则出现持续性表达下调.结论 建立了小鼠CVB病毒性心肌炎及扩张型心肌病全病程基因表达谱动力学模式,为进一步了解其分子发病机制提供全新的视野.     

复合中草药制剂提高实验比格犬繁殖率的研究

目的观察复合中草药制剂对雌性比格犬繁殖率的影响。方法选用l一2岁雌性比格犬24只,随机分为雌性实 验组和雌性空白对照组。雌性实验组比格犬饲喂基础日粮和复合中草药制剂,雌性空白对照组饲喂基础日粮。两组均采 用重复配种方式进行配种,统计各组雌性比格犬的发情率、受孕率、产仔率以及平均每窝产仔数。结果雌性实验组与空 白对照组相比较,雌性比格犬的发情率由66．67％提高到100％;受孕率由71．43％提高到91．67％;产仔率由80．00％提高 到90．91％;平均产仔数由6．80只提高到lo．18只。结论复合中草药制剂能显著地提高雌性比格犬的繁殖率。