三个品系小型猪Ⅱ型糖尿病模型的比较研究

目的比较三个品系小型猪对高糖高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病模型的敏感性,为我国小型猪在Ⅱ型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法4~5月龄巴马小型猪、五指山小型猪和中国农大小型猪各6头,以4头中国农大小型猪为对照,同步开展高糖高脂饲料喂养试验,试验周期8个月。每月称1次体重,测定血糖、血清胰岛素含量,每2个月进行1次静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT),测定脂质代谢相关指标。结果巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料比较敏感,在饲喂5~6个月后,开始出现糖代谢异常,表现为显著肥胖、血清胰岛素升高和胰岛素敏感性下降。至实验后8个月,巴马小型猪和五指山小型猪各有1头发展为糖尿病,分别有3头和2头出现糖尿病前期症状。中国农大小型猪对高糖高脂饲料诱发糖尿病相对不敏感,实验期间空腹血糖水平、血清胰岛素含量、胰岛素敏感指数和IVGTT一直无显著变化,仅在实验后7个月开始表现肥胖,8个月出现胰岛素敏感性减低。三个品系小型猪在高糖高脂饲喂后,血脂相关指标(TG,CHO,HDL-C,LDL-C)普遍升高,以巴马小型猪升高幅度最大。结论巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病比较敏感,品系内个体差异较大。中国农大小型猪相对不敏感。这一结果为进一步的Ⅱ型糖尿病相关基因分析和高敏感家系培育研究提供了基础资料。     

三个品系实验用小型猪部分血液生化指标比较

目的检测广西巴马小型猪、五指山小型猪和中国农大小型猪三个品系实验用小型猪的血液生化指标并进行比较。方法选用4月龄广西巴马小型猪和中国农大小型猪,5月龄五指山小型猪,用日立-7600型自动生化分析仪检测三个品系小型猪的血液生化指标,对同一品系雌、雄小型猪的测定值及对3个品系小型猪的13项指标进行组间比较。结果三个品系小型猪的血液生化测定值比较接近。在13项检测指标中,广西巴马小型猪的ALT、BUN低于其他两个品系(P<0.05),五指山小型猪的TG高于而ALP低于其他两个品系(P<0.01)。雌雄小型猪之间除广西巴马小型猪的BUN差异有显著性(P<0.05)外,其余各项指标雌雄间差异不显著(P>0.05)。结论同一品系小型猪的大部分血液生化测定值不受性别影响;3个品系小型猪的血液生化测定值接近。     

实创巴马小型猪疑似糖尿病敏感个体筛选实验

目的筛选疑似糖尿病敏感小型猪。方法测定79头(10-14月龄)实创巴马小型猪的体重指数、糖耐量, 以及空腹血清GLU、TG、TC、HDL-c和LDL．C值,以空腹血糖值和糖耐量试验120 rain血糖值为主要依据,同时参考 其他相关检测指标,选择疑似糖尿病敏感小型猪。结果选择2对小型猪开始繁殖实验。     

全身麻醉对巴马小型猪空腹血糖测定的影响

目的 探讨全身麻醉对高糖高脂饲料诱导的2型糖尿病巴马小型猪空腹血糖的影响。方法 巴马小型猪16头随机分为2组每组8头,对照组为正常饲料组,实验组为高糖高脂饲料诱导组。对16头巴马小型猪分别在全身麻醉前后测定空腹血糖,麻醉前后的血糖值进行组内、组间统计分析。结果 两组小型猪在麻醉前后空腹血糖值差异显著,高糖高脂饲料组麻醉后空腹血糖值升高与对照组差异极显著。结论 全身麻醉后巴马小型猪空腹血糖值明显升高,高糖高脂诱导的巴马小型猪2型糖尿病动物模型空腹血糖升高更为显著。     

广西巴马小型猪生长期日粮蛋白与能量水平需要的测定

目的本试验对生长期(45~117日龄)的广西巴马小型猪进行了生长饲养实验。方法试验一:选择40头40日龄断奶广西巴马小型猪,按平均体重随机分为四组(10头/组)。在45~80日龄,四个组分别喂以含蛋白质水平为13%、14%、16%、18%的日粮;在81~117日龄,仍以上面的40头广西巴马小型猪为实验材料,分别喂以含蛋白质水平为11%、12%、13%、14%的日粮。试验二:选择40头40日龄断奶广西巴马小型猪,按平均体重随机分为四组(10头/组)。分别喂以日粮1(CP15%、DE12.95 MJ/kg),日粮2(CP15%、DE13.37 MJ/kg),日粮3(CP13%、DE12.95MJ/kg)和日粮4(CP13%、DE13.37MJ/kg)。结果在45~80日龄,上述不同蛋白质含量的日粮对广西巴马小型猪的总增重影响差异不显著(P>0.05);在81~117日龄,蛋白水平为12%、13%、14%的日粮对小型猪的总增重影响差异不显著(P>0.05),但蛋白质水平为11%的日粮组总增重显著低于前面三组(P<0.05)。试验二的结果表明,4种不同能量与蛋白组合的日粮对生长期(45~75日龄)小型猪的总增重影响差异不显著(P>0.05)。结论本实验结果表明广西巴马小型猪生长期(45~117日龄)日粮营养需要水平为粗蛋白12%~13%,消化能12.95 MJ/kg。日喂料量为体重的2.0%~2.25%即可维持广西巴马小型猪的生长期(45~117日龄)较缓慢的生长速度。     

贵州小型猪和广西巴马小型猪部分血液生化指标筛查

目的对现有小型猪种群进行筛查,期望发现可遗传性疾病,并进而开展遗传选育研究。方法未去势的广西巴马小型猪60头(♂21,♀39)和贵州小型猪50头(♂7,♀43),前腔静脉采血、检测13项血液生化指标。以超出(x±2s)范围为异常值,并对异常值进行重复检测和分析。结果共获得了血清生化指标异常个体42头,其中,贵州小型猪19头,广西巴马小型猪23头。经复测和分析,选择37号和103号猪,分别作为动脉粥样硬化抗性和易感性选育种猪。结论经血清生化指标筛查和统计分析,获得2头动脉粥样硬化抗性和易感性选育候选种猪。     

高糖高脂饲料诱导的小型猪肥胖模型

目的 探讨高脂高糖饲料对巴马小型猪脂肪分布与血液生化指标的影响。方法 巴马小型猪14头,实验组8头,为本实验室培育的2型糖尿病易感小型猪,饲喂高脂高糖饲料30周;对照组6头饲喂正常饲料。30周后测定体型系数、CT扫描脂肪含量、采集血液检测生化指标,比较实验组与对照组的差异。结果 高脂高糖饲料饲喂30周后实验组动物与对照组动物在体质量、体质指数(BMI)、脂肪总含量差异显著(P<0.05),内脏脂肪含量差异极显著(P<0.01);血液生化指标中胰岛素、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三脂与对照组相比差异极为显著(P<0.01),低密脂蛋白胆固醇与对照组相比差异显著(P<0.05)。此外,实验组巴马小型猪血清蛋白、肌酸酐与对照组差异显著(P<0.05);尿酸、尿素与对照组差异极显著(P<0.01),显示实验组小型猪呈现肾损伤。结论 高脂高糖饮食能够引起巴马小型猪脂肪堆积,内脏脂肪堆积尤为明显,血液生化指标呈高脂血症伴有肾功能的损伤。     

小型猪采血技术

目的在应用小型猪的实验研究中,经常需要采集血液用以进行各种指标的检测。在对五指山小型猪、广西巴马小型猪和中国农大小型猪的长期实验过程中,我们摸索总结出一些采血经验:在小型猪清醒状态下,借助保定吊床,可以比较方便地从耳静脉、后肢外侧隐静脉采集血液;在牢固保定或麻醉状态下,可以从前腔静脉采集血液;也可以通过手术在颈内静脉留置导管进行反复采血。     

中国小型猪实验动物化培育及种质特异性研究

1　小型猪品系繁多 ,各具特色我国地形、生态条件多样 ,经历代人工和自然选择 ,使我国小型猪品种具有得天独厚的资源和条件。主要的品种有 :海南五指山小型猪 (WZSP)、云南小耳猪、贵州香猪、广西巴马香猪、甘肃合作猪、青海藏猪等。五指山小型猪具有体型小、性成熟早、遗传稳定、可近亲繁殖的特点 ;云南小耳猪具有体型较小、性成熟早、体为黑色等特点 ,通过近亲繁殖 ,已获得近交 2 0代仔猪 ,已分化为体重大小、毛色、体态不一的 8个家系 ;香猪、巴马香猪具有性成熟早、遗传比较稳定、产仔率较高、体毛分别为黑色和白色占 90 %左右等特征…     

巴马和贵州小型猪在冠状动脉支架评价中的应用

目的通过比较成年巴马小型猪和贵州小型猪的冠状动脉分型、血管弯曲度、左、右冠状动脉直径和植入支架直径,长期饲养后动物体重变化,探讨两种品系小型猪在冠状动脉支架评价中的应用。方法巴马小型猪9只,贵州小型猪12只,雌雄兼用。常规麻醉动物后,称重,行冠状动脉造影,目测冠脉直径,以过膨胀方式植入支架,再次行冠脉造影观察支架贴壁情况。术后常规饲养动物,饲喂阿司匹林和氯吡格雷抗凝。于支架植入后26周,再次麻醉动物,称重,行安乐死。比较两次实验动物体质量变化,由介入医师根据冠状动脉造影图像分析冠脉分型、血管弯曲度,采用图像分析软件测量植入支架段冠状动脉的最小直径和参考直径。结果两组动物均完成支架植入实验并存活至实验终点,死亡率0%。经过26周饲养,巴马小型猪的体质量变化显著小于贵州小型猪（P〈0.001）。两种小型猪冠状动脉均为右优势型,血管弯曲度〈30°。巴马小型猪的左冠状动脉前降支的参考直径和最小直径以及植入支架型号与贵州小型猪无统计学差异（P〉0.05）。巴马小型猪的右冠状动脉的参考直径明显小于贵州小型猪（P〈0.05）,最小直径和植入支架型号无统计学差异（p〉0.05）。结论利用活体、动态的冠状动脉造影分析,发现巴马和贵州小型猪的成年动物冠状动脉分型均一且与人类一致;血管弯曲度小、易于进行介入导管操作;主要分支直径适合植入直径2.75 mm或3.0 mm规格的冠脉支架。在慢性实验饲养过程中,成年动物的体重变化不大。因此,两种品系小型猪均适合冠脉支架评价研究。     

固力本钙离子在广西巴马小型猪中注射效果初探

目的以广西巴马小型猪作为实验动物,探讨固力本钙离子用于静脉注射、肌肉注射和皮下注射的可行性。方法去甲肾上腺素静脉滴注巴马小型猪12次(用量2.0 mg/kg体重);固力本钙离子静脉滴注巴马小型猪和用过去甲肾上腺素的实验猪(1粒钙离子的稀释液分别为100 mL~200 mL的生理盐水、葡萄糖水和蒸馏水);固力本钙离子肌肉注射、皮下注射巴马小型猪(1粒钙离子的稀释液分别为100 mL~200 mL的生理盐水、葡萄糖水和蒸馏水);对照巴马小型猪静脉滴注生理盐水50 mL。结果钙离子静注过程中实验猪大多会表现心率、呼吸减缓,实验猪无异常反应,表现安静;钙离子静注稀释液用蒸馏水较好;以2.3 mg/mL的浓度滴注较合适。静注去甲肾上腺素过程中实验猪心率、呼吸加快,反应激烈;经去甲肾上腺素静注后的巴马小型猪对钙离子静脉注射的反应则完全不同,表现安静。钙离子肌肉注射和皮下注射实验猪均无不良反应。结论通过对巴马小型猪的实验,初步确认固力本钙离子可用于静脉注射、肌肉注射和皮下注射。     

广西巴马小型猪促生长激素释放激素成熟肽的克隆及序列分析

目的扩增广西巴马小型猪促生长激素释放激素(GHRH),分析其序列结构特点。方法以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,用特异性引物扩增GHRH外显子3,再用引物延伸悬挂PCR法扩增GHRH成熟肽,纯化后,连接、转化到大肠杆菌,筛选阳性克隆,测序。结果经测序证实广西巴马小型猪GHRH外显子3及其成熟肽的基因序列与相关文献报道一致。克隆得到的广西巴马小型猪GHRH序列全长为132 bp,其中外显子3基因序列长105bp。同源性比较发现,广西巴马小型猪GHRH外显子3基因序列与GenBank(NCBI)中报到的猪GHRH外显子3相比,同源性为97.14%,有3处发生碱基变化。结论本实验成功克隆了广西巴马小型猪GHRH成熟肽序列。     

广西巴马小型猪生长素(Ghrelin)cDNA的克隆及序列分析

目的扩增广西巴马小型猪生长素(Ghrelin)cDNA序列,分析其序列结构特点,为进一步从分子水平上对广西巴马小型猪的生长发育提供理论依据,也为日后构建原核表达载体、研究Ghrelin基因的生物功能奠定基础。方法以广西巴马小型猪胃底组织总RNA为模板,用特异性引物扩增Ghrelin的cDNA,纯化连接pMD18-T载体后转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆体,鉴定后测序。结果经测序证实克隆得到的广西巴马小型猪Ghrelin cDNA序列全长为357 bp,与相关文献报道一致。同源性比较发现,广西巴马小型猪Ghrelin cDNA基因序列与GenBank报道的猪相应序列同源性为99.7%,只有一处发生碱基突变。结论本实验成功克隆了广西巴马小型猪Ghrelin cDNA。     

广西巴马小型猪雄性初情期和精液性状的分析

目的探讨广西巴马小型猪雄性初情期和精液品质性状。方法将15、20、25、26、27、28、29、30、45、55、62、75日龄巴马小型猪睾丸制作成切片,检查其曲细精管中是否已经产生精子;采集巴马小型猪精液,检测其物理性状和化学成分。结果初步判断雄性巴马小型猪的初情期为45日龄左右。巴马小型猪精液的主要物理性状:射精量107.5 mL±39.0 mL、酸碱度7.6±0.3、精子密度0.732亿/mL、精子活率0.754±0.079、精子活力0.376±0.168、精子畸形率0.256±0.159。主要化学成分:Na+1.56 mg±0.13 mg/mL、K+0.78 mg±0.06 mg/mL、Cl-1.62 mg±0.18 mg/mL、磷脂8.7 mg±0.2 mg/100 mL、果糖117.4 mg±81.0 mg/100 mL、柠檬酸45.6 mg±77.6 mg/100 mL。     

广西巴马小型猪肌肉生长抑制素(Myostatin)cDNA克隆和序列分析

目的通过RT-PCR扩增广西巴马小型猪Myostatin cDNA序列,经过连接、转化、克隆测序后,与NCBI中发表的猪Myostatin序列进行同源性比较,分析广西巴马小型猪Myostatin的cDNA序列结构特点及与其他物种间的聚类关系,为日后构建Myostatin高效表达载体及进一步研究Myostatin对广西巴马小型猪肌肉生长的影响奠定基础。方法以广西巴马小型猪的肌肉组织总RNA为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),利用合成的特异性引物,扩增得到巴马小型猪肌肉生长抑制素(Myostatin)cDNA的全序列。该扩增片段经纯化后,连接到pMD18-T载体上扩增,经一系列鉴定后,测序。结果本实验克隆到巴马小型猪Myostatin基因cDNA序列长度为1128 bp,与GenBank报道的猪Myostatin基因cDNA序列同源性高达99.7%,与人、奶牛、家鼠等物种的cDNA序列间同源性可达到92.3%以上,证明Myostatin基因具有较高的保守性。同时发现广西巴马小型Myostatin基因cDNA序列有三处存在碱基突变,两个为同义突变,一个为错义突变。     

HbA1c 不适于小型猪血糖控制状态的监控

摘要:目的 糖化血红蛋白( HbA1c)是临床上常用的监测血糖控制状态的指标。 我们在巴马小型猪糖尿病模型的研究中,通过检测血液糖化血红蛋白含量,探讨 HbA1c 这一指标能否用于小型猪血糖控制状态的监控,以期为小型猪糖尿病研究提供基础数据。 方法 将 14 头小型猪随机分为 3 组,分别为对照组、高脂饲喂+链脲佐菌素( HFD+STZ)组和高胆固醇高脂饲喂+链脲佐菌素( HCFD+STZ) 组,对照组常规饲料喂养,HFD+STZ 组和 HCFD+STZ 组在高脂 / 高胆固醇高脂饲喂 3 个月后静脉注射 90 mg / kg 的 STZ,此后继续高脂 / 高胆固醇高脂饲喂 6 个月,实验期间每月检测空腹血糖( GLU) 、空腹胰岛素( INS) 、糖化血红蛋白、肝和肾功能指标( ALT、AST、CRE、BUN) 。 结果 2 个实验组每组各有 4 头小型猪在应用 STZ 后血糖显著升高,并持续至实验结束。 而 HbA1c 测定值各组之间差异不大。 其原因推测与小型猪红细胞对葡萄糖通透性较低有关。 结论 HbA1c 不适于小型猪血糖控制状态的监控。