应用核型多角体病毒载体在家蚕和家蚕培养细胞中高…

将人尿激原ｃＤＮＡ分别插入家蚕核型多角体病毒转移载体ｐＢＫ２８３和ｐＢＦ４中，构建成两个重组质粒。所构建的这两个重组质粒与野生型家蚕核型多角体病毒ＤＮＡ共转染家蚕培养细胞，经病毒斑实验筛选出含ｐｒｏ－ＵＫ ｃＤＮＡ的稳定重组病毒株ＢｍＮＰＶ－ｐｋ１和ＢｍＮＰＶ－ｐｋ２。将此两株蛋白平板溶圈测活法和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析细胞培养上清及细胞和家蚕的体液及组织，证实均有ｐｒｏ－ＵＫ表达。家蚕培养细胞的     

家蚕核型多角体病毒gp64基因的定位及克隆

以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ的膜表面糖蛋白基因ｇｐ６４作为探针，对经不同内切酶酶切的家蚕核型多角体病毒基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，发现ＢａｍＨⅠ酶切产生的４．２ｋｂ和７．６ｋｂ片段呈阳性杂交，经ＤＮＡ片段回收，将４．２ｋｂ片段进行了克隆     

家蚕核型多角体病毒orf121克隆以及非翻译区分析

家蚕核型多角体病毒(BmNPV)orf121是Ac145的同源基因,同为杆状病毒11 K基因家族,但其功能尚不明确.克隆了BmNPV orf121基因并对其侧翼序列以及转录时相进行分析.结果发现orf121与GenBank发表的T3株一致,orf121编码的蛋白N端含有一段疏水性很强的氨基酸,C端有一个几丁质结合域基序...     

形成多角体家蚕重组病毒通用转移载体构建

从家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）通用转称载体ｐＢＫ２８３和粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）转移载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３系列出发，构建了一个７．２ｋｂ能形成多角体且可以用于克隆含不同读码框外源基因的ＢｍＮＰＶ通用转移载体系列ｐＢＭＸ３．ｐＢＭＸ３系列以ＢｍＮＰＶ多角体结构基因上游的１．９ｋｂ和下游１．３ｋｂ的片段作为与ＢｍＮＰＶ基因组进行体内同源重组的同源序列；ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３系列的ＳＸＩＶ双启动子用于外源基因的表达；ＡｃＮＰＶ的多角体基因作为重组病毒形成多角体的基因．以ＢｍＮＰＶ－ＬａｃＺ（ｏｃｃ－ｇａｌ＋）为出发株病毒，ｐＢＭＸ３系列的重组病毒筛选有ｏｃｃ＋和ｇａｌ－两个遗传标记     

重组斜纹夜蛾核型多角体病毒的构建和初步筛选

斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multinucleocapsid nucleopolyhedroviruse,SpltMNPV)日本株(C3)(又命名为SpltMNPV Ⅱ)是Kamiya等从日本全国各地野外感病幼虫收集、分离到189个SpltMNPV克隆中繁殖率和毒力极强的一种新型病毒株.本研究在SpltMNPV Ⅱ的基础上构建了egt缺失的,多角体启动子启动的,BmK ITa1成熟肽和增强型绿色荧光蛋白(egfp)融合表达的重组移载体psk-△egt-pph-BmK ITa1-egfp,并通过共转染初步筛选出重组病毒感染的荧光细胞.成果为进一步研制高效重组SpltMNPV生物杀虫剂提供了可行性.     

茶毛虫核型多角体病毒防治茶毛虫应用技术

本文简要介绍汉中市茶毛虫发生为害基本情况,重点就茶毛虫核型多角体病毒防治茶毛虫致死原理及应用技术作了较详细的总结,对指导茶毛虫生物防治有重要的现实意义。     

利用AFLP-银染法筛选与抗甘蓝黑腐病性状连锁的分子标记

利用ＡＦＬＰ－银染法在一对花椰菜抗、感黑腐病的近等基因系中筛选到四个与抗黑腐病性状、一个与感黑腐病性状连锁的ＤＮＡ 分子标记．对其中一个４００ｂｐ 的抗病标记进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交检测,结果表明该标记在抗病品系中存在明显的杂交信号,而在感病品系中无杂交信号．该标记测序后,通过Ｇｅｎｂａｎｋ 进行同源性检测,发现其与拟南芥菜ＢＡＣ克隆Ｆ７Ｎ２２ 部分序列有７５％ 的同源性．该ＢＡＣ克隆位于拟南芥菜５ 号染色体的黑腐病抗性基因（ｒｘｃ２）附近．这意味着该标记可能与甘蓝黑腐病抗性基因紧密连锁．     

柞蚕核型多角体病毒fgf基因的克隆和分析

为获得柞蚕NPV的全基因组序列,在柞蚕尸体中分离纯化柞蚕NPV,提取其基因组DNA,分别建立ApNPV DNA的HindⅢ和SalⅠ基因文库．对插入片段进行测序,经过同源性分析发现一个与人源fgf基因相似的基因,其读码框含有185aa．核苷酸和氨基酸同源性比较的结果表明：在genebank中没有同源性极高的序列,是个新基因;柞蚕NPV的fgf基因与云杉卷叶蛾NPV的同源性较高,分别为56．1％和45．9％,而与家蚕NPV及AcNPV的同源性相对较低,说明柞蚕NPV与家蚕NPV在进化上亲缘关系较远．该基因的克隆为进一步研究其在病毒感染过程中的作用打下基础．     

家蚕重要经济性状基因分子标记定位及克隆研究

江苏大学主持的“家蚕重要经济性状基因分子标记定位及克隆研究”日前通过省科技厅组织的鉴定．该研究报道家蚕抗核型多角体病毒(NPV)、耐氟化物、多产卵、荧光茧色4类经济性状的分子标记；在家蚕上发现抗DNV相关基因BmPKCI(AY860960)、抗NPV相关基因s3a(AY705974)、感NPV相关基因BmSOP2(AY763110)，同时，建立了家蚕分子标记辅助育种技术体系，2003年-2004年经过4个省实验室鉴定及安徽省3个农村点饲养，茧质、丝质良好。     

中国家蚕抗菌肽A基因片段的初步分离

从中国家蚕蛹中提取基因组ＤＮＡ，根据中国家蚕抗菌肽Ａ的ｃＤＮＡ序列设计引物，从基因组ＤＮＡ中扩增天然抗菌肽基因，得到７５０ｂｐ，１１００ｂｐ，１６００ｂｐ左右的３个片段，用内引物扩增法，初步证实中国家蚕抗菌肽Ａ基因至少存在７５０ｂｐ，１１００ｂｐ左右大小的两个拷贝。     

经大肠杆菌感染的中国家蚕cDNA文库的构建

用建立非表达文库的方法,从大肠杆菌感染后９ｈ的中国家蚕的ｍＲＮＡ合成ｃＤＮＡ片段,重组入噬菌体λｇｔ１０的ＥｃｏＲＩ的位点之间,所构成的基因非表达文库库容量为２×１０６重组子,经大肠杆菌Ｃ６００与Ｃ６００ｈｌｆ菌株平皿测定,重组率为７６％．     

RAPD tagging of a salt tolerant gene in rice

A salt tolerant rice mutant was obtained through tissue culture. The inheritance of salt tolerance in F2 population of mutant crossed with its original variety under salt stress was studied. According to the standard, the ratio of salt tolerant: sensitive was about 3:1 suggesting that there was a major gene related to salt tolerance in the mutant. By RAPD analysis with 220 10-mer primers, the gene was tagged by a 1.0 kb DNA fragment named OPS12-10 which was located on chromosome 7. The genetic distance between the major salt tolerant gene was 16.4 cm.     

基于RAPD标记的15种嵩草属(Kobresia Willd.)植物遗传关系

嵩草属(Kobresia Willd.)植物由于其形态结构的多样性及种内变异式样的复杂性,至今仍被认为是分类学上的"困难属".因此,对于该属系统学其他方面的证据,尤其分子方面的研究则显得极为重要和迫切.本文选用21个RAPD随机引物调查了15种嵩草属植物的遗传关系.结果表明:15种嵩草属植物聚为3类,认为嵩草组和异穗嵩草组的建立是比较自然的,而单穗嵩草组的划分并不自然.此外,分子结论并不支持前人发表的K.maquensis为独立新种,建议降为K.setschwanensis的异名.     

对三点自交法构建分子标记连锁图谱的改进

对三点自交法构建分子标记连锁图谱进行了改进，使分子标记连锁图谱构建更加精确，并结合F2群体的有关数据进行了模拟计算，证实该方法的可行性，结果表明改进的方法比原有方法更加有效。     

A statistical method for genetic mapping of sterility genes that exhibit epistasis in remote hybridization of plants using molecular markers in an F2 population

Estimation of the position and effect of sterility genes is an important problem to be solved to understand the sterility mechanism in remote hybridization in plants.In this study,a maximum likelihood (ML) method was used for estimation of the position and effect of sterility genes that exhibit epistasis in an F 2 population using the distorted segregation of markers.The ML solutions for recombination fraction and viability were obtained via an expectation-maximization algorithm.The results of Monte Carlo simulations showed that the estimates of recombination fraction and viability were consistent with their true values.The bias and standard deviation of parameters indicated that a larger sample size,closer linkage and lower viability of sterile genes led to better estimates of the parameters involved.A subset of marker data of the F 2 population derived from a single cross between the rice japonica cultivar Nipponbare and the indica cultivar Kasalath was analyzed using this method.Eight sterility genes were identified on chromosomes 1,3,6,8 and 10,and significant epistasis was detected among four pairs of sterility genes.     

Identification of incompatible groups in sweet potato(Ipomoea batatas(L.) Lam .)with RAPD markers

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＳｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ（Ｉｐｏｍｏｅａｂａｔａｔａｓ（Ｌ．）Ｌａｍ．）ｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｒｏｐ．Ｉｔｈａｓｔｈｒｅｅｓｔｒｉｋｉｎｇｃｈａｒａｃｔｅｒｓ，ｉ．ｅ，ｏｕｔｂｒｅｄ，ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙａｎｄｖｅｇｅｔａｔｉｖｅｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ［１］．Ｐｌａｎｔｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｉｓａｋｉｎｄｏｆｐｒｏｐｅｒｔｙｗｈｉｃｈｉｓａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄｏｖｅｒａｌｏｎｇｐｅｒｉｏｄｏｆｔｉｍｅｉｎｔｈｅｃｏｕｒｓｅｏｆｅｖｏｌｕｔｉｏｎｕｎｄ…