杀虫剂的选择作用对小菜蛾表达蛋白质的影响

运用蛋白质双向电泳分析技术,通过对成虫蛋白质的提取,分离出水溶性的蛋白质组分,对比研究了溴氰菊酯抗性品系、杀螟丹抗性品系、杀虫双抗性品系和敏感品系小菜蛾成虫的蛋白质在表达上的差异．通过对电泳图谱分析,在澳氰菊酯的抗性和敏感品系中抉得了8个特异的蛋白质斑点,pH5．0～8．1,相对分子质量为46000～23000;在抗杀螟丹品系中得到了8个特异斑点,pH4．6～81,相对分子质量为92000～18000;在杀虫双的执性品系和敏感品系中产生了6个特异斑点,pH5．5～7．1,相对分子质量为31000—28000．虽然抗性品系是敏感品系通过多年的室内逐代的药剂选掸获得的,但是在杀虫刺选择压力作用下所引起的表达蛋白质的差异是否与浪氰菊酯、系螟丹和杀虫双的抗性有关还需进一步证实．     

小菜蛾对杀虫双抗性遗传的RDA分析

采用代表性差异分析法（RDA Representational difference analysis)初步研究了小菜蛾两个品系，敏感品系和抗杀虫双近等基因系之间基因组的差异，用敏感品系作为驱动扩增子（driver)，抗杀虫双近等基因系作为检验扩增子（tester)，通过四轮消减杂交后，得到两个差异片段，范围在150bp至300bp之间，初步判断这些片段何能与小菜蛾杀虫双抗性的遗传分子基础相关。     

溴氰菊酯胁迫下小菜蛾差异表达基因的筛选与分析

通过双向cDNA RDA,即分别以敏感品系为检测子(tester)、抗溴氰菊酯品系为驱赶子(driver)和以抗溴氰菊酯品系为检测子(tester)、敏感品系为驱赶子(driver)筛选2种品系中的差异表达基因,初步分析小菜蛾敏感品系和抗性品系之间的遗传差异.经过3轮消减杂交后,将所得的差异片段克隆于PMD 18-T载体,氨苄筛选阳性克隆,经菌落PCR鉴定后送样测序.得到2条序列与GenBank数据库中的部分已知序列有一定同源性,其中1条序列与编码S3a蛋白基因有较高的同源性.     

抗Cry2Ad毒素小菜蛾抗菌肽的分离、纯化及特性研究

通过比较饲喂Cry2Ad诱导的抗Cry2Ad毒素品系和敏感品系小菜蛾抗菌肽的含量和抑菌活性,结果显示,抗Cry2Ad小菜蛾被喂食Cry2Ad毒素后,体内抗菌肽含量显著增高,抑菌活性更强。说明小菜蛾抗菌肽与小菜蛾对Cry2Ad毒素的抗性有一定的相关性。通过SDS-PAGE电泳检验抗菌肽分子量,得到抗Cry2Ad毒素小菜蛾抗菌肽有一分子量约为7.8 KDa特别条带,采用截留量10 KDa的超滤管和阴、阳离子交换柱层析对抗Cry2Ad小菜蛾抗菌肽进行分离、纯化,得到具有抑菌活性的抗菌肽。     

小菜蛾泛素基因的克隆及序列分析

设计了一对简并引物,从小菜蛾Plutella Xylostella(L.)抗溴氰菊酯品系和敏感品系的雌雄成虫基因组中分别克隆了泛素基因的编码区,GenBank登录号分别为EU28778,EU28779,EU28780,EU28781.序列分析表明,该基因的长度为228bp,编码的多肽由76个氨基酸组成.不同品系和不同性别的小菜蛾泛素基因的核苷酸序列、氨基酸序列等均存在差异,其中敏感品系雌雄成虫间差异较大,序列相似性为81.1%;抗性品系雌雄成虫间差异较小,序列相似性为97.8%.推测这些差异可能与小菜蛾抗药性的形成有关.因而为进一步研究小菜蛾抗药性形成机制和遗传机理奠定了基础.     

利用AFLP-银染法筛选与抗甘蓝黑腐病性状连锁的分子标记

利用ＡＦＬＰ－银染法在一对花椰菜抗、感黑腐病的近等基因系中筛选到四个与抗黑腐病性状、一个与感黑腐病性状连锁的ＤＮＡ 分子标记．对其中一个４００ｂｐ 的抗病标记进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交检测,结果表明该标记在抗病品系中存在明显的杂交信号,而在感病品系中无杂交信号．该标记测序后,通过Ｇｅｎｂａｎｋ 进行同源性检测,发现其与拟南芥菜ＢＡＣ克隆Ｆ７Ｎ２２ 部分序列有７５％ 的同源性．该ＢＡＣ克隆位于拟南芥菜５ 号染色体的黑腐病抗性基因（ｒｘｃ２）附近．这意味着该标记可能与甘蓝黑腐病抗性基因紧密连锁．     

溴氰菊酯抗感品系小菜蛾成虫差异表达蛋白的鉴定

通过对小菜蛾Plutella xylostella(L.)抗溴氰菊酯品系和敏感品系成虫双向电泳图谱的比较,找到8个差异明显的点,并结合质谱分析技术和数据库信息检索最终鉴定出7个蛋白.其中包括2个代谢相关蛋白,2个调控蛋白,1个结构分子蛋白,其余2个蛋白质功能皆不明确.这些在抗性或敏感品系中差异表达蛋白质的发现,为进一步研究小菜蛾抗药性形成机制和抗性相关蛋白的寻找奠定了基础.     

对白粉病敏感、抗性栽培小麦及杂交后代的蛋白质组分析

感病小麦京411、抗病小麦Brock及杂交后代近等基因系感染白粉菌后,发现京411感病,Brock和近等基因系抗病,因此白粉病抗性呈显性．对上述3种小麦的叶片进行蛋白质组分析,在感小麦的京411中有一个8kD／pI 5．3的特异蛋白,该蛋白在抗病品种Brock和杂交后代近等基因系中不存在,后者的蛋白质谱型与Brock相同．上述结果表明,幼苗抗白粉病特性的遗传与蛋白质谱型的遗传相类似,此结果也许可以为生产上筛选抗白粉病小麦品种提供生化依据．     

溴氰菊酯胁迫下小菜蛾泛素化蛋白的分析与鉴定

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western Blot和LC MS/MS技术,对在溴氰菊酯胁迫下的小菜蛾(Plutellaxylostella)四龄幼虫的泛素化蛋白(Ubiquitinated protein)的组分进行分析,结果表明小菜蛾溴氰菊酯敏感品系与小菜蛾溴氰菊酯抗性品系里的泛素化蛋白表达量有显著差异.本实验成功证明了在药剂胁迫下小菜蛾泛素化蛋白存在表达上的差异,该研究结果为分析昆虫细胞中泛素的功能及其对昆虫生理、生化和环境胁迫等方面的调节作用提供了参考.     

近亲交配对小菜蛾产卵量、孵化率的影响

本文观察了25±10C条件下小菜蛾杂交品系与近亲交配品系的产卵规律及卵的孵化率。结果表明,两种饲养方式的小菜蛾在产卵总量、产卵前期、产卵期、雌成虫寿命等方面无明显差异,分别为83．1-239．3粒/雌、1．6-3．2 d、6．8-11．1 d、10．7-15．4 d。但近亲交配的小菜蛾到一定代数后出现卵的孵化率下降、雌成虫不产卵的个体,即不育个体增多的现象。在本文观察中,近亲交配的小菜蛾连续培养到第3代时,卵的孵化率为71．1％,显著低于杂交系的93．9％;第4代自交系的孵化率为60．1％,亦显著低于第4代杂交系的96．1％。第3、4代近亲交配品系的小菜蛾雌成虫不育率分别为9．0％、17．9％。     

小菜蛾抗药性研究进展

小菜蛾作为各种十字花科蔬菜的重要害虫，对多种有机氯、有机磷、氨基甲酸酯；拟除虫菊酯、苯甲酰脲类昆虫生长调节剂、农用抗生素甚至植物源杀虫剂都产生了不同程度的抗药性。本文就小菜蛾的抗药性的形成与发展、杀虫剂之间的交互抗性、抗性的生理生化机制以及分子、遗传机制等方面研究进展进行了论述。     

不同烟草品种罹黑胫病后几种酶活性的变化

文章就黑胫病表现不同抗性的两烟草品种接种黑胫病菌后,对其叶片内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)的活性进行了测定。结果表明,接种后抗病品种的PAL、PPO及POD活性水平皆明显高于对照,感病品种的PAL、PPO及POD活性水平也高于对照,但接种后抗病品种的PAL、PPO及POD活性水平前期增加速度明显高于感病品种。另外,接种后抗病品种和感病品种与各自对照相比皆未出现新的酶带,只是几个酶带的强弱发生了变化。     

抗白粉病小麦近等基因系DNA甲基化的MSAP分析

应用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术检测小麦抗白粉病代换系6A／6V与感病品系京411的近等基因系NILs,及其亲本6A／6V和京411的基因组DNA甲基化变化．结果表明,NILs的整体甲基化水平（22．9％）略高于6A／6V（21．2％）,低于京411（23．4％）．分析其甲基化模式发现,NILs相对京411甲基化水平降低条带比例（2．89％）明显高于甲基化提高条带（0．55％）,而相对抗病亲本6A／6V,NILs甲基化水平降低条带比例（2．96％）明显低于甲基化提高条带（4．20％）,说明NILs的整体基因表达水平低于6A／6V,高于京411．     

玉米纹枯病抗性与防御酶关系的研究

以玉米抗、感纹枯病的4个品种为材料，研究了玉米2个抗性品种和2个感病品种在接种玉米纹枯病菌后苯丙氯酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）和超氧化歧化酶（SOD）活性的动态变化，结果发现，在玉米接种R．solani后，POD、PAL、PPO和SOD活性有不同程度的增加，抗病品种瓦试13和沈试28比感病品种沈试29和掖单13增加的幅度大，酶活高峰出现的早，并发现玉米接种纹枯病菌后SOD活性均表现为先增加然后降低的趋势．     

白背飞虱取食为害后水稻植株光合作用能力的变化与抗虫性的关系

本文研究了不同抗虫水稻品种在白背飞虱为害后稻株光合作用能力的变化与抗虫性的关系。结果表明 ,稻株受害后 :感虫品种 (TN1和汕优 6 3)光合作用速率和叶绿素含量下降率比抗虫品种 (N2 2 )明显 ;汕优 6 3和 N2 2品种的二磷酸核酮糖 (Ru BP)羧化酶的含量和活力均增加 ,TN1品种在为害 5天时 Ru BP羧化酶的含量和活力明显增加 ,而在为害 10天时反而低于健康稻株 ;感虫品种受害后叶片光合产物滞留比抗虫品种多 ,即感虫品种光合产物向叶鞘、茎、分蘖和根等部位的转移量少于抗虫品种。     

抗性小菜蛾乙酰胆碱酯酶对有机磷及氨基甲酸酯不敏感性研究

福州地区田间小莱蛾Plutella xylostessa L.已对水胺硫磷、克百威、敌敌畏和三唑磷产生高抗,抗性倍数分别为23.52、28.41、16.06和23.43倍.抗性小菜蛾幼虫体内AchE的Km和Vmax值分别为敏感185和0.63倍.水胺硫磷、甲基异柳磷、克百威、敌敌畏对敏感小菜蛾AchE的Ki值分别为抗性的58.75、30.33、198. 87和36.32倍.作者认为AchE对有机磷及氨基甲酸敏感性的降低应是小菜蛾对该类杀虫剂产生抗性的重要机制.     

Proteomic analysis of blast-resistant near-isogenic lines derived from japonica rice,var. Yunyin,infected with Magnaporthe oryzae

Rice blast is one of the most devastating dis- eases in the world and outbreaks occur frequently. The differences in protein expression between blast resistant and susceptible near-isogenic lines （NILs） of japonica rice var. Yunyin infected with Magnaporthe oryzae were ana- lyzed using proteomics, indicated that 67 different proteins were identified from 75 obtained proteins using the matrix- assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry technique. Seven specific expression proteins, 43 up-regulated proteins and 17 down-regulated proteins were identified among the 67 proteins. The bioinformatical analysis demonstrated that these 67 different proteins were involved in many biological physiological processes including five proteins related to photosynthesis, 25 pro- teins related to metabolism, six proteins related to anti- oxidants, 10 proteins related to protein synthesis and modification, five proteins related to signal transduction,four proteins related to adversity stress and 12 non-func- tional proteins. These identified proteins were directly or indirectly related to stress. Five proteins related to different physiological processes were selected. Their cDNA sequences were predicted and their expression patterns were analyzed using real-time PCR, demonstrated that the genes would response to M. oryzae and the response blindingly different between blast resistant and blast sus- ceptible NILs.     

抗松针褐斑病湿地松体内氧化酶的变化

松针袍斑病是湿地松上的重要病害，分析湿地松的９个抗病无性系和４个易感株２年生针叶中过氧化物酶和多酚氧化酶的活性，结果表明湿地松针叶中过氧化物酶活性很高，多酚氧化酶活性相对较弱，而且抗病植株的过氧化物酶和多酚氧化酶活性都明显高于感病植株，过氧化物酶活性与多酚氧化物酶活性之间呈明显正相关，相关系数０．９，０湿地松的１年生针叶多酚氧化酶和过氧化物酶生都非常低，而且在抗与感病针叶间酶活性无明显差别，用病原     

抗药性二斑叶螨实验种群的发育与生殖力研究

系统研究了二斑叶螨(Tetranychus urticae)抗甲氰菊酯品系和敏感品系实验种群,在26℃下的生长发育和生殖情况,并通过组建2品系的生命生殖力表,用种群生命表参数分析了抗性种群与敏感种的生态适合度差异。研究表明:敏感品系(S)平均寿命为21.94 d,平均单雌产卵量为49.72粒;抗性品系分别为18.01 d和34.67粒。抗甲氰菊酯品系(R)的发育历期、寿命缩短以及产卵量下降,与敏感品系(S)相比较差异显著。抗甲氰菊酯品系的净生殖率(10.635 5)显著低于敏感品系(18.038 7)。抗甲氰菊酯品系的内禀增长率(rm)、周限增长率(λ)和种群加倍时间(p.d.t)分别为0.2368、1.267 2和2.927 1,但与敏感品系的内禀增长率、周限增长率和种群加倍时间进行比较差异不显著。     

影响抗药性变化几个因子的研究

本文用玻片浸沾法测定棉花红蜘蛛(普通红叶螨—Tetranychus telariusLinn和中华红叶螨T.Chinensis Lo)对E—1059的抗药性变化。试验结果表明,营养条件的变动可以导致抗性的变化,一般杂草上棉叶螨较棉花上的敏感;不同种的敏感性也不同,在棉花上,T.telarius比T.chinensis抗性强;在抗药性的季节性变化中,以7月下旬～8月上旬达到最高峰,8月中旬后又开始下降,形成两头低中间高;在虫体内胆碱酯酶的敏感性,抗性品系降低十分明显,而用E—1059处理后,酶的活性受到不同程度的抑制(从33.3％～100％)。